白啤中二肽基肽酶-IV抑制肽的虚拟筛选及活性分析

以青岛白啤作为研究对象,建立一种快速筛选二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV）抑制活性肽的方法。白啤经超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱结合De novo软件鉴定出肽段序列,确定了置信度较高的68 条肽段。应用Peptide Ranker对68 条肽段进行生物活性评分,筛选出评分大于0.5的4 条肽段,同时又根据先前文献对抑制DPP-IV活性肽的氨基酸位点研究报道,筛选出13 条肽段。对筛选出的17 条肽段进行吸收、代谢及毒性预测及分子对接评价,选定了VPFPHTP和LAKLQR两条潜在抑制DPP-IV活性肽段。通过肽段与DPP-IV分子对接构象图表明,选定的2 条活性肽均能以氢键及疏水作用紧密结合DPP-IV,从而抑制其活性。利用体外方法验证2 条活性肽抑制DPP-IV活性,结果显示2 条肽段具有明显的DPP-IV抑制活性。     

预处理对核桃肽抗氧化活性的影响

比较了不同的预处理方式对低温和高温脱脂核桃粕酶解得到核桃肽的抗氧化活性和得率的影响.结果表明,对低温脱脂核桃粕进行加热、超声波、微波和碱提等预处理可以提高其酶解得到核桃肽的抗氧化活性和得率.其中,碱提得到核桃肽的抗氧化活性和得率分别为0.85±0.01、32.55％,微波预处理得到核桃肽的抗氧化活性和得率分别为0.86±0.03、34.63％,高于直接酶解得到的核桃肽的抗氧化活性和得率(0.72±0.08、18.46％),且差异具有显著性(P＜0.05).而高温脱脂核桃粕进行碱提等预处理与直接酶解得到核桃肽的抗氧化活性无明显差异.     

基于模拟胃肠道消化的云南民族乳制品蛋白肽研究

乳扇、乳饼和奶渣是云南民族传统乳制品，具有历史悠久、特色鲜明、蛋白质含量高等特点。本研究基于模拟胃肠道消化，采用液相色谱-串联质谱、氨基酸分析仪研究乳扇、乳饼和奶渣的肽谱及游离氨基酸含量，并借助蛋白肽数据库分析潜在的生物活性肽。结果表明，乳扇蛋白肽221 条，分子质量集中在500～750 Da，潜在的功能活性肽包括血管紧张素转化酶抑制肽5 条、免疫调节肽4 条、抗氧化肽3 条，抗血栓肽2 条和抗菌肽1 条。乳饼蛋白肽225 条，分子质量集中在750～1 000 Da，功能活性肽包括抗氧化肽2 条。奶渣蛋白肽222 条，分子质量集中在750～1 000 Da，功能活性肽包括免疫调节肽2 条、抗氧化肽2 条和抗血栓肽1 条。3 种乳制品中的蛋白肽主要源于β-和α-酪蛋白。乳扇、乳饼和奶渣经模拟消化液消化后其游离氨基酸含量分别为9.45、10.7 g/100 g和9 g/100 g，其中，中性氨基酸含量最高，其次依次为碱性氨基酸和酸性氨基酸。本研究揭示了乳扇、乳饼和奶渣的生物学价值，可为功能活性产品的研发提供科学依据。     

大鼠肠囊外翻法分析核桃肽吸收特性及抗氧化肽筛选鉴定

本研究通过大鼠肠囊外翻法探讨了<3 kDa核桃蛋白肽模拟胃肠消化产物的吸收特性,以抗氧化能力(DPPH自由基清除率、ABTS⁺自由基清除率、Fe²⁺螯合率)和活性肽吸收率为指标筛选核桃肽在肠道吸收的最优条件,并应用模拟分子对接技术和Nano-HPLC-MS/MS技术对吸收肽组分进行筛选和鉴定,得到能够以完整形式被吸收并发挥抗氧化活性的新型核桃源肽。结果表明:当核桃肽消化产物吸收浓度为6 mg/mL,吸收时间为2 h时,其抗氧化活性最高且在小肠吸收率最高:进一步通过Nano-HPLC-MS/MS鉴定结果表明0.5～1 kDa活性肽数量最多,其中位于C端/N端氨基酸主要集中在Pro、Thr、Leu,鉴定出33条活性肽能够以完整形式被吸收,穿过肠道屏障;最后通过分子对接技术与DPP-Ⅳ相结合,获得三条结合能最低的活性肽NLRFPL、NPDDEFRPQ、KGHLFPN,其结合能分别为-8.8、-8.6、-8.6 kal/mol,其中KGHLFPN抗氧化能力最强。综上,<3 kDa核桃肽模拟胃肠道消化能够释放抗氧化活性更高且能够被小肠吸收的...     

抗菌肽基因在E.Coli JM109中的克隆表达

合成5条50～70 bp的DNA片段,用"片段拼凑"的方法通过三步PCR扩增得到目的基因,天蚕素基因被克隆到PUC19载体上,再转化大肠杆菌JM109.电泳分析重组质粒,确定天蚕素基因已转化到JM109上.摇床发酵转化子,IPTG诱导表达目的肽,最后提纯表达产物.SDS-PAGE电泳分析表明有特异性带出现,荧光色谱分析表明表达肽与目的肽组成一致,最后确定天蚕素在JM109中得到表达.抑菌圈活性实验表明,表达肽具有一定抗菌活性.     

