粘质沙雷氏菌摇瓶发酵产灵菌红素的工艺优化

为提高灵菌红素产率,本研究通过单因素试验和正交试验优化粘质沙雷氏菌发酵培养基组分和发酵条件,结果表明,最佳培养基配方为：一级大豆油、蛋白胨、NaCl和K2HPO4的添加量分别为4 mL/100 g、1.5%、0.15%和0.15%;最佳发酵条件为：温度30 ℃、接种量1%、装液量70 mL/250 mL三角瓶、振荡培养转速200 r/min,发酵36 h后,灵菌红素的产量最大,为2.98 g/L。粘质沙雷氏菌的胞外脂肪酶活力为15 U/mL。     

响应面试验优化黏质沙雷氏菌利用菜籽饼粕产灵菌红素工艺

为筛选得到一株产灵菌红素的黏质沙雷氏菌为发酵菌种,采用响应面法优化培养基组分和发酵条件,提高黏质沙雷氏菌生产灵菌红素的效率,结果表明,黏质沙雷氏菌最优培养基组分及发酵条件为玉米粉用量10 g/L、菜籽饼粕用量21.7 g/L、硫酸锌质量浓度0.05 g/L、发酵液初始pH 5.8、接种量5.5%、装液量80 m L/250 m L三角瓶、温度27℃、摇床转速200 r/min,培养24 h后,发酵液中灵菌红素产量达到11.56 g/L。本研究为高温菜籽饼粕原料发酵生产灵菌红素提供理论依据。     

响应面法优化粘质沙雷氏菌产灵菌红素发酵工艺

为提高粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)PG12的灵菌红素产量,以K₂HPO₄浓度、溶氧量和发酵时间为考察因素,以灵菌红素产量为评价指标,对灵菌红素发酵工艺条件进行研究。在单因素试验基础上,通过响应面法对发酵工艺条件进行优化。结果表明,菌株产灵菌红素的最佳的发酵工艺条件为K₂HPO₄浓度28.45 mmol/L,溶氧量47%,发酵时间29 h。在最佳条件下,灵菌红素产量达到1 636.5 mg/L,较原始条件下的灵菌红素产量提高了13.14%。该研究可为灵菌红素发酵工艺条件的优化及生产实践提供有价值的参考。     

一株分离自鳜鱼肠道的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)HFUT 1301的鉴定及灵菌红素的分析

灵菌红素是粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)产生的具有抗癌功效的一种色素。本研究从鳜鱼肠道中筛选出一株高产红色素的菌株,根据形态学特征、生理生化性质、16S r DNA对其进行鉴定,采用紫外可见光全波长扫描、LC-MS和FT-IR图谱鉴定该菌种产红色素的结构,研究表明:在基础培养基上菌落呈圆形、直径1~3 mm、中间红色不透明,呈隆起状、边缘整齐,16S r DNA片段大小为1445 bp,与粘质沙雷氏菌同源性为99%,将该菌株命名为S.marcescens HFUT 1301;通过超声波辅助乙醇浸提及硅胶色谱分离纯化,获得纯度超过95%的红色素;在p H 3和p H 10的甲醇溶液中,该色素分别在535 nm和470 nm波长处存在明显吸收峰;LC-MS图谱主要离子峰为323.5486和324.8468;FT-IR图谱的主要吸收波数为3396 cm-1、2923 cm-1、2851 cm-1、1710 cm-1、1465cm-1和1164 cm-1。根据已有报道灵菌红素结构特征,推测该红色素为灵菌红素。在发酵培养基上灵菌红素产量达到3.22 g/L。     

