甘草多糖对腹腔巨噬细胞分泌TNF-α及mRNA表达的影响

研究了甘草多糖(GP)对巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌及mRNA表达的影响.结果表明:GP能剂量依赖性地增加活化的巨噬细胞TNF-α的分泌量,当GP的添加量为200μg/mL时,TNF-a的分泌量和TNF-α mRNA表达达到峰值.在GP添加量为100μg/mL,培养时间为12 h时,TNF-α的分泌量和TNF-α mRNA表达量最大.     

蓝莓多酚对小鼠巨噬细胞中NO、iNOS及COX-2分泌量的影响

RAW264.7细胞用LPS预刺激后,添加从蓝莓中分离、制备的可萃取多酚(EPP)和不可萃取多酚(NEPP),测定EPP和NEPP对细胞NO、iNOS、COX-2分泌量的影响。结果表明:蓝莓EPP和NEPP能抑制RAW264.7细胞中NO、iNOS及COX-2的分泌量,且随着添加浓度的增加,抑制效果明显。在相同浓度下,NEPP的抑制效果优于EPP,并且好于同浓度下的阳性对照组(TP)。这表明从蓝莓中分离、制备的NEPP同EPP一样可通过抑制NO、iNOS及COX-2的分泌表现出明显的抗炎作用。     

小麦麸皮阿拉伯木聚糖的免疫调节作用

该研究以小麦麸皮阿拉伯木聚糖（AX）为研究对象,探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用及机制。用不同浓度的AX处理小鼠腹腔巨噬细胞,检测AX对小鼠腹腔巨噬细胞活力及NO释放量的影响,用AX处理小鼠腹腔巨噬细胞0、1、3、6 h,检测AX对小鼠腹腔巨噬免疫关联基因及MAPK、Akt通路相关蛋白表达的影响。结果显示6.25和12.5 μg/mL的AX对小鼠腹腔巨噬细胞没有显著毒性,细胞的存活率分别为90.42%和89.99%（p>0.05）。当浓度高于12.5 μg/mL时,细胞存活率显著降低（p<0.05）;与对照组相比,AX（6.25~200 μg/mL）能显著增加小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放量（p<0.05）;同时可以促进免疫关联基因（1L-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX-2、Nfkbia）mRNA的表达,进一步研究发现AX可以增加MAPK和Akt信号通路蛋白（ERK1/2、JNK、p38 MAPK、Akt）的磷酸化水平。上述研究结果表明,AX可以通过活化小鼠腹腔巨噬细胞,增加NO的产生,促进免疫关联基因mRNA的表达,激活MAPK和Akt信号通路,来调节免疫。     

蓝莓多酚对巨噬细胞中iNOS、COX-2基因表达的影响

RAW264.7巨噬细胞被脂多糖预刺激后,添加从蓝莓中分离制备的不同质量浓度的可萃取多酚（extractablepolyphenols,EPP）和不可萃取多酚（non-extractable polyphenols,NEPP）,培养不同的时间,研究不同质量浓度及培养时间对诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、环氧合酶（cyclooxygenase-2,COX-2）基因相对表达量的影响。结果表明：从蓝莓中分离的EPP和NEPP均能抑制iNOS、COX-2基因表达,在12 h培养时间内,2 种多酚的抑制效果较好,且EPP的抑制效果明显好于NEPP。这证明蓝莓中的NEPP同EPP一样,可通过抑制iNOS、COX-2 mRNA的表达表现出明显的抗炎活性。     

野生亚侧耳多糖的提取和对巨噬细胞Raw264.7的免疫调节作用研究

本研究从亚侧耳子实体中分离出水溶性亚侧耳多糖(HSP),通过体外实验评估其对Raw264.7巨噬细胞的免疫调节作用。采用WST-1法检测HSP对巨噬细胞增殖作用的影响,Griess试剂检测一氧化氮(NO)浓度,ELISA法检测HSP对淋巴细胞中一肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE₂)等细胞因子分泌量的影响,反转录聚合酶链式反应分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)、TNF-α和IL-1β的转录水平表达量。结果表明,HSP可显著提高Raw264.7细胞内NO的浓度,在HSP浓度为100.00 μg/mL时,NO的分泌量达到最大值(29.94 mmol/L)。与空白组相比,HSP可以显著提高TNF-α、IL-1β、PGE₂等免疫因子(P<0.05)的分泌量,其中IL-1β、PGE₂的25 μg/mL剂量组中各因子分泌量(31.9524 pg/mL,1.8174 ng/mL)均与LPS(脂多糖)阳性对照组相接近。反转录聚合酶链式反应分析结果表明,HSP能够提高iNOS和COX-2的蛋白表达量。HSP具有免疫调节的功能,可以作为免疫调节剂添加到功能性食品和药品中。     

