响应面法优化川芎蛋白提取工艺及抗氧化活性研究

为优化川芎蛋白（Ligusticum chuanxiong protein,LCP）的提取工艺,并考察其抗氧化活性。基于单因素实验,采用Box-Behnken响应面法,以料液比、提取时间、提取溶剂pH为考察因素,LCP得率为指标,优化LCP提取工艺;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定LCP的分子量范围;测定LCP的等电点（pI）及溶解度,并考察LCP的抗氧化活性。结果表明:最佳提取条件为料液比1:15 (g/mL)、提取时间1.5 h、pH6,在优化条件下LCP得率为（2.36%±0.13%）,实测值与理论值较为接近,表明该数学模型可用于优化LCP提取工艺。最优条件下提取的LCP分子量在17~48 kDa,等电点为3.88,pH8时溶解度为96%,羟自由基清除能力IC₅₀为1.18 mg/mL、超氧阴离子自由基清除能力IC₅₀为0.57 mg/mL、1,1-二苯基-2-苦基肼基（DPPH）自由基清除能力IC₅₀为1.31 mg/mL。该法提取的LCP具有较好的抗氧化活性,可为LCP抗氧化活性的进一步研发提供实验思路。     

金冠豆角籽粒中α-淀粉酶抑制剂的纯化及抑制动力学的研究

目的 提取金冠豆角籽粒中α -淀粉酶抑制剂（α-amylase inhibitor, α-AI）并将其进行纯化,研究其抑制类型,确定α-淀粉酶抑制剂的及抑制效果。方法 以金冠豆角籽粒为原料,通过NaCl盐溶、硫酸铵沉淀提取将α-AI进行提取,使用G50、G75葡聚糖凝胶柱进行层析,以NaCl洗脱液进行梯度洗脱,收集蛋白峰后,检测α-AI对猪胰淀粉酶的抑制活性;用Lineweaver-Burk双倒数绘图法和Michaelis-Menton方程分析酶反应动力学,通过Linerweaver-Burk作图,探究α-AI的抑制类型。结果 金冠豆角籽粒中提取的α-AI蛋白含量为1.74 mg/mL,对猪胰淀粉酶抑制率为84.20%,半抑制浓度（semi-inhibition concentrationhalf maximal inhibitory concentration, IC50 ）IC50 为6.765677±0.627 63 mg/mL、蛋白含量为1.74 mg/mL。基于酶反应动力学,利用Lineweaver-Burk双倒数绘图法和Michaelis-Menton方程分析发现,不添加抑制剂组和添加抑制剂组的α-淀粉酶的酶解速率曲线几乎相交于原点,并且酶最大反应速率（Vmax）随着抑制剂浓度的增大而减小,米氏常数（Km）不变。结论 α-AI与猪胰淀粉酶的结合呈现可逆型非竞争性抑制。     

芋头球蛋白的提取纯化及其对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的:探究芋头球蛋白体外调节血糖活性。方法:以磷酸缓冲液提取芋头球蛋白,以蛋白质提取率为指标考察了料液比、温度、时间和次数对蛋白质提取的影响,在此基础上采用响应面优化提取工艺。采用DEAE-52离子纤维素柱层析法纯化粗蛋白,通过高效液相色谱法检测纯化所得球蛋白的纯度,并测定其等电点和分子量。研究了芋头球蛋白对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性及抑制动力学,以阿卡波糖为阳性对照,评价其体外调节血糖活性。结果:最佳提取条件为:料液比1:16 g/mL、温度41 ℃、时间124 min,此时提取率为36.75%±0.31%,得率0.70%±0.04%,纯度85.72%±0.47%。纯化后的球蛋白经高效液相色谱检测得一主峰,纯度为93.27%,得率为0.20%±0.01%,等电点pI=5.6,分子量为22 kDa左右。芋头球蛋白对两种酶的抑制活性与蛋白浓度存在量效关系,对α-淀粉酶的IC₅₀为0.75±0.10 mg/mL,对α-葡萄糖苷酶的IC₅₀为（2.09±0.19） mg/mL,而阿卡波糖对α-淀粉酶的IC₅₀为（0.61±0.13） mg/mL,对α-葡萄糖苷酶的IC₅₀为（0.69±0.16） mg/mL,说明芋头球蛋白对α-淀粉酶略低于阿卡波糖,而对α-葡萄糖苷酶抑制活性远低于阿卡波糖,二者的抑制类型均为可逆性的非竞争性抑制,对α-淀粉酶抑制的K_i=（0.61±0.05） mg/mL,对α-葡萄糖苷酶抑制的K_i=（0.26±0.02） mmol/L。结论:本研究优化了芋头球蛋白的提取工艺,纯化得到芋头球蛋白,研究发现其有一定的体外调节血糖的活性,对功能食品的研发和芋头产品提高附加值具有一定的指导意义。     