玉米大豆复合ACE抑制肽的分离纯化及结构初探

为了探明ACE抑制活性玉米大豆复合肽的结构,采用超滤、Cu~(2+)-Sephadex G-25柱层析、大孔树脂脱盐对复合肽进行分离纯化后,采用HPLC-MS/MS对其中一种复合肽进行了结构鉴定,初步探讨了其构效关系。结果表明:复合粗肽经超滤分离后,得到复合肽的ACE抑制活性大大提高,再经Cu~(2+)-SephadexG-25柱分离后得到两个级分——复合肽Ⅰ和复合肽Ⅱ,前者的ACE抑制活性明显高于后者。复合肽中Pro、Leu、Phe和Ala等氨基酸的含量明显高于原料蛋白质,有助于ACE抑制活性提高。m/z为597.6的质谱峰是一个五肽。结论:m/z为597.6的化合物是氨基酸序列为Leu-Arg-Pro-Asp-Pro的五肽,其端基有助于ACE抑制活性的提高。     

玉米活性肽的生理功能及其开发应用研究进展

玉米蛋白在一定条件下水解可以得到大量的玉米活性肽,这些活性肽容易消化吸收,并且具有许多独特的生理功能.所以,玉米活性多肽的开发具有巨大的潜力.因而就玉米活性肽抗高血压、促进酒精代谢、防治肝性脑病、抗氧化、抗疲劳等生理功能及其国内外研究现状作一综述,并对其应用前景进行展望.     

海参酶解产物的分离及其体外抗氧化作用的研究

从海参酶解产物中分离制备海参肽.并研究其体外抗氧化作用。采用超滤、冷冻干燥方法分离不同分子质量范围的海参肽;采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH),研究海参肽的抗氧化活性;经Sephadex G-25和反相高效液相色谱对抗氧化海参肽进行进一步分离。结果表明,分子质量在1000～3000u的海参肽表现出很强的抗氧化作用,对DPPH自由基的清除能力强于V_E,其再经Sephadex G-25分离得到海参肽Ⅰ的抗氧化活性最强,对DPPH自由基的清除率达56.3%(1mg/mL),海参肽Ⅰ经反相高效液相色谱将分离得到2个海参多肽组分.     

计算机辅助的蛋白质降血压活性评估方法

目的 借助虚拟水解与分子对接软件, 建立蛋白质降血压活性评估函数。方法 采用Autodock软件将胃肠道蛋白酶水解可能产生的二、三肽与血管紧张素I转化酶(angiotensin I-converting enzyme, ACE)进行分子对接, 根据对接能量值对短肽的ACE抑制活性进行预测, 并对肽的结构特征进行了详细地分析和统计。基于肽段与ACE结合的能量值建立可评估食品蛋白质降血压活性(G值)的打分函数, 并对22条已知氨基酸序列的可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)蛋白质的降血压活性进行评估。结果 对于二、三肽, 由带电荷的氨基酸、芳香族氨基酸和脯氨酸组成的肽段更易与ACE结合, 此外, 酸性氨基酸(带负电荷)所组成的肽段也易与ACE结合。采用打分函数对22条可口革囊星虫蛋白质的降血压活性进行评估, 其中19条蛋白质具有较好的降血压活性。结论 可口革囊星虫是一种良好的降血压肽来源, 计算机辅助的基于对接能量值的ACE抑制活性预测以及打分函数建立对生物活性肽的研究具有重要的参考价值。     

基于分子模拟技术筛选牛乳清蛋白源抗氧化肽

传统抗氧化肽的筛选往往需要经过酶解、纯化、分离、鉴定及体外试验验证,时间和物力花费较大。本研究以生物信息学为理论基础,利用计算机虚拟消化、相关活性预测与评价、药物代谢动力学及分子模拟技术对牛乳清蛋白源抗氧化肽进行依次筛选,对其可能发生的Keap1-Nrf2-ARE抗氧化途径进行分析、解释,分析其分子反应过程中构象的稳定性。应用PeptideRanker程序对生物活性进行预测评分,筛选得到137条评分大于0.4的肽段,同时采用ToxinPred、Innovagen、Expasy-compute及Pepdraw程序进一步分析肽段的理化性质,并通过药物代谢动力学ADMET、TOPKAT分析对肽段进行筛选,得到14条无毒、无致敏性、无致突变性、无致癌性及水溶性良好的多肽,然后将其与Keap1受体进行分子对接。将分子对接评分前4位的多肽与Keap1的最优结合复合物进行构象作用机制分析,最终通过复合物构象分子间作用力评价CDEF序列最具抗氧化活性的潜力,并将CDEF-Keap1受体复合物进行分子动力学模拟,结果显示动力学模拟过程中构象变化较稳定,因此CDEF抗氧化肽可在人体中较好地发挥抗氧化活性。...