轮叶党参粗多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞及RAW 264.7细胞的免疫活性

目的:研究轮叶党参多糖对小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞(RAW 264.7)作用以探究其免疫增强的功效。方法:浓度为1000,500,250,125 μg/mL多糖体外分别与脾脏细胞、RAW 264.7共培养,采用ELISA法检测细胞上清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6和TNF-α浓度的变化。采用MTT法,研究轮叶党参粗多糖对RAW 264.7增殖的影响。Griess法测定细胞上清液中NO的含量变化。通过RT-PCR法检测iNOS mRNA的生成情况。结果:与正常组相比,轮叶党参粗多糖组IL-2、IFN-γ、IL-6、TNF-α和NO的分泌量极显著增加(p<0.01),显著促进RAW 264.7增殖(p<0.05)。与正常组比较,iNOS mRNA明显增加。结论:轮叶党参粗多糖可与ConA协同增强T细胞活性,也可参与活化单核-巨噬细胞对特异性免疫与非特异性免疫活性起到正向调节的作用。     

小麦低聚肽的成分分析及其血管舒张活性

在对小麦低聚肽的基础理化成分、氨基酸组成和分子量分布进行分析的基础上,通过测定小麦低聚肽作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的一氧化氮(NO)分泌量,对小麦低聚肽的血管舒张活性进行了考察。组成分析显示:小麦低聚肽中蛋白质含量很高(98.15%),含有丰富的氨基酸,谷氨酸含量最高(35.12%),分子量大多为1000 u以下(92.82%),主要是二肽、三肽、四肽;NO检测结果显示:与对照组相比,小麦低聚肽可提高NO分泌量。浓度为6、12 g/L时,NO分泌量显著性增加(p0.05),浓度为9 g/L时,NO分泌量极显著性增加(p0.01),低浓度时,小麦低聚肽各组量效关系呈正相关。小麦低聚肽作用1 h时,NO分泌量比作用2 h时高。结果表明,小麦低聚肽具有较强的促进血管舒张的活性,浓度为9 g/L、作用1 h时效果最为显著。     

莲藕渣多糖通过MAPK/NF-κB途径调节小鼠腹腔巨噬细胞的免疫应答

揭示莲藕渣多糖（Lotus Root Residue Polysaccharide,LRP）对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞的体外免疫调节作用,探讨LRP刺激腹腔巨噬细胞产生免疫应答的信号通路。利用MTT法测定不同浓度LRP对细胞活力影响;选用不同浓度梯度及同一浓度不同时间点的LRP刺激细胞,Griess法检测细胞NO释放量;半定量PCR检测细胞TLR4、TLR2受体及免疫关联因子（TNF-α、IL-6、iNOS、1L-1β、COX-2、Nfkbia）mRNA的表达,蛋白印迹法检测其MAPK通路（ERK1/2、JNK、p38）及Akt的磷酸化,同时研究了LRP对和蛋白AP-1及NF-κB的影响,对LRP对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节活性及其信号机制进行评估。研究表明,LRP对小鼠腹腔巨噬细胞无毒作用,25~50 μg/mL LRP促进细胞生长,细胞存活率为104.82%和102.53%（p<0.05）;NO浓度随LRP浓度提高而显著提高（p<0.05）,200 μg/mL LRP刺激细胞产生一氧化氮（NO）为36.47 μmol/L,200 μg/mL的LRP处理细胞,NO产量随培养时间延长而增多（p<0.05）,24 h时NO浓度为44.18 μmol/L;mRNA基因表达研究显示,LRP调控TLR4、TLR2受体,并调节免疫基因的表达;此外,LRP促进核蛋白c-Jun、p65由核外转向核内,增强ERK1/2、JNK、p38蛋白的磷酸化水平,但对于Akt的磷酸化没有显著影响。因此,莲藕渣多糖（LRP）可通过MAPK/NF-κB途径增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞免疫应答。     

