HPLC-PAD外标法及UPLC-MS/MS内标法测定乳及乳制品中三聚氰胺的含量

分别建立高效液相色谱-二极管阵列法(HPLC-PAD)、超高压液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定乳及乳制品中三聚氰胺含量的方法。利用HPLC-PAD外标法进行样品中三聚氰胺的初筛,利用UPLC-MS/MS法进行确证,以13C315N3-三聚氰胺为同位素内标定量。乳制品经乙腈、乙酸锌、盐酸溶液提取,质谱检测时,样品再经MCX固相萃取柱富集净化。HPLC-PAD法的定量限为4mg/kg,UPLC-MS/MS的定量限为0.05mg/kg;HPLC-PAD的添加回收率为95.7%～102.3%,UPLC-MS/MS的添加回收率为91.3%～95.7%(基质匹配曲线校正),两种方法的相对标准偏差(RSD)分别为1.98%～4.51%,1.60%～3.27%。     

高效液相色谱测定生鲜乳及乳制品中三聚氰胺的方法研究

建立用高效液相色谱.二极管阵列法测定生鲜乳及乳制品中的三聚氰胺的检测方法.本实验参照FDA三聚氰胺检测方法、NY/T 1372-2007,探讨检测三聚氰胺的色谱条件和优化生鲜乳及乳制品中的三聚氰胺前处理方法.最后确立了有效的检测方法,采用硫酸铵(0.02mol/L):甲醇=94:6(V/V)作为流动相,203nm为检测波长.样品溶液在0.1～150μg/ml之间均具有良好的线性关系,最低检测限为0.5mg/kg,回收率均在91%以上,回归方程式为y=2.37×105x 1.21×104及相关系数r=0.9998.此法操作简便、快速、灵敏、准确,样品处理简便易行,适于测定生鲜乳及乳制品中的三聚氰胺.     

乳与乳制品中三聚氰胺快速检测方法

研究了高效液相色谱法检测乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法。采用三氯乙酸和乙腈提取后,用高效液相色谱测定。该方法的检出限为0.5 mg/kg,相对标准偏差为1.09%~1.99%,回收率在95.15%~99.12%之间。与GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》第一法高效液相色谱法(HPLC法)相比,处理时间缩短了约3 h。     

液相色谱-质谱/质谱法测定乳与乳制品中的三聚氰胺

目的建立乳与乳制品中三聚氰胺的液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)测定方法。方法样品用三氯乙酸溶液和乙腈提取,经阳离子交换固相萃取柱(SPE)净化后,用液相色谱-质谱/质谱法测定和确证,外标法定量。结果在0.01～0.50μg/ml范围内呈线性相关,相关系数为0.999 2,方法测定低限(LOQ)为0.01 mg/kg。在0.01～0.10μg/ml添加浓度范围内,方法回收率为80.4%～107.4%,相对标准偏差(RSD)≤9.4%。结论本方法操作简便,灵敏度、准确度、精密度可满足乳与乳制品中三聚氰胺的检测要求。     

高效液相色谱法检测乳及乳制品中的呋喃苯烯酸钠残留

建立乳及乳制品中呋喃苯烯酸钠残留检测的高效液相色谱方法。采用乙腈提取,正己烷液液净化,高效液相色谱法测定。结果表明：在10.0～200.0ng/mL 线性范围内,色谱峰面积和呋喃苯烯酸钠浓度的线性关系良好,相关系数大于0.9996,回收率为83.5%～91.9%,检测限为20.0μg/kg。本方法简便、快速,适合大量进出口样品的监控和检测。     

UPLC-MS/MS法测定乳制品中的氯霉素类药物

建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定乳与乳制品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的检测方法。样品经乙腈及乙酸乙酯提取、正己烷脱脂、C18柱净化后,通过超高效液相色谱-质谱联用仪进行检测,内标法定量。各标准溶液在0.1～10μg/L范围内呈线性相关(r=0.999),不同基质样品中添加回收率为75%～114%,检出限为0.1μg/kg。结果表明,该方法是一种准确测定乳与乳制品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的检测方法。     

