沉默乙酰肝素酶对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶(heparanase, HPA)基因表达对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响.方法:根据人HPA基因序列转录RNA的位置及小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,设计了4个靶位点,并构建了4个分别针对靶位点的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,同时合成了阴性和阳性对照质粒表达载体.采用阳离子脂质体法将以上质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞,分别采用RT-PCR和Western印迹法检测转染前后HPA mRNA和蛋白表达的变化,选出对HPA沉默效果最佳的质粒,再应用Transwell小室基质侵袭实验和划痕损伤实验分别研究HPA表达沉默后对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085沉默人胃癌SGC-7901细胞HPA mRNA和蛋白表达的效果最好.pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组中穿透Transwell小室基质的SGC-7901细胞数(289.90±18.11)明显高于对照组(44.00±15.22) (P<0.05),SGC-7901细胞的迁移距离在48、72和96 h内 pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组明显低于对照组(P<0.05). 结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌SGC-7901细胞中HPA mRNA和蛋白表达,从而抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力.HPA可能是治疗胃癌侵袭和转移的一个新靶点.     

藤梨根制剂对胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9和SDF-1表达的影响

目的:通过观察藤梨根制剂对胃癌细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)表达的影响,探讨藤梨根制剂的抗胃癌机制。方法:分别采用0 g·L~(-1)、15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)、30 g·L~(-1)藤梨根制剂处理胃癌SGC-7901细胞,分别处理12 h、24 h、48 h、72 h,采用噻唑蓝比色法(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)实验检测胃癌SGC-7901细胞增殖情况,采用Transwell实验及细胞划痕实验检测胃癌SGC-7901细胞侵袭、迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白印迹法检测胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1 m RNA及蛋白表达水平。结果:MTT检测结果可见,15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)、30 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈现一定剂量、时间依赖性(P<0.05);细胞划痕实验结果可见,15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显降低胃癌SGC-7901细胞迁移能力,且呈现一定剂量、时间依赖性(P<0.05);15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭能力,且呈现一定剂量依赖性(P<0.05);15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1 m RNA及蛋白水平表达,且呈现一定剂量依赖性。结论:藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能为下调胃癌细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1表达。     

转录共刺激因子对结直肠癌基质金属蛋白酶及相关蛋白的影响

目的:探讨转录共刺激因子(TAZ)对结直肠癌基质金属蛋白酶及相关增殖蛋白的影响,分析其影响结直肠癌肿瘤生物学行为的可能作用机制。方法:采用合成TAZ小干扰RNA(TAZ-siRNA)转染结直肠癌细胞株HCTT116抑制TAZ表达,检测细胞活性、侵袭迁移能力、细胞凋亡,采用实量定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TAZ与基质金属蛋白酶mRNA表达,采用Western blot法相关蛋白表达。结果:转染组TAZ mRNA与蛋白表达均明显低于对照组与空白组(t=27.116、17.600、24.051、16.168,P<0.01);HCT116细胞活性、侵袭迁移能力均明显低于对照组与空白组,细胞凋亡率均明显高于对照组与空白组(t=12.944、17.613、20.489、12.639、18.324、20.051,P<0.01);基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等mRNA表达均明显低于对照组与空白组,金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达均明显高于对照组与空白组(t=13.588、10.041、6.678、13.164、10.479、6.705,P<0.05或<0.01);B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达均明显低于对照组与空白组,bcl-2相关X蛋白(bax)、细胞色素C(Cyt C)表达均明显高于对照组与空白组(t=9.358、7.670、15.205、19.163、5.937、17.063,P<0.05或<0.01)。结论:抑制转录共刺激因子(TAZ)能够抑制结直肠癌肿瘤细胞增殖与转移,可能与调节基质金属蛋白酶、相关蛋白表达水平有关。     