白芸豆中α-淀粉酶抑制剂的提取及其性能研究

采用水提法从白芸豆中分离提取α-淀粉酶抑制剂(α-AI),研究了白芸豆粉的细度、料液比(白芸豆粉:水)、提取时间、提取温度对α-AI得率的影响,应用单因素和正交实验确定了α-AI提取的最佳工艺条件。并探讨了α-AI的浓度、温度及p H对α-淀粉酶抑制率的影响。结果表明:影响α-淀粉酶抑制剂提取的因素依次为:白芸豆粉细度物料比提取时间提取温度。提取的最佳工艺条件如下:白芸豆粉的细度为80目、料液比为1:6、提取时间为8 h、提取温度为55℃,α-AI得率为4.67%。在α-AI配制浓度低于0.6 mg/m L时,对α-淀粉酶的抑制作用呈线性关系,浓度为0.6 mg/m L时,抑制率为76%;在低于60℃热处理时,温度对α-AI的抑制率没有影响,之后随着温度升高,α-AI抑制率降低,90℃处理后失去活性;在p H4~8范围内,α-AI具有良好的稳定性。     

云南栘依黄酮提取及其抗氧化、降血糖活性研究

以云南栘依果为研究对象,采用响应面分析法对超声波辅助酶法提取黄酮进行优化,并对其体外抗氧化和降血糖活性进行测定。结果表明,云南栘依黄酮提取最佳工艺参数为提取温度50℃、复合酶比例(纤维素酶和果胶酶)3:2、提取时间50 min、液料比30 mL/g、乙醇浓度55%、pH4.5,在此条件下云南栘依黄酮得率高达13.10%,与预测值(13.01%)接近。体外抗氧化实验发现云南栘依黄酮清除DPPH自由基、ABTS⁺自由基和羟基自由基的IC₅₀分别为0.04、0.29、0.70 mg/mL,当黄酮浓度分别为0.24、1.40、4.00 mg/mL时,对DPPH自由基、ABTS⁺自由基、羟基自由基清除率分别为93.98%、97.60%、84.26%,同时云南栘依黄酮还具有一定的铁离子还原能力,表明其具有较强的抗氧化能力;体外降血糖实验发现云南栘依黄酮抑制α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶的IC₅₀分别为0.86、0.37 mg/mL,当黄酮浓度为12.0、5.0 mg/mL时对α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶的抑制率分别为...     

凤凰单枞多酚提取工艺优化及其体外抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为促进特色茶资源的开发利用,本研究以潮汕地区特有的乌龙茶凤凰单枞为原料,采用超声辅助提取茶多酚,以乙醇体积分数、液料比、提取时间和温度为考察因素,在单因素实验基础上,利用Box-Benhnken实验设计对凤凰单枞茶多酚的提取工艺进行优化,并探究所得多酚提取物体外抗氧化及对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。研究结果表明,凤凰单枞多酚提取最佳工艺条件为乙醇体积分数70%、提取温度57 ℃、提取时间34 min、液料比42:1 mL/g,多酚得率可达18.18%±0.23%。该工艺条件下提取所得凤凰单枞多酚对DPPH·和·OH具有较强的清除能力,清除能力与多酚质量浓度呈一定量效关系,其IC₅₀分别为8.42和24.70 μg/mL,均低于相同质量浓度下的V_C。此外,该多酚提取物对α-葡萄糖苷酶活性具有显著抑制作用,IC₅₀为7.24 μg/mL,抑制效果优于对照组阿卡波糖。该研究为凤凰单枞天然抗氧化及降糖功效的利用提供理论依据。     

