发酵时间对桦褐孔菌主要活性成分的影响

该文主要研究桦褐孔菌在液体发酵过程中主要活性成分多糖、三萜甾醇的累积与代谢变化。采用液体发酵法培养桦褐孔菌获得不同发酵时间的发酵产物,分别采用苯酚硫酸法及HPTLC分析法检测不同培养时间的菌丝体中多糖、三萜和甾醇的含量,DPPH与硫酸香草醛显色法检测抗氧化活性。结果显示,随发酵时间的延长,桦褐孔菌菌丝体生物量越来越高,经HPTLC法分析可见发酵后的菌丝体与桦褐孔菌子实体中的三萜和甾醇成分相似。且多糖、三萜甾醇的含量均呈现先增高后降低的趋势,而通过显色反应,发现菌丝体中含有子实体未发现的抗氧化三萜成分。通过研究确定了桦褐孔菌液体发酵过程中主要活性成分变化,确立最佳发酵时间,为桦褐孔菌的工业化生产提供参考。     

诱导发酵桦褐孔菌三萜类化合物合成及其抗氧化功能的研究

本文通过在桦褐孔菌液体发酵过程中加入外源诱导剂,探究其对桦褐孔菌菌丝体中三萜类化合物含量以及菌丝体醇提物抗氧化性的影响。结果表明:茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(Salicylic acid,SA)、亚油酸、桦树皮水提物、铁离子(Fe2+)5种诱导剂均能增加菌丝体中总三萜类化合物含量和提高其醇提物抗氧化能力。其中MeJA效果最佳,在第6 d加入50 μmol/L茉莉酸甲酯可得到菌丝体的量为(10.05±0.01) g/L,菌丝体中三萜含量(107.72±1.07) mg/g,三萜总量为1082.19 mg/L,与不加入诱导剂的对照组相比三萜总量增加了119.96%。抗氧化能力试验中,MeJA诱导的桦褐孔菌醇提物总还原力1.003,DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的IC₅₀分别为0.091、1.657、0.024 mg/mL,与对照组相比总还原能力与各自由基清除率分别提高了46.67%、53.23%、32.17%和30.30%。本研究为诱导剂在提高桦褐孔菌三萜类化合物产量上以及开发新的抗氧化剂提供科学依据。     

桦褐孔菌人工培养菌丝营养成分分析

以桦褐孔菌人工培养菌丝体为材料,对桦褐孔菌蛋白质、脂肪、多糖、氨基酸、矿质元素等营养成分进行分析及评价。采用公认的标准方法进行粗蛋白、粗脂肪、粗总糖和10种主要矿质元素、17种氨基酸等全营养成分测定。结果表明,桦褐孔菌人工培养菌丝体的一般营养成分中,粗脂肪含量最低,粗蛋白含量最高。矿质元素中,K的含量最高,Mg、Ca、Na的含量次之,Mn、Zn、Cu、Cr、Ni含量较低。氨基酸中,必需氨基酸含量(Thr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Lys)占总氨基酸的41.34%,非必需氨基酸占58.66%,含量高于必需氨基酸。旨在为科学合理地开发利用桦褐孔菌的食用菌资源提供科学依据。     

两种基质桦褐孔菌菌丝多糖免疫功能研究

培养桦褐孔菌菌丝体和药质菌丝体,采用超声波方式提取两种粗多糖,再将粗多糖分别作用于小白鼠,研究小白鼠的碳廓清实验和对小白鼠免疫器官质量的影响。结果表明:桦褐孔菌菌丝体粗多糖和桦褐孔菌药质菌丝体粗多糖都可以提高小白鼠的非特异性免疫功能;多糖种类和灌胃剂量对小白鼠非特异性免疫的影响不同,药质粗多糖比粗多糖对小白鼠的非特异性免疫功能的影响大,效果好。     