河南烟草主要病毒发生种类及侵染类型分析

为进一步明确河南烟区主要病毒种类及侵染类型,2020年从河南9个烟区分别采集疑似烟草普通花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Y病毒(PVY)和烟草蚀纹病毒(TEV)侵染的烟草样本共407份,分别利用上述4种病毒的特异性引物进行单重RT-PCR病原检测。检测结果表明,河南烟区病毒病样本的总检出率为98.28%,其中,检出率最高的是CMV为89.19%,其余依次为TMV 63.88%、PVY 28.99%和TEV 24.32%。侵染类型分为单一病毒侵染和复合病毒侵染,单一病毒侵染率为23.34%,该侵染类型中CMV所占比例最高,为16.71%;复合病毒侵染率为74.94%,复合病毒侵染类型中CMV+TMV所占比例最高,为36.86%,其次分别为CMV+TMV+PVY和CMV+TEV+PVY两种侵染类型,侵染比例均是7.62%。因此,CMV是2020年河南烟区的优势病毒,田间侵染以复合病毒侵染为主,侵染类型主要有CMV+TMV、CMV+TMV+PVY及CMV+TEV+PVY。     

粘质沙雷氏菌的分离鉴定及产红色素培养基的优化

为确定KMR-3菌株的分类地位,对其进行了分类鉴定;为了提高其红色素产量,对发酵培养基进行了优化。以分离到的KMR-3菌株为供试材料,通过形态学、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析对其进行了生物学分类鉴定。以LB液体培养基作为基础培养基,通过优化其不同组分(蛋白胨,酵母膏和NaCl)及含量以提高红色素产量。结果表明:KMR-3菌株归属为粘质沙雷氏菌,该菌株产红色素的最佳培养基为5g/L胰蛋白胨和1%甘油,pH5.0,温度28℃;该条件下,色素产量是基础培养基的13.4倍。该培养基蛋白用量少,促进粘质沙雷氏菌产生大量红色素,为其大规模生产提供依据。     

一株产灵菌红素粘质沙雷氏菌的筛选、鉴定及发酵条件

利用贫营养条件,从土壤样品中筛选到一株产红色素的菌株。经形态学、生理生化实验进行菌株初步鉴定,并经16S rDNA测序分析确定该菌株为粘质沙雷氏菌属,将其命名为:Serratiamarcescens JNB5-1。该菌株所产红色素经全波长扫描及LC-MS确定为灵菌红素。对Serratiamarcecens JNB5-1产灵菌红素做初步发酵研究,在蔗糖2 g/dL,牛肉膏1.5 g/dL,CaCl21 g/dL,脯氨酸0.75 g/dL,MgSO4.7H2O 0.02 g/dL,FeSO4.7H2O 0.006 g/dL的培养基中发酵72 h后,其发酵产量可达4.139 g/L。     

河南烟区烟草病毒病种类与分布

为明确近年来河南省烟草病毒病的种类及分布状况,利用9种病毒血清通过酶联免疫吸附法(ELISA)对2015—2017年间河南11个烟叶产区的566份病毒病样品进行了系统检测。结果表明,河南烟区病毒病总检出率为96.47%;烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)、烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus, TEV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)和烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus, TVBMV)5种病毒在河南烟区危害最为严重,且TMV已发展为河南烟区病毒的优势种。全省侵染类型中单一病毒侵染率为34.63%,TMV的单一病毒侵染率最高,为26.86%;两种及以上病毒复合侵染率为61.84%,复合侵染主要存在5种类型,即TMV+CMV、TMV+CMV+TEV、TMV+TEV+PVY、TMV+TEV+TVBMV、TMV+CMV+TEV+PVY,侵染率分别为18.73%、3.36%、3.89%、5.83%和7.24%。因此,河南省11个烟叶产区的主要病毒种类确定为TMV、CMV、TEV、PVY和TVBMV,侵染类型为TMV+CMV、TMV+CMV+TEV、TMV+TEV+PVY,TMV+TEV+TVBMV、TMV+CMV+TEV+PVY。     