超声辅助酶法提取黄刺浆果总黄酮的工艺优化及其生物活性研究

采用超声辅助酶法提取黄刺浆果总黄酮。在单因素试验的基础上，通过响应面法优化黄刺浆果总黄酮的提取工艺，并评价总黄酮对DPPH自由基的清除能力、对α-淀粉酶活性和α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。结果表明：最佳提取工艺为纤维素酶添加量6%(以黄刺浆果质量计)、酶解温度41℃、超声时间25 min、甲醇体积分数70%、料液比1∶25(g/mL)。在此条件下，黄刺浆果总黄酮得率为(22.53±0.18)mg/g。黄刺浆果总黄酮对DPPH自由基的IC₅₀为1.90 mg/mL、对α-淀粉酶活性和α-葡萄糖苷酶活性的IC₅₀分别为11.00、10.09 mg/mL,表明黄刺浆果总黄酮具有较强的生物活性。     

土豆中酪氨酸酶的提取及植物精油对其激活作用与动力学研究

本实验采取单因素分析法对土豆中酪氨酸粗酶的提取及反应条件进行优化,采用多巴速率氧化法筛选具有酪氨酸酶激活作用的植物精油,并通过酶动力学实验研究其激活机理。结果表明土豆中酪氨酸酶最佳提取条件为:料液比1:10(g/mL)、磷酸盐缓冲液pH6.8;最佳酪氨酸酶反应条件为:温度35℃、时间13 min、底物L-多巴/粗酶加入量比例5:5。在最佳提取条件与反应条件下筛选15种植物精油中发现百里香、茶树、依兰精油对酪氨酸酶激活作用显著(P>0.05),IC₅₀值分别为0.488、0.429、0.480 mg/mL,接近阳性对照补骨脂素IC₅₀值0.328 mg/mL,动力学实验发现百里香、茶树、依兰精油激活类型分别为非竞争型、混合型、混合型。     

单环刺螠废弃内脏中粗多糖的提取工艺优化

利用热水浸提的方法进行单环刺螠（海肠）废弃内脏中多糖的提取。采用单因素试验和L₉（3⁴）正交试验设计,研究不同pH值、料液比、提取时间和提取温度对单环刺螠内脏多糖提取率的影响。并采用Fenton体系测定单环刺螠内脏多糖对羟自由基（·OH）的清除作用。单环刺螠内脏多糖提取的最佳工艺条件为pH10、料液比1:40（g/mL）、时间3h、温度60℃。单环刺螠内脏多糖在质量浓度为50μg/mL时,对羟自由基清除能力可达60%,且具有剂量效应。     

白芸豆中α-淀粉酶抑制剂的超声波辅助提取及膜分离纯化研究

以白芸豆为原料,采用超声波辅助进行蛋白质(α-AI粗提液)的提取及工艺优化。通过单因素和正交实验,确定了最佳工艺条件为料液比1:10、超声功率150 W、提取时间100 min、提取温度55℃,该条件下蛋白质提取率可达65.93%。在此基础上,将α-AI粗提液进行有机膜分离纯化,得到5种不同分子质量组分Z₁(>300 ku)、Z₂(100～300 ku)、Z₃(50～100 ku)、Z₄(10～50 ku)和Z₅(<10 ku),对不同组分的蛋白质含量、质量比例、提取率和α-淀粉酶抑制活性进行测定分析。结果表明:蛋白质含量高低依次是Z₄>Z₃>Z₂>Z₁>Z₅,对应组分的质量比例分别为20.98%、17.73%、10.64%、7.12%和43.53%;在一定浓度范围内,α-淀粉酶抑制率与浓度呈线性正相关,α-淀粉酶抑制活性高低依次是Z...     