原发性肝癌中医辨证与外周血免疫抑制细胞表达异常关系

目的:探讨原发性肝癌患者中医辨证与外周血髓源性免疫抑制细胞(myeloid immunosuppressive cell,MDSC)表达关系。方法:收集237例乙型肝炎相关原发性肝癌患者的临床资料,分析MDSC表达与肝癌临床BCLC分期、肝内转移差异。留取外周静脉血检测细胞分化抗原(cell differentiation antigen,CD33),内毒素受体抗原(Endotoxin receptor antigen,CDl4),人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen HLA-DR)、细胞分化抗原(Cell differentiation antigen,CDllb)标记的MDSC在单个核细胞中的表达,肿瘤增殖转移标志物甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)以及基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase MMP-2)。结果:肝郁脾虚证MDSC(24.21%)明显高于气滞血瘀证(5.54%),差异具有统计学意义(χ~2=15.388,P<0.05)。湿瘀互结证MDSC(41.34%)表达高于肝肾阴虚证(9.21%),差异具有统计学意义(χ~2=19.360,P<0.05)。肝郁脾虚证MMP-2表达高于气滞血瘀证,差异有统计学意义(t=20.313,P<0.05)。湿瘀互结证MMP-2表达高于肝肾阴虚证,差异有统计学意义(t=24.769,P<0.01);肝郁脾虚证AFP(76.57±5.01)高于气滞血瘀证(121.70±6.22),差异有统计学意义(t=19.023,P<0.05)。肝肾阴虚证AFP(301.67±2.84)高于湿瘀互结证(182.55±3.02),差异有统计学意义(t=20.002,P<0.05)。结论:MDSC通过调节AFP、MMP-2参与肿瘤增殖、侵袭、转移,与中医辨证分型密切相关。     

三羟基异黄酮对肝癌细胞SMMC7721生物学行为的影响

目的 探讨三羟基异黄酮(Genistein,Gen)对肝癌细胞SMMC7721增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响.方法 应用MTT法、Transwell、RT-PCR及Western印迹法检测三羟基异黄酮作用后,SMMC7721细胞增殖、黏附、迁移、侵袭能力及其Snail mRNA和蛋白表达的变化.结果 Genistein可显著抑制SMMC7721细胞的增殖,同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异(P＜0.01),相同浓度下作用48 h和72 h组细胞的生长抑制率明显高于24 h组(P＜0.01).低毒剂量(10μmol/L)三羟基异黄酮作用SMMC7721细胞30、60、90和120 min时,细胞的黏附能力明显降低(P＜0.01),各时间点细胞的黏附抑制率分别为29.22％、27.35％、26.58％和24.19％.10μmol/L三羟基异黄酮作用SMMC7721细胞24 h后,迁移和侵袭的细胞数明显减少(P＜0.01),细胞的迁移和侵袭抑制率分别为54.79％和55.42％.10μmol/L三羟基异黄酮作用SMMC7721细胞3、5和7d后,细胞Snail mRNA和蛋白的表达水平逐渐下降(P＜0.05).结论 三羟基异黄酮能抑制肝癌细胞SMMC7721的增殖,低毒剂量的三羟基异黄酮具有抑制肝癌细胞SMMC7721黏附、迁移和侵袭的能力,其抗侵袭和转移的作用可能与下调细胞Snail的表达有关.     

Kiss-1高表达抑制结肠癌侵袭与转移能力的影响

目的探讨Kiss-1高表达对结肠癌SW480细胞侵袭与转移能力的影响,初步明确Kiss-1基因对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和MMP-2表达的影响。方法用脂质体转染方法将质粒p EGFP-N1-Kiss-1及p EGFP-N1空载体质粒瞬时导入结肠癌SW480细胞,细胞随机分三组:空白对照组、阴性对照组、实验组。应用Transwell实验检测结肠癌细胞的侵袭能力、Western-blot和Real-time PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Kiss-1表达对MMP-9、MMP-2表达的影响。结果成功将p EGFP-N1-Kiss-1重组质粒瞬时导入结肠癌SW480细胞。Transwell实验检测出实验组较阴性对照组和空白对照组能明显降低SW480细胞侵袭能力的作用(P<0.05)。Western blot和Real-time PCR检测出实验组Kiss-1蛋白和mRNA表达水平较阴性对照组或空白对照组显著增加,而实验组MMP-9、MMP-2蛋白和mRNA表达水平显著降低,其差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Kiss-1抑制MMP-9和MMP-2的表达,其调控机制可能与抑制结肠癌的侵袭和转移能力有关。     