DeoR家族转录因子PsrB调控黏质沙雷氏菌合成灵菌红素

灵菌红素（prodigiosin,PG）,一种由粘质沙雷氏菌产生的次级代谢产物,因其具有抗细菌、抗疟疾、抗肿瘤和免疫抑制等重要功能而备受关注,然而,对黏质沙雷氏菌合成灵菌红素的调控机制的了解依然有限。作者以黏质沙雷氏菌JNB5-1为出发菌株,通过构建Tn5G转座子插入突变文库,发现并解析了DeoR家族转录调控因子BVG90_04085（PsrB）正调控黏质沙雷氏菌合成灵菌红素的分子机制。结果发现,LB培养基中psrB突变株SK8-61和ΔPsrB产灵菌红素能力仅为出发菌株JNB5-1的0.22倍和0.26倍。RT-qPCR分析菌株JNB5-1及ΔPsrB中pig基因簇的表达水平发现,相比于出发菌株JNB5-1,在psrB缺失突变株ΔPsrB中,灵菌红素合成途径关键基因pigABCDEFGHIJKLMN的表达水平下调了5.81~22.93倍。凝胶阻滞EMSA等实验证实转录因子PsrB可直接与pig基因簇启动子区域结合,表明转录因子PsrB正调控黏质沙雷氏菌合成灵菌红素的分子机制可能为：PsrB与灵菌红素合成基因簇启动子区域直接结合,正向调控pig基因簇的转录水平,进而影响黏质沙雷氏菌合成灵菌红素。最后,发酵培养基中psrB过表达菌株JNB5-1/pXW1906可合成8.61 g/L的灵菌红素,为出发菌株JNB5-1（5.53 g/L）的1.56倍。     

高产舍雷肽酶的粘质沙雷氏菌诱变选育

舍雷肽酶是一种来自粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的碱性蛋白酶,具有良好的抗炎和抗肿胀作用,应用于临床疾病的治疗已有多年。为了获得产酶活力高、传代稳定且不产灵菌红素的舍雷肽酶发酵生产菌株,以1株分离自家蚕(Bombyx mori)肠道,产舍雷肽酶的粘质沙雷氏菌LL-413为出发菌株,用紫外线和微波连续诱变,经过筛选,获得了2株产酶能力高,不产灵菌红素,且传代稳定的突变株MW-9和MW-14菌株,产酶活力分别达到982 U/mL和956 U/mL,是原始菌株的1.98倍和1.92倍。     

湖南烟草病毒病种类检测与系统进化分析

为明确湖南烟草病毒病的种类及分布状况,利用小干扰RNA（siRNA）测序和反转录PCR（RT-PCR）对湖南烟区样品进行检测,分析主要病毒侵染类型,最大似然法构建系统进化树确定分类地位。结果表明,湖南烟草受到烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）、番茄斑驳花叶病毒（Tomato mottle mosaic virus,ToMMV）、地黄花叶病毒（Rehmannia mosaic virus,ReMV）和辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMV）等6种病毒的侵染,其中ToMMV、ReMV、PMMV首次被检测到,TMV、CMV和PVY是主要病毒,TMV为优势病毒,复合侵染是主要侵染类型,复合侵染率为71.29%;湖南烟草上的TMV分离物形成3个独立组系,CMV分离物属群组I的亚组IB,PVY分离物属PVY^NTN-a、PVY^E和PVY^SYR-I株系。本研究摸清了湖南烟草病毒种类、分布及侵染情况,明确了TMV、CMV、PVY的分类地位,为病毒病的防治提供了理论依据。     

陕西烟草病毒病毒原鉴定及种群区系分布

2001年在陕西省烟区采集了165个样品,经过生物学测定、血清学反应(琼脂双扩散法和酶联免疫吸附法)和电镜观察,鉴定出5种为害烟草的病毒。其中烟草普通花叶病毒(TMV)34份、烟草蚀纹病毒(TEV)32份、黄瓜花叶病毒(CMV)31份、马铃薯Y病毒(PVY)16份、烟草环斑病毒(TRSV)4份,分别占总标样的20.61%、19.39%、18.79%、9.7%和2.4%。TMV和CMV、TMV和TEV、TMV和PVY复合侵染各为35、2和11份,分别占总标样的21.21%、1.2%和6.67%。TEV和PVY在某些烟区有明显上升的趋势。     

抗烟草花叶病毒(TMV)生防菌的鉴定及其发酵条件优化

为有效防治烟草普通花叶病毒病(TMV),从土壤中分离筛选到1株抗TMV的细菌菌株Z5,经形态学、生理生化和分子生物学鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),该菌培养液对TMV体外抑制率达到96.40％,田间小区试验对烟草普通花叶病毒病的防效为50.43％.通过单因素法优化Z5发酵体系,最适培养基...     

