细胞焦亡在肠缺血再灌注损伤中作用的研究进展

细胞焦亡是一种可导致炎症反应的程序性细胞死亡，其发生依赖于炎症小体、炎性半胱天冬酶（caspase）等蛋白相继激活进而裂解消皮素D（gasdermin D, GSDMD）蛋白使其N端在细胞膜多聚化并产生焦亡小孔。细胞焦亡的发生有炎症小体激活caspase-1的经典途径和胞质LPS激活caspase-4/5/11的非经典途径；作为介导机体炎症反应的重要机制，细胞焦亡在机体应对伤害性刺激的反应中具有不可替代的作用，其与神经系统疾病、心血管系统疾病和肿瘤等多种疾病密切相关。最近研究发现，细胞焦亡在肠缺血再灌注损伤（intestinal ischemia-reperfusion injury, II/RI）的发生中也具有关键作用，本文就近年来细胞焦亡的分子特征、机制与II/RI的关系进行综述，旨在为II/RI的防治提供理论依据。     

熊果酸减轻高糖高脂诱导的人主动脉内皮细胞损伤

目的：探讨熊果酸（ursolic acid, UA）对人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells, HAEC）高糖高脂损伤的影响及机制。方法：MTT法选取合适的高糖和棕榈酸钠（sodium palmitate, SPA）损伤浓度以及UA预孵浓度。采用试剂盒检测NO、ROS的含量，乳酸脱氢酶（LDH）的释放率以及抗氧化酶包括总超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性。Western blot法检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管细胞黏附分子（VCAM-1）、半胱天冬酶-1（caspase-1）以及GSDMD的蛋白表达情况。Hoechst33342联合PI荧光染色检测细胞膜的完整状态以探讨焦亡发生情况。观察UA对HAEC的保护