线叶旋覆花总黄酮的提取工艺优化及其抗氧化活性分析

采用响应面法优化线叶旋覆花总黄酮的提取工艺,评价最佳条件下得到提取物的抗氧化活性。以线叶旋覆花总黄酮提取量为指标,考察乙醇体积分数、提取温度、液料比、提取时间对总黄酮提取量的影响。在单因素试验的基础上,采用4因素3水平的响应面法确定线叶旋覆花总黄酮的提取工艺。结果表明,线叶旋覆花总黄酮提取的最佳工艺为:乙醇体积分数70%、提取温度87℃、液料比31:1 mL/g、提取时间40 min,线叶旋覆花总黄酮提取量为(33.62±0.0207) mg/g。最佳工艺条件下得到的提取物对1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(IC₅₀=0.074 mg/mL)的清除能力强于V_C(IC₅₀=0.082 mg/mL),但对OH·的清除能力明显弱于V_C。响应面法优化线叶旋覆花总黄酮提取工艺切实可行,得到的总黄酮有较强的抗氧化活性,为线叶旋覆花总黄酮的开发提供理论依据。     

野木瓜总皂苷提取工艺优化及其美白活性组分筛选

目的:优化野木瓜中总皂苷的提取工艺,并为野木瓜总皂苷活性组分在美白化妆品中的后续开发应用奠定基础。方法:在单因素实验的基础上,以乙醇浓度、液料比、提取温度、提取时间为优化因素,总皂苷得率为评价指标,Box-Behnken法优化野木瓜总皂苷提取工艺;依次用不同极性溶剂对其提取物进行萃取,硅胶柱色谱层析进行分离,获得不同活性组分,MTT法检测B16细胞的增殖抑制能力,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性。结果:各因素对野木瓜总皂苷得率影响顺序为:乙醇浓度>提取温度>液料比>提取时间;最佳提取工艺为乙醇浓度79%,液料比25:1 mL/g,提取温度81℃,提取时间89 min,总皂苷平均得率为2.16%;各萃取部位中正丁醇部位对细胞增殖和酪氨酸酶活性抑制效果最好,效果优于对照品熊果苷（P<0.05）,其IC₅₀分别为86.61和69.09 μg/mL;正丁醇部位分离得8个活性组分,其中组分Fr.6对B16细胞增殖和酪氨酸酶活性抑制效果最好,IC₅₀分别为80.93和58.99 μg/mL,且抑制酪氨酸酶活性的效果较分离前的正丁醇部位更好（P<0.05）。结论:本文探讨了野木瓜总皂苷的最佳提取工艺,获得的活性组分Fr.6具有良好的美白活性,在美白化妆品产品开发中具有较好的应用前景。     

佛手黄酮提取工艺优化及其体外抗氧化活性

本研究通过乙醇回流法提取佛手黄酮,在单因素实验的基础上,以得率为指标,通过响应面优化分析,优化佛手总黄酮的提取工艺,并对其体外抗氧化活性进行评价。结果表明:佛手黄酮最佳提取条件为:乙醇浓度73%,提取温度80℃,提取时间90 min,料液比1:31 g/mL。在此条件下黄酮得率为1.34%;佛手黄酮对DPPH和ABTS自由基均有一定的清除作用,且呈明显的剂量效应关系,其中DPPH自由基清除率的IC₅₀为0.8 mg/mL,ABTS自由基清除率的IC₅₀为0.07 mg/mL。ORAC(总抗氧化能力)为20.18 μmol TE/g。以上结果表明,佛手黄酮是一种良好的天然抗氧化剂。     