超声波辅助提取桦褐孔菌子实体中多糖和三萜

研究了优化超声辅助提取桦褐孔菌中多糖和三萜类物质的工艺。以蒸馏水和异丙醇为提取剂,用超声波辅助提取桦褐孔菌多糖和三萜类物质,以不同处理条件、超声功率、超声次数、超声处理时间为试验因素,以多糖和三萜的提取率为考察指标进行单因素实验确定最佳提取工艺。超声辅助技术提取桦褐孔菌子实体中多糖类和三萜类物质的最佳工艺条件为:超声功率400 W、超声20次、超声10 min,在此条件下多糖得率最高,为11.62%,总三萜类物质得率在2%,使得多糖和三萜类物质二者共提取得率达到13.57%。     

大孔吸附树脂分离纯化桦褐孔菌三萜工艺研究

为研究大孔吸附树脂纯化桦褐孔菌三萜的工艺,筛选了适宜的大孔吸附树脂,并以吸附率和解析率为指标,利用最适的树脂进行对桦褐孔菌的静态吸附和解析的条件优化,研究了上样液体积、吸附时间、样液pH值、解析时间、解析液种类和解析液浓度的影响,确定纯化工艺参数。结果表明:在供试的5种大孔吸附树脂中,AB-8型大孔吸附树脂适合分离桦褐孔菌三萜。最佳分离条件为:样液在自然pH值条件下,按10mL/g树脂进行吸附12h后利用蒸馏水除去未吸附的样液后选择30%乙醇及70%乙醇进行依次解析12h,此时三萜的吸附率和解析率分别可达93%和80%以上。表明AB-8型大孔吸附树脂纯化桦褐孔菌三萜的效果较佳。     

桦褐孔菌多糖磷酸化修饰工艺研究

桦褐孔菌多糖是桦褐孔菌中主要的生物活性成分,在抗氧化、提高免疫力等方面具有重要作用和广泛的药用价值。该文以桦褐孔菌为研究对象,以桦褐孔菌多糖溶液中磷酸根含量为指标,通过单因素试验及响应面法对桦褐孔菌多糖磷酸化修饰工艺条件进行优化,以提高其多糖的生物活性。结果表明,桦褐孔菌多糖磷酸化修饰最佳工艺条件：三聚磷酸钠与三偏磷酸钠质量比为6∶1、反应温度为75℃,反应时间为4 h,pH值为8.6,修饰后的桦褐孔菌多糖溶液中磷酸根含量为9.58%。该结果为桦褐孔菌多糖磷酸化衍生物的开发提供参考依据。     

桦褐孔菌发酵液中三萜化合物和多糖的微波辅助双水相萃取

采用微波辅助乙醇/K2CO3双水相提取技术实现一步操作提取分离桦褐孔菌发酵液中的三萜化合物和多糖。通过考察分配系数和回收率,探讨三萜化合物和多糖在体系中的分配行为。获得三萜化合物和多糖的最佳微波提取条件为:最佳相组成中,K2CO3的质量分数为25%,乙醇的质量分数为24%;固液比为1∶50;微波功率为540 W;微波时间为120 s。此条件下,三萜化合物的提取率为(99.22±0.68)%,多糖的提取率为(98.34±0.83)%,蛋白去除率为(94.67±0.74)%,菌丝体去除率为100%。该方法操作简单,三萜化合物和多糖提取率高、分离效果好,同时去除了菌丝体和蛋白,更加有利于产品的后续纯化。     

NSGA-II遗传算法结合响应面法优化桦褐孔菌活性成分提取工艺

本文以研究超声辅助酶法对桦褐孔菌中总三萜、黄酮提取工艺为目的。采用紫外分光光度法为检测方法,以总三萜、黄酮得率为评价指标,考察酶添加量、酶解时间、液料比、乙醇浓度对得率的影响,通过NSGA-II遗传算法结合响应面分析获得最佳提取工艺,最后利用超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）对桦褐孔菌中主要化学成分进行分析鉴定。实验结果获得同时提取桦褐孔菌中总三萜、黄酮的最优提取工艺为Pareto前沿面B区域方案,确定酶添加量1.9%、酶解时间45 min、液料比20 mL/g、乙醇浓度64％为最佳提取条件,预测总三萜、黄酮得率理论平均值为2.690%、5.394%,平行验证三次,实际测得总三萜、黄酮平均得率为2.670%±0.05%、5.356%±0.09%,与预测得率平均值的相对误差为0.75%、0.70%,经鉴定桦褐孔菌主要包含白桦脂醇、羊毛甾醇、紫萁酮、槲皮素四种有效成分,证明NSGA-II遗传算法结合响应面优化桦褐孔菌提取工艺的检验指标与预测结果拟合效果良好。     