HPLC测定原料乳与乳制品中三聚氰胺质量分数的不确定度评定

建立高效液相色谱法测定测定原料乳与乳制品中三聚氰胺质量分数的不确定度评定方法,采用GB/T22388-2008高效液相色谱法测定测定原料乳与乳制品中三聚氰胺质量分数。建立数学模型,根据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059—1999)中有关规定评估其不确定度。结果表明,按数学模型计算奶粉中三聚氰胺质量分数为2.70mg/kg,扩展不确定度为0.064mg/kg,结果表达为(2.70±0.064)mg/kg。该方法建立的数学模型合理、可靠。     

超高效液相色谱法测定动物源性食品中的三聚氰胺

建立动物源性食品中三聚氰胺含量测定的超高效液相色谱法。鸡蛋样品用1% 三氯乙酸- 乙腈(3:1,V/V)溶液提取、离心、固相萃取柱净化,然后采用CR 色谱柱(阳离子交换填料SCX 与C18 包被型填料按质量比1:4 混合)进行超高效液相色谱分析。兔肉样品用乙腈提取,离心后以强阳离子色谱柱进行超高效液相色谱分析。对色谱条件进行优化,选用236nm 作为检测波长,鸡蛋中三聚氰胺在浓度为1.00～5.00mg/L 的范围内线性关系良好,在添加浓度为1.00、2.00、5.00mg/kg 时,添加回收率在89.24%～91.06% 之间,RSD 小于6.00％。对于兔肉中三聚氰胺浓度在0.4～4mg/L 的范围内线性良好,在添加浓度为2.00、5.00、10.00mg/kg 时,添加回收率在82.65%～86.54% 之间,RSD 小于7.50%。该方法简便、快速,检测灵敏度、准确度及精密度均满足检测要求。     

原料乳和乳制品中三聚氰胺快速检测方法的探讨

对国家标准《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》GB/T 22388—2008及《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》GB/T 22400—2008进行了改进,优化了样品前处理和色谱条件,建立了适用于原料乳及各种乳制品中三聚氰胺的液相色谱检测法,提高了检测的灵敏度、准确度,并缩短了检测时间,提高了效率。     

HPLC法测定乳制品中三聚氰胺的前处理方法

以国家标准方法为参照,研究高效液相色谱(HPLC)检测原料乳及乳制品中三聚氰胺的前处理方法.对于原料乳、纯牛奶、酸奶、奶粉分别采取不同的样品前处理方法,用HPLC法测定.以离子对试剂缓冲液-乙腈=90:10为流动相,流速为1.0mL/min,柱温为40℃.使用Shimadzu,VP-ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),配备有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪在240 nm范围内对待测组分进行分离和测定.样品中三聚氰胺的加样回收率在94.4%～105.7%.相对标准偏差在1.00%～3.79%.新建的样品处理方法准确、简便、易行,适于测定原料奶、纯牛奶、酸奶、奶粉中的三聚氰胺的检测.     

高效毛细管电泳法快速测定乳制品中三聚氰胺

建立高效毛细管电泳快速测定乳制品中三聚氰胺含量的方法。样品用100mmol/L 醋酸提取,以150mmol/L磷酸二氢钠为分离缓冲液,以未涂敷石英毛细管(20cm(有效长度)× 50μm)为分离柱,于235nm 波长处检测,采用峰面积外标法定量。实验研究缓冲溶液的浓度、分离溶液pH 值及样品前处理条件对三聚氰胺准确定量的影响。方法检出限为0.06mg/L,定量限为0.2mg/L,线性范围为0.2～200mg/L,线性相关系数r=0.9998。1.0、10mg/L 添加水平的平均加标回收率分别为93.0% 及84.3%。该方法简单快速,6min 之内即可完成一次样品分析(预清洗2min,分离4min)且试剂消耗少、环境友好及检测准确,适合于各类乳制品中三聚氰胺的常规测定。     

气相色谱串联质谱法测定奶粉,液态奶及鸡蛋中三聚氰胺的含量

利用气相色谱串联质谱检测方法,对奶粉,液态奶及鸡蛋试样中的三聚氰胺用无水甲醇超声提取,经混合型阳离子交换固相萃取柱净化,且净化液用BSTFA+TMCS(99:1)进行硅烷化衍生,衍生产物采用选择离子监测质谱扫描模式,用化合物的保留时间和质谱碎片的丰度比定性,外标法定量.方法最低检出限为0.05 mg/kg,回收率范围为72%～88%,相对偏差为0.38%～0.52%.     