火龙果花的体外抗氧化物提取工艺优化及其抗炎活性

旨在为探究火龙果花的抗氧化物提取工艺及其抗炎活性。选取火龙果花为原料,用热回流法提取,以粗提液对DPPH自由基及OH自由基的清除能力为指标,先进行单因素实验,考察提取温度、料液比、提取时间以及乙醇浓度对粗提物抗氧化活性的影响,再采用L₉(34)正交试验法,优化火龙果花的体外抗氧化物提取工艺。结果表明:70%乙醇,1:30 g/mL料液比,75 ℃下回流加热3.0 h为最优提取条件,在最佳提取工艺下粗提物对DPPH自由基、OH自由基的IC₅₀值分别为0.273、0.288 mg/mL,且在一定范围内,粗提物的浓度越高,其抗氧化活性越好,量效关系明显。最佳工艺条件下,粗提物对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞产生的NO有很强的抑制作用,且与浓度呈正相关,具有剂量依赖性,其半抑制浓度IC₅₀值为13.94 μg/mL,该提取物具有很好的抗炎活性。     

铁皮石斛多糖复合酶法提取工艺及其抗氧化性

探讨复合酶法提取铁皮石斛多糖的最佳工艺以及酶解多糖的抗氧化活性。利用单因素及L₁₈(37)正交实验研究了酶配比、酶浓度、酶解温度、酶解时间、料液比及pH对多糖得率的影响,并通过清除DPPH、ABTS自由基研究酶解多糖的抗氧化活性。结果显示酶解最优条件:中性蛋白酶与纤维素酶比例为2:1,酶浓度为10%,料液比为1:120,酶解温度为55 ℃,pH6.0,酶解时间为3 h,在此条件下多糖得率为43.85%±1.8%;酶解多糖对DPPH、ABTS自由基的IC₅₀分别为1.331、0.467 mg/mL,说明酶解石斛多糖具有较好的抗氧化活性。     

响应面法优化棘托竹荪孢子多糖提取工艺及抗氧化活性研究

为了最大限度地从竹荪孢子中提取多糖,且不破坏多糖的抗氧化活性,本文考察提取时间、提取温度、料液比、pH等因素对多糖得率及多糖活性的影响,在单因素实验的基础上,采用响应面法Box-Benhnken设计,优化棘托竹荪孢子多糖提取工艺。结果表明:综合提取效率和多糖活性等因素,得到竹荪孢子多糖提取的最适工艺参数为提取温度70 ℃、提取时间120 min、pH9、料液比为1:20。采用上述最优工艺条件进行多糖提取的实验,测得实际多糖得率为9.87%,在2~10 mg/mL范围内,孢子多糖对羟基自由基清除率的IC₅₀为4.67 mg/mL。实验结果为下一步分离、纯化及鉴定竹荪孢子活性多糖提供基础和依据。     

昆布多糖的复合酶法提取工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性

优化复合酶提取昆布多糖的工艺参数,并考察其抑制α-葡萄糖苷酶的能力。以昆布多糖得率为评价指标,通过正交试验确定复合酶配比,采用响应面法评价酶解时间、pH、液料比和温度对昆布多糖得率的影响。采用体外酶抑制实验测定昆布多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明,复合酶最佳添加量为纤维素酶100 mg、果胶酶90 mg、木瓜蛋白酶55 mg,最佳酶法提取工艺为酶解时间1.8 h、酶解温度49.4℃、pH6.1、液料比59:1 mL/g,最佳工艺条件下昆布多糖预测得率18.183%,实测多糖得率18.19%±1.04%,其中性糖、酸性糖、蛋白质及硫酸根含量分别52.72%、11.76%、2.66%、19.49%;在1～5 mg/mL范围内其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用随浓度增加而升高,最大抑制率为79.04%±3.17%,IC₅₀为1.443 mg/mL。复合酶法提取的昆布多糖得率高,其对α-葡萄糖苷酶具有明显的抑制作用。     