超声波辅助提取桦褐孔菌子实体中多糖的工艺优化

研究了优化超声提取桦褐孔菌中多糖的工艺.以蒸馏水为提取剂,用超声波辅助提取桦褐孔菌多糖类物质,以不同处理条件、超声功率、超声次数、超声处理时间为试验因素,以多糖的提取率为考察指标进行单因素试验确定最佳提取工艺.超声辅助技术提取桦褐孔菌子实体中多糖类的最佳工艺条件为:超声功率400W,超声20次,超声10min,在此条件下,多糖得率最高,为11.62％.     

桦褐孔菌子实体与菌丝体营养成分比较分析

将液体培养的菌丝体与野生子实体烘干磨粉处理,对其营养成分测定分析,结果表明：菌丝体粗多糖含量（7.43 g/100 g）显著高于子实体粗多糖含量（2.31 g/100 g）,二者均由果糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖7 种组成;凯氏定氮法测得子实体粗蛋白含量为6.69 g/100 g,菌丝体粗蛋白含量为21.08 g/100 g;全自动氨基酸分析仪测得子实体含14 种氨基酸,菌丝体含16 种氨基酸;原子吸收分光光度计测得桦褐孔菌中含有大量K、Fe、Ca、Zn、Mg元素,少量Na、Mn、Se。研究结果表明桦褐孔菌的菌丝体营养成分比较丰富,可以代替子实体应用于食品及药品行业中,缓解子实体这种珍稀野生资源的不足。     

发酵桦褐孔菌对果蝇寿命及抗氧化能力的影响

研究桦褐孔菌深层培养条件以及培养基。并将培养得到的桦褐孔菌加入果蝇饲料,以基础饲料为对照,研究桦褐孔菌对果蝇寿命及抗氧化能力的影响。用加入不同剂量的桦褐孔菌饲料喂养果蝇,每3天记录果蝇死亡数,绘制生命曲线。通过测定不同饲养天数的果蝇体内主要抗氧化酶活力及脂质过氧化产物丙二醛含量,评价深层培养桦褐孔菌对果蝇抗氧化能力的影响。结果表明深层培养获得的桦褐孔菌可有效延长果蝇平均寿命,显著提高果蝇体内超氧化物岐化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)活力,抑制丙二醛(MDA)的生成。可见,深层培养桦褐孔菌具有抗氧化能力和抗衰老的功能。     

响应面法优化桦褐孔菌胞外多糖发酵条件

为了获得更多的桦褐孔菌胞外多糖,以单因素摇瓶实验和响应面分析对药用真菌桦褐孔菌培养基进行了优化,确定了优化培养基(g/L):玉米糖化液21. 1,可溶性淀粉22. 3,酵母浸粉5. 1、蛋白胨4. 1、KH2PO42、MgSO40. 5,起始pH为6. 0.在优化条件下,研究了0～12d,桦褐孔菌发酵pH、还原糖、胞外粗多糖,生物量的变化情况.摇瓶发酵结果表明,整个过程中pH变化不明显,生物量先增后趋于稳定,于6 d达最大值11. 35 g/L,胞外粗多糖先降后升又降,在7d达最大3. 85 g/L.     

广叶绣球菌菌丝体与子实体蛋白质营养价值评价

测定广叶绣球菌（Sparassis latifolia）子实体及不同配方液体培养基中菌丝体的蛋白质和氨基酸含量,采用国际通用的蛋白质营养评价方法对子实体和菌丝体的营养价值进行综合评价。不同液体培养基中菌丝体蛋白质含量为26.8%～30.6%,子实体蛋白质含量为13.4%;玉米粉配方菌丝体第一限制氨基酸为异亮氨酸,面粉、糯米粉配方第一限制氨基酸为含硫氨基酸（蛋氨酸＋胱氨酸）;子实体必需氨基酸含量为48.62%,高于各液体配方菌丝体,且子实体必需氨基酸指数、生物价最高。借助模糊识别法得出,玉米粉、面粉、糯米粉菌丝体与全鸡蛋蛋白质的贴近度分别为0.94、0.90和0.92,高于子实体。     