姬松茸多糖诱导巨噬细胞释放NO的机制

以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象,研究姬松茸多糖对其NO释放和iNOS表达的作用,并通过检测IκBα蛋白磷酸化水平的变化来探究姬松茸多糖诱导巨噬细胞释放NO的分子机制。结果表明,姬松茸多糖可剂量依赖性增强RAW264.7细胞NO的释放与iNOS蛋白的表达,且两者趋势一致。此外,25μg/mL姬松茸多糖能够增强RAW264.7细胞中p-IκBα蛋白的表达量,且在45min时达到最高,证明其能够激活NF-κB信号转导通路。综上,姬松茸多糖通过NF-κB途径上调巨噬细胞iNOS的表达,进而促进NO释放。     

管花肉苁蓉苯乙醇苷的巨噬细胞激活作用及其与当归、黄芪在调节免疫方面的协同作用

目的:研究管花肉苁蓉苯乙醇苷对巨噬细胞的激活作用,并筛选获得一个复方,研究其对正常小鼠的增强免疫力作用。方法:通过巨噬细胞激活实验,考察管花肉苁蓉苯乙醇苷提取物对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性和TNF-α、IL-6等分泌的影响;研究当归、黄芪提取物的配伍对苯乙醇苷提取物的巨噬细胞激活作用的影响;据此制备复方片剂,通过ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验、迟发型变态反应试验、抗体生成细胞检测、小鼠碳廓清试验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验,评价其对正常小鼠的免疫调节作用。结果:75、100、125 g/L苯乙醇苷提取物均能提高RAW264.7细胞吞噬活性,以及NO、iNOS、TNF-α、IL-6水平,其中以100 g/L苯乙醇苷提取物效果最佳(P<0.01);并且,当归、黄芪提取物对苯乙醇苷提取物的巨噬细胞激活功能具有极显著的促进作用(P<0.01);以此为依据制备的复方片剂,0.4、1.2 g/kg·bw/d组可显著促进淋巴细胞增殖(P<0.05)、1.2 g/kg·bw/d组可显著促进细胞免疫反应(P<0.05),0.4 g/kg·bw/d组可显著促进抗体生成(P<0.05),1.2 g/kg·bw/d组可显著提高小鼠碳廓清能力和巨噬细胞吞噬能力(P<0.05)。结论:苯乙醇苷提取物可通过诱导iNOS表达,刺激巨噬细胞合成NO,同时刺激巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,激活巨噬细胞的免疫调节功能;以其与当归、黄芪提取物制备的复方片剂,可通过调节细胞免疫、单核-巨噬细胞功能而发挥对正常小鼠的增强免疫力作用,并对体液免疫有积极影响。     

大蒜素对脂多糖诱导腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制

目的:探讨大蒜素对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制。方法:建立LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应细胞模型,并用地塞米松和不同浓度大蒜素处理,MTT法检测细胞活力,中性红吞噬实验检测吞噬能力,Griess法检测一氧化氮(NO)及ELISA法检测COX-2酶活性和IL-6的分泌,qPCR检测环氧合酶2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)和IL-6的mRNA表达水平,Western Blot检测COX-2、iNOS和IL-6的蛋白表达以及核转录因子NF-κB p65及其磷酸化产物的相对表达。结果:大蒜素浓度在40~160 μg/mL范围内对腹腔巨噬细胞均无细胞毒性;与LPS组比较,大蒜素处理组能促进腹腔巨噬细胞的吞噬能力,能显著(P<0.05)抑制炎症因子COX-2酶活性、NO和IL-6的分泌,能显著(P<0.05)抑制基因COX-2、iNOS和IL-6 mRNA和蛋白的相对表达,并极显著(P<0.01)抑制NF-κB p65信号通路的磷酸化。结论:大蒜素能显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

Dietary lutein modulates inducible nitric oxide synthase (iNOS) gene and protein expression in mouse macrophage cells (RAW 264.7)