响应面优化紫果西番莲叶多酚超声辅助提取工艺及其抗氧化活性

以紫果西番莲叶为对象，研究其多酚提取工艺及抗氧化活性。在单因素实验基础上采用Box-Behnken响应面分析法优化紫果西番莲叶多酚的提取工艺，考察液料比、提取时间、超声功率和超声温度对其多酚提取量的影响，以清除DPPH自由基和·OH能力评价紫果西番莲叶多酚的抗氧化活性。结果表明，最佳提取条件为:液料比36:1 mL/g、提取时间54 min、超声功率350 W和超声温度70℃，此时紫果西番莲叶中多酚提取量为（13.19±0.17） mg/g。抗氧化活性结果表明，紫果西番莲叶多酚具有较好的抗氧化活性，其清除DPPH自由基和·OH的半抑制浓度（IC₅₀）分别为0.058和0.144 mg/mL。     

樟叶木脂素的提取纯化及其抗氧化性、抗癌活性

为了优化樟叶木脂素超声波技术提取条件,探究其抗氧化性、抗肝癌活性,本文通过单因素实验考察各个因素对木脂素提取量的影响,利用响应面试验优化提取工艺并建立相应的数学模型。粗品经过浓缩、萃取、柱色谱等步骤进行分离纯化;紫外色谱、红外光谱、质谱、核磁共振等技术进行结构鉴定。利用高效液相谱（High Efficiency Liquid Chromatography, HPLC）外标法进行纯度鉴定;同时利用1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼（1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH）法,羟基自由基清除法研究其抗氧化性; MTS （3-（4, 5-dimethylthiazol-2-yl）-5-（3-carboxymethoxyphenyl）-2-（4-sulfophenyl）-2H-tetrazolium）法研究其对肝癌细胞（HepG2）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的毒性作用。结果表明:樟叶木脂素的最优超声提取条件为浸提时间78 min,超声时间3 min,料液比1:22 g/mL,乙醇浓度60%,在此条件下樟树叶中木脂素提取量为45.31 mg/g;经过纯化和结构鉴定最终得到芝麻素和松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷,其纯度分别为94.84%和90.14%;抗氧化实验结果表明芝麻素,松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷具有较好的清除DPPH自由基、羟基自由基效果,其中松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷清除DPPH自由基的IC₅₀为0.31 mg/mL,清除羟基自由基的IC₅₀为0.71 mg/mL;芝麻素清除DPPH自由基的IC₅₀为0.55 mg/mL,清除羟基自由基的IC₅₀为0.94 mg/mL。细胞毒性试验发现芝麻素、松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷均对HepG2有抑制作用,且芝麻素对肝癌细胞（HepG2）、人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的作用大于松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷。综上可知响应面法可以用于樟叶木脂素的提取分离,且该提取物具有抗氧化和抗肝癌的功效。     

响应面法优化野金柴总黄酮超声辅助提取工艺及其不同组分抗氧化能力研究

采用超声辅助提取野金柴中的黄酮类化合物,研究液料比、乙醇浓度、超声功率、超声时间对提取得率的影响,并采用响应曲面法优化提取工艺条件。采用ADS-7大孔树脂对野金柴中的根皮苷进行分离,分析总黄酮、根皮苷、黄酮R(除去根皮苷后的剩余黄酮组分)的抗氧化活性。结果表明,各工艺条件对野金柴总黄酮得率的影响为:超声时间>乙醇浓度>超声功率>液料比,优化所得最佳的提取工艺条件为:液料比40∶1,乙醇浓度80%,超声功率540 W,超声时间60 min,在此条件下野金柴总黄酮得率为8.82%±0.09%。总黄酮、根皮苷、黄酮R清除DPPH自由基的IC₅₀值分别为0.0205、0.0222、0.0261 mg/mL;清除ABTS自由基的IC₅₀值分别为0.0220、0.0233、0.0266 mg/mL,总黄酮抗氧化能力最强,根皮苷其次,再次为黄酮R,三者都有较好的DPPH和ABTS自由基清除能力。