RIP1在肝癌组织中的表达意义及其对细胞侵袭、迁移的影响

探讨受体相互作用蛋白激酶-1(RIP1)在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况,并探索其对肝癌细胞侵袭和迁移的分子调控机制。收集肝癌和癌旁组织,免疫组化检测RIP1蛋白的表达,筛选高表达RIP1的肝癌细胞系。对肝癌细胞系进行RIP1沉默处理并设置阴性对照。采用western blot及RT-PCR法检测RIP1的表达量;Tranwell观察细胞侵袭能力;细胞划痕观察细胞迁移能力。结果显示,48例肝癌组织中,22例存在RIP1蛋白阳性表达,阳性率为45.83%,其中,强阳性患者为15例,中等及弱阳性7例,该研究中有6例复发患者。RIP1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),高表达RIP1患者的总生存率和无复发生存率显著低于低表达RIP1的患者(均P<0.05)。抑制RIP1基因后其相对表达量、细胞侵袭、迁移能力均下降(P<0.05)。RIP1在肝癌中存在高表达,可能参与肝癌细胞侵袭与迁移过程。     

敲低ACTL8基因对子宫内膜癌细胞增殖与迁移的影响

目的探讨采用携带shRNA特异序列的载体转染子宫内膜癌细胞敲低肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)基因对细胞增殖、侵袭迁移能力的影响及其机制。方法选取人子宫内膜癌Ishikawa细胞株进行实验研究,以携带shRNA特异序列的载体及空载质粒分别转染Ishikawa细胞株,形成敲低ACTL8基因的shACTL8组和以空载质粒转染的对照组。荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组细胞中ACTL8 mRNA表达,Western blot法检测两组细胞ACTL8蛋白表达,Transwell迁移和侵袭实验分析Ishikawa细胞侵袭和迁移能力,CCK8细胞增殖实验及平板克隆实验检测细胞的增殖情况,Western blot法检测两组细胞的E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、P21蛋白的表达情况。结果 shACTL8组的ACTL8 mRNA、ACTL8蛋白相对表达强度均低于对照组(P<0.05);shACTL8组的Ishikawa细胞侵袭、迁移水平均低于对照组(P<0.05);在细胞培养后1天、2天、3天,shACTL8组的Ishikawa细胞数目测定OD值显著低于对照组(P<0.05);平板克隆实验培养3天,可见shACTL8组培养皿中细胞生长数目明显少于对照组(P<0.05);shACTL8组E-cadherin蛋白、P21蛋白表达强度高于对照组(P<0.05);shACTL8组N-cadherin蛋白、MMP-9蛋白表达强度低于对照组(P<0.05)。结论敲低ACTL8基因抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭。     

雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的影响及机制研究

目的:探讨雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的抑制作用及相关机制。方法:应用Transwell技术观察不同浓度(2.5μmol·L-1、5.0μmol·L-1、10.0μmol·L-1)雷公藤红素对MHCC97H细胞侵袭力和迁移力的影响。Westernblot法检测雷公藤红素处理后对C-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及NF-κB/p65核浆分布变化的影响。结果:雷公藤红素处理后24 h,迁移实验及侵袭实验结果显示,加药组透膜细胞数较对照组明显减少(P<0.05)。Westerblot结果显示磷酸化JNK表达上调,NF-κB/p65入核减少。结论:雷公藤红素体外具有抑制人肝癌细胞侵袭和转移的作用,其机制可能与活化JNK通路、抑制NF-κBp65入核有关。     

As_2O_3联合丹参酮ⅡA对SW620细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨As_2O_3(arsenic trioxide,As_2O_3)联合运用丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对结肠癌SW620细胞迁移和侵袭的影响,并探讨联合用药与单独用药的差异。方法:应用MTT法检测不同浓度As_2O_3、TanⅡA及两药的联合用药对人结肠癌SW620细胞的增殖抑制作用,确定最佳联合用药浓度;分别用As_2O_3和TanⅡA以及两药联合处理结肠癌SW620细胞,同时以未经药物处理的SW620细胞作为空白对照,5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)处理组为阳性对照组。应用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:MTT试验结果表明,As_2O_3(2.5μg/m L)联合TanⅡA(10μg/m L)为最佳联合用药浓度。经As_2O_3和TanⅡA联合干预后,SW620细胞的迁移和侵袭能力比空白对照及单药组明显降低(P<0.01)。结论:As_2O_3联合TanⅡA作用能够明显抑制人结肠癌SW620细胞的侵袭转移能力。