Rapid and High-Throughput Determination of Melamine in Milk Products and Eggs by Full Automatic On-line Polymer Monolith Microextraction Coupled to High-Performance Liquid Chromatography

A rapid and high-throughput method for monitoring melamine (MEL) in milk products and eggs was presented. This method was based on a full automatic platform that was composed of on-line polymer monolith microextraction and high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection. A poly(2-acrylamido-2-methyl-1-propanesulfonic acid-co-ethylene dimethacrylate) monolith was selected as the sorbent for purification and enrichment of MEL in milk products and eggs. A novel mixed-mode chromatographic column packed with octyl and sulfonic acid co-bonded silica was employed for quantitative determination of MEL in real samples. Several factors affecting extraction performance were investigated. Under the optimal conditions, the recoveries of MEL in milk products and eggs spiked at three levels of 0.5, 5.0, and 20.0 mg/Kg, ranged from 87.0% to 95.5%, with RSDs less than 6.4%. The limits of detection were 0.024 and 0.018 mg/Kg for MEL in the milk products and eggs, respectively.     

基于牛乳非蛋白生物标志物定量检测山羊乳中掺加的牛乳

为克服酶联免疫吸附法无法检测羊乳中掺加的经过热处理的牛乳的局限，本研究首先通过气相色谱-质谱法发现牛乳区别于山羊乳的关键非蛋白生物标志物为N-乙酰氨基葡萄糖，然后基于该标志物开发基于高效液相色谱手段定量检测山羊乳中掺加的牛乳的方法。样品在70?℃经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生60?min后，在高效液相色谱仪上使用反相C18色谱柱对目标物进行分离，在245?nm紫外波长下对其进行检测，根据N-乙酰氨基葡萄糖含量推算山羊乳中掺加的牛乳量。该方法的牛乳掺加量检出限和定量限分别为0.3%和1.0%，在1%～100%的牛乳掺加范围内线性良好，相关系数为0.999?4，该方法的加标回收率为100.4%～105.1%，在10、50?mg/L和100?mg/L加标质量浓度下，日内和日间精密度分别为1.8%和2.0%、1.7%和3.7%、2.6%和2.7%。该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度，可用于山羊乳中掺加牛乳的定量分析。     

LC-MS/MS测定牛奶中氟虫腈及代谢物残留量

建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定牛奶中氟虫腈及其代谢物残留量的方法。根据基质及目标物特点选择乙腈进行提取,通过比较Cleanert PEP Plus固相萃取柱,Florisil固相萃取柱、Waters Oasis PRiME HLB净化柱,氨基石墨复合柱净化效果及实验效率,选择Cleanert PEP Plus(60 mg/3 mL)固相萃取柱净化。经C18色谱柱分离,以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸水溶液(含浓度10 mmol/L乙酸铵)为流动相进行梯度洗脱,选择负离子多反应监测模式检测,外标法定量。结果表明1~50μg/kg范围内线性关系良好,相关系数R²>0.99。方法的检出限为0.6μg/kg,定量限为1μg/kg。在空白牛奶基质中3个不同添加水平实验中回收率为82.5%~97.4%,相对标准偏差为4.0%~10.5%。该方法简便、快速、准确、灵敏,适用于牛奶中氟虫腈及残留物的测定。     

高效液相色谱法测定母乳及牛乳中总核苷酸含量

建立高效液相色谱测定母乳和牛乳中总核苷酸含量和组成的分析方法。总核苷酸包括游离核苷酸、游离核苷、核苷聚合物及加合物等不同来源的可利用核苷总量。利用酶解法释放出母乳中的核苷,以硼化聚丙烯酰胺凝胶（Affi-Gel 601）作为固相萃取介质进行样品净化,用反相高效液相色谱仪检测,内标法定量,检测结果以核苷酸计。且针对母乳样品的特性,增加高温灭活步骤进行样品前处理,以检测母乳中核苷酸的天然含量及组成。对所建方法进行全面验证,结果表明其具有良好的线性,相关系数（r2）均在0.999以上;母乳中各核苷酸的检出限和定量限分别在0.18～0.45 mg/L和0.60～1.51 mg/L之间;母乳基质中3 种不同加标水平下总核苷酸的回收率均在99%～108%之间,连续3 d 6 次检测结果的相对标准偏差在0.8%～7.8%之间,显示了良好的准确性及精密度。然后进一步利用所建检测方法,评估母乳及5 种市面常见的牛乳中的核苷酸总量及组成用以验证该方法的适用性。该方法的灵敏度、准确性及精密度均可满足对母乳和牛乳样品中天然的核苷酸含量及组成的测定要求。本研究为今后大样本量调查母乳及牛乳样品中核苷酸的含量和组成提供了更加科学准确的方法。     