Lutein is an oxycarotenoid primarily found in dark-green leafy vegetables such as spinach and kale. Other dietary sources which contain moderate amounts of lutein include corn, egg yolks, and fruits like oranges and kiwi. Although a number of in vivo studies have demonstrated the anti-inflammatory effect of lutein, its in vitro anti-inflammatory molecular mechanism of action is unknown. In this study, we have investigated the in vitro anti-inflammatory effect of lutein using LPS-stimulated mouse macrophage cell line (RAW 264.7). The inhibition of LPS-stimulated nitric oxide (NO) was measured and the expression of inducible NO synthase (iNOS) was assessed at the mRNA and protein levels in mouse macrophage cells after treatment with lutein. Lutein decreased the LPS-induced NO production by 50% compared to LPS alone. Real-time PCR analysis showed a 1.9-fold reduction in iNOS expression at the mRNA level. Western blotting revealed that lutein decreased LPS-induced iNOS expression at the protein level by 72.5%. The results of this study suggest the anti-inflammatory properties of lutein demonstrated by the decrease in the expression of iNOS at the mRNA and protein levels in RAW 264.7 mouse macrophage cells.     

沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性

本实验在体外应用脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞建立炎症模型的基础上,探讨沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性。应用CCK-8法检测0、50、100、200、400、800 μg/mL沙葱总黄酮水洗组分对小鼠腹腔巨噬细胞增殖活力的影响;将细胞分为空白对照组、LPS应激模型组及不同质量浓度沙葱总黄酮水洗组分预处理组,采用Griess法及酶联免疫吸附测定法分别测定各处理组细胞上清液中NO浓度和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6、IL-10的质量浓度,反转录实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各处理组细胞中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、髓样分化蛋白（myeloid differential protein,MyD）88、核因子 κB（nuclear factor κB,NF-κB）mRNA的表达水平。结果显示：与对照组相比,沙葱总黄酮水洗组分在50～800 μg/mL时对小鼠腹腔巨噬细胞无明显细胞毒性作用。与LPS应激模型组相比,沙葱总黄酮水洗组分能够极显著抑制促炎介质NO、TNF-α、IL-1β、IL-6质量浓度及其mRNA的表达（P＜0.01或P＜0.001）;高度显著提高抗炎细胞因子IL-10质量浓度及其mRNA的表达（P＜0.001）,且呈剂量依赖效应;极显著降低MyD88、NF-κB mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.001）。由此得出,沙葱总黄酮水洗组分对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞具有抗炎作用,其抗炎活性可能是通过抑制促炎性介质NO、TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌并提高抗炎性细胞因子IL-10的质量浓度实现的,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。     

Anti-inflammatory activity of Chrysanthemum zawadskii var. latilobum leaf extract through haem oxygenase-1 induction

Chrysanthemum zawadskii var. latilobum (CZ) has been widely used as a tea in Korea. In this study, we investigated the involvement of anti-inflammatory haem oxygenase-1 (HO-1) in the inhibitory activity of a CZ leaf extracts on nitric oxide (NO) production and inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW264.7 cells. At the highest concentration of CZ leaf extract (50 μg/mL), NO production was 10% of that in LPS-stimulated macrophages, whereas iNOS protein expression was 5% of that in LPS-stimulated macrophages. CZ leaf extract also inhibited iNOS mRNA expression in a concentration-dependant manner, and at 50 μg/mL, iNOS mRNA expression was approximately 15% of that in LPS-stimulated cells. The CZ leaf extract induced HO-1 expression in a dose-dependent manner, and blocking HO-1 activity abolished the anti-inflammatory effect of CZ leaf extract. These results suggest that CZ leaf extract has a potent anti-inflammatory activity in RAW264.7 cells through the induction of HO-1.     