响应面法优化桦褐孔菌多糖提取工艺及其抗氧化活性

利用超声波辅助技术研究桦褐孔菌多糖的最佳提取工艺,并对其抗氧化活性进行评价。在单因素试验基础上,以多糖提取率为指标,采用Box-Behnken响应面法优化超声辅助提取条件;采用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法纯化多糖后,通过DPPH自由基清除试验来评价其抗氧化活性。结果表明,桦褐孔菌多糖的最佳提取条件为:超声时间31 min,超声温度52℃,液料比为21∶1(mL/g),多糖提取率达到(3.81±0.19)%。桦褐孔菌粗多糖中多糖质量分数为19.0%(以葡萄糖计),蛋白质量分数为13.9%(以牛血清蛋白计)。体外抗氧化试验显示,桦褐孔菌精制多糖对DPPH自由基有一定的清除作用。     

响应面优化桦褐孔菌总三萜超声提取工艺

在单因素试验的基础上,根据中心组合试验设计原理,利用响应面分析法对桦褐孔菌总三萜超声提取过程中3个主要影响因素:超声时间、超声温度、料液比进行了优化。结果表明,超声提取温度、时间对三萜得率影响最为显著(p<0.001),最佳工艺条件为:采用异丙醇做提取溶剂,料液比为23mL/g,在60℃下超声提取22min。在此最佳条件下,总三萜得率为5.40%,试验结果与模型预测值相符。     

桦褐孔菌富锗培养及其总黄酮抗氧化活性

以菌落直径为指标考察桦褐孔菌富锗培养的适宜加锗量,采用L9(34)正交优选的提取条件微波提取富锗培养后的桦褐孔菌总黄酮(简称Ge-TFIO),并运用活性氧(ROS)试剂盒、DPPH·法、H2O2诱导小鼠氧化溶血抑制实验评价Ge-TFIO的抗氧化能力。结果表明:桦褐孔菌富锗培养的适宜加锗量为40mg/L;富锗培养的桦褐孔菌总黄酮微波提取优化工艺条件为乙醇浓度80%、料液比1:40、处理时间180s、微波功率352W,此条件下,Ge-TFIO提取率为4.59%;2mg/mLGe-TFIO的抗活性氧单位为25.85U/mL,DPPH·自由基清除率为91.39%,H2O2诱导红细胞氧化溶血抑制率约为29.13%,可见,富锗培养后的桦褐孔菌总黄酮含量较高,具有较强的抗氧化活性。     

超声速气流粉碎制备超细白桦茸

采用超声速气流粉碎法进行白桦茸的超细粉碎,利用激光粒度分析仪和扫描电镜对超细粉末进行观察,比较原料和超细粉形态学上的差异。结果表明:超细粉末颗粒变小,大小均匀;电镜下观察,绝大多数细胞壁破裂,基本无完整细胞存在,且超微粉碎提高了白桦茸的营养保健功能。     

桦褐孔菌原生质体制备与再生

研究桦褐孔菌原生质体制备与再生条件。采用正交试验法确定复合酶比例,用单因素试验测定不同等渗液、酶解时间、桦褐孔菌菌龄、酶解温度、再生培养基对桦褐孔菌原生质体制备与再生的影响。结果表明：混合酶(纤维素酶5mg/mL、蜗牛酶15mg/mL、溶壁酶15mg/mL、崩溃酶15mg/mL)、菌龄为7d的菌丝,采用0.6mol/L MgSO4为渗透压稳定液,酶解温度35℃,酶解时间5.5h,有利于原生质体的制备。就原生质体再生而言,酶解时间为3.5h制得的原生质体,以MgSO4作为渗透压稳定液,以完全再生培养基(CYM)和麦芽酵母葡萄糖再生培养基(GYM)有利于原生质体再生,再生率最高为0.13%。