黔江烟田病毒与周边作物及杂草携毒关系分析

为明确烟田烟叶携带病毒与周边作物和杂草携带病毒的亲缘关系,利用RT-PCR克隆烟田烟叶与周边杂草和作物携带病毒外壳蛋白（CP）,通过MEGA序列比对分析黔江烟田烟叶和周边杂草与作物所带病毒种类及其亲缘关系。结果显示,黔江地区烟草感染病毒有烟草普通花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）和马铃薯Y病毒（PVY）;在烟田周边杂草和作物番薯、四季豆、糯米团、三悬叶钩草、杂草中检测到了TMV;自番薯、四季豆、蓬蘽、千里光、糯米团、三悬叶钩草中扩增出CMV;自番薯、四季豆、假酸浆、杂草中扩增出了PVY。进化关系分析显示,三悬叶钩草、四季豆、糯米团以及番薯为黔江烟田烟叶TMV的主要来源,蓬蘽为烟叶病毒病CMV的侵染源,假酸浆为烟田PVY的主要来源。     

重庆丰都烟区田间烟草病毒病及其Dot-ELISA检测

为明确重庆市丰都烟区田间烟草病毒病的发生情况,开展了病毒病调查,并于还苗期、伸根期、旺长期和成熟期共采集病毒病样品117份,利用TMV、CMV、PVY、TEV、PVX、TuMV和BBWV-2等7种病毒的特异性抗体对其进行Dot-ELISA检测。调查发现,病毒病症状主要包括花叶、畸形、坏死斑、脉坏死、矮化和蚀纹等类型。9个调查点烟草病毒病的发病率在28%~84%,病情指数最低为6.67,最高为60.89。Dot-ELISA检测结果表明,还苗期样品未检出病毒;伸根期没有检测到PVX;旺长期和成熟期均检测到7种病毒,其中TMV和CMV的检出率较高,其次为TuMV和PVY,PVX的检出率较低。此结果表明,烟草病毒病在丰都烟区发生较普遍,且TMV和CMV为田间烟草病毒病的优势毒源。     

山东烟区主要病毒的株系鉴定

1995年至1997年间,从山东烟区各主要产烟县(市)采集病毒样品,经鉴定、分类、分离、纯化后,对纯化物进行了生物学特性、病毒粒体形态、血清学关系等方面的比较,从而明确了山东烟区主要烟草病毒病病原物的株系:烟草黄瓜花叶病毒的普通株系(CMVc)、坏死株系(CMVTN)、黄化株系(CMVY);烟草普通花叶病毒的普通株系(TMVC)、坏死株系(TMVN)、黄化株系(TMVY)、环斑株系(TMVRS);烟草马铃薯Y病毒的普通株系(PVYO)、坏死株系(PVYN);烟草蚀纹病毒的轻症株系(TEVM)、重症株系(TEVs)。其中烟草黄瓜花叶病毒的普通株系(CMVC)、烟草普通花叶病毒的普通株系(TMVC)、烟草马铃薯Y病毒的坏死株系(PVYN)、烟草蚀纹病毒的重症株系(TEVS)是优势株系。烟草蚀纹病毒(TEV)的株系毒力分化属国内首次报道。      

安徽省烟草病毒种类的血清学鉴定

2007 年从安徽亳州、宣城和芜湖等地的烟草产区共采集181 个表现明显病毒病症状的病样,采用Tas-ELISA 和间 接ELISA 方法共检测112 个病样,其中分别检测宣城黄渡、宣城金坝、芜湖红杨、芜湖三元各16 个病样以及亳州陈店48个病样。结果显示,安徽宣城32 个病样中,TMV、CMV、PVY 的阳性率分别为91%、3%、50%,芜湖32 个病样中,TMV、CMV、PVY 的阳性率分别为66%、0、75%,说明宣城、芜湖烟区侵染烟草的病毒种类以TMV、PVY 为主,CMV 为零星侵染;亳州48 个病样中,TMV、CMV、PVY 的阳性率分别为100%、48%、8%,说明亳州烟区侵染烟草的病毒种类以TMV、CMV 为主,PVY 侵染发生较少。