虫草素抑制脂多糖诱导的小胶质细胞活化及神经保护作用

目的：研究虫草素抑制脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导小胶质细胞激活及其神经保护作用。方法：培养原代小鼠小胶质细胞,以LPS激活小胶质细胞使NO大量释放,同时给予不同浓度的虫草素（0.1～10 μmol/L）处理,四甲基偶氮唑蓝（3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT）法检测细胞存活率,Griess法测定小胶质细胞NO释放,逆转录聚合酶链式反应法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxidesynthase,iNOS）的mRNA表达。以硝普钠作为NO供体,以1,1-二苯基苦基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基作为自由基的供体,分别考察虫草素对NO和DPPH自由基的直接清除作用。分别以H2O2和以LPS激活的小胶质细胞条件培养液损伤小鼠PC12神经元细胞,MTT法考察虫草素对PC12细胞损伤的保护作用。此外,以羟胺法测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。结果：虫草素能够显著抑制LPS激活的原代小鼠小胶质细胞NO产生及iNOS mRNA表达,同时不影响细胞的存活率;虫草素具有显著的NO清除和DPPH自由基清除作用;虫草素本身对PC12小鼠神经元细胞的生长没有显著影响,但能够显著抑制H2O2或活化小胶质细胞的条件培养液引起的PC12细胞损伤。此外,虫草素可显著提高H2O2损伤的PC12细胞中SOD活性。结论：虫草素可通过抑制iNOS转录和直接清除NO而抑制LPS激活小胶质细胞的NO产生;虫草素还可通过抑制小胶质细胞激活而对PC12神经元细胞产生保护作用,也可通过提高SOD活性而保护H2O2损伤的PC12细胞。因此,虫草素可能对与小胶质细胞激活相关的神经退行性疾病具有潜在的防治作用。     

鼠曲草总黄酮抑制疼痛模型小鼠炎症因子产生而致镇痛作用

目的：研究鼠曲草总黄酮的镇痛活性及其作用机制。方法：采用热板刺激、腹腔注射醋酸法构建小鼠疼痛模型,观察灌胃给予不同剂量的鼠曲草总黄酮对小鼠疼痛反应的作用,研究鼠曲草总黄酮对疼痛小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、一氧化氮（nitric oxide,NO）的作用,以及对腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）基因表达的影响。结果：鼠曲草总黄酮可明显延长热刺激引起的小鼠舔足时间,抑制腹腔注射醋酸后引起的小鼠扭体反应;降低腹腔注射醋酸致痛小鼠血清中TNF-α、IL-6、NO的含量,也抑制小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、iNOS基因表达。结论：鼠曲草总黄酮具有镇痛作用,其作用与减少血清中炎症因子的产生和巨噬细胞介导的炎症反应有关。     

Chemical composition and immuno-stimulating properties of polysaccharide biological response modifier isolated from Radix Angelica sinensis

To investigate the immunomodulating activity of Radix Angelica sinensis, three different Radix A. sinensis polysaccharide fractions (APFs, namely APF1, APF2 and APF3) were isolated by fractionation using gel filtration and were identified as the immunomodulators of murine peritoneal macrophages. In the present study, it was found that various APFs induced a significant increase in cellular lysosomal enzyme activity, nitric oxide (NO) formation, reactive oxygen species (ROS) production and tumor necrosis factor-α (TNF-α) secretion in macrophages in vitro. Furthermore, APFs dose-dependently stimulated macrophages to produce NO through the up-regulation of inducible NO synthase (iNOS) activity and the maximal effect occurred at a concentration of 500 μg/ml by APF2, followed by APF3 and APF1 in decreasing order. Moreover, the predominant sugars in various APFs were identified as rhamnose, arabonose, glucose, galactose and the ratio of these monosaccharides differed from one polysaccharide fraction to another, which also affected the cellular effector molecule production in macrophages.     

Comparative effects of tocotrienol-rich fraction, α-tocopherol and α-tocopheryl acetate on inflammatory mediators and nuclear factor kappa B expression in mouse peritoneal macrophages

The effects of tocotrienol-rich fraction (TRF), α-tocopherol (T) and α-tocopheryl acetate (TA) on lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammatory responses in mouse peritoneal macrophages were examined. Results showed that at 5–30 μg/ml, all test compounds plus 1 μg/ml LPS exhibited no cytotoxic effects on macrophage cells. Compared with T and TA, TRF showed the strongest anti-inflammatory activity as demonstrated by its potency in inhibiting the LPS-induced nitric oxide (NO), prostaglandin E₂ (PGE₂), and proinflammatory cytokine (TNF-α, IFN-γ, IL-1β and IL-6) production. At 10 μg/ml, it significantly blocked the LPS induction of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expression, but has no effect on cyclooxygenase-1 (COX-1). Furthermore, TRF also showed a greater inhibition on the nuclear factor kappa B (NF-κB) expression than T and TA. These results suggest that TRF could be a better agent than T and TA for use in the prevention of chronic inflammatory diseases.