奶及乳制品中三聚氰胺的检测研究

用高效液相色谱法测定奶及乳制品中三聚氰胺的含量。色谱条件为：色谱柱：C18 柱(150mm × 4.6mm,5μm);流动相：乙腈:0.202% 庚烷磺酸钠-0.210% 柠檬酸水溶液(10:90,V/V);检测波长：235.8nm;柱温：30℃。结果表明：在0.1～1.6μg/ml 范围内三聚氰胺与峰面积呈良好线性关系,相关系数为0.9973,回归方程为A ＝ 59746C＋ 183.48,回收率为98.3%～99.2%,相对标准偏差小于1.52%。     

同位素内标UPLC -MS/MS法测定婴儿配方奶粉中性激素苯甲酸雌二醇残留

建立测定婴儿配方奶粉中性激素苯甲酸雌二醇的超高效液相色谱-串联质谱方法。样品前处理采用酶解、甲醇提取,经LC-C18和LC-NH2基固相萃取柱净化。苯甲酸雌二醇由超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分离、在正离子电离模式(ESI+)及多反应监测模式(MRM)下,以氘代诺龙-d3为内标进行定量检测。方法对婴儿配方奶粉中苯甲酸雌二醇的检出限(LOD)0.39μg/kg,定量限(LOQ)为0.95μg/kg。在4μg/kg和10μg/kg两个加标水平下,婴儿配方奶粉中苯甲酸雌二醇的回收率在76.5%～86.3%的范围内,相对标准偏差在9.7%～15.2%范围内。     

Determination of Melamine in Liquid Milk and Milk Powder by Titania-Based Ligand-Exchange Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography

A simple and rapid high-performance liquid chromatography (HPLC) procedure for the analysis of melamine in liquid milk and milk powder has been developed. Decrease of acetonitrile percentage and phosphate buffer concentration in mobile phase, and lowering of buffer pH and column temperature would benefit the retention of melamine on titania. Taking advantage of the ligand-exchange and hydrophilic interaction mixed retention mode on bare titania column, neither complex pretreatment nor ion-pair reagent was required. The whole analysis for one sample including sample pretreatment and HPLC analysis could be accomplished within 30 min. The method presented good linearity (R ² = 0.9998) in a wide range of 0.02–10 μg mL⁻¹. The limit of detection (3σ) and limit of quantification (10σ) of the method were 6 and 20 μg L⁻¹, respectively, which were equivalent to 15 and 50 μg kg⁻¹ melamine in liquid milk, 60 and 200 μg kg⁻¹ melamine in milk powder, respectively. Such sensitivity could be compared with those obtained by HPLC with solid-phase extraction or HPLC coupled with tandem mass spectrometry and was adequate for the screening of melamine in tainted dairy products. The repeatability (RSDs) of the retention times and peak areas of 11 replicate detections of 1.0 μg mL⁻¹ melamine were 0.32% and 2.5%, respectively. The intermediate precision on three consecutive days (RSDs, n = 6) of the retention times and peak areas were 1.1% and 2.3%, respectively. The recovery of spiked melamine in dairy samples ranged from 95.2% to 105%. The simplicity, sensitivity and rapidity of the proposed method make it an effective alternative detecting technique for melamine.     

多重real-time PCR技术快速鉴别特种乳中的乳源动物成分

建立一种特种乳中乳源动物成分快速鉴别多重实时聚合酶链式反应技术。通过筛选建立8?种不同乳源物种检测的多重实时聚合酶链式反应方法,在一个反应体系里可同时检测4?种乳源的特异性靶基因,绝对灵敏度达0.1～5?pg/μL,检出限可达0.1%。同时,建立了高效的DNA提取方法,样品裂解后可在12?min左右完成96?个样品的DNA提取,大大缩短了样品前处理时间。采用该方法对市售特色乳产品进行调查,结果显示标识不准确的产品比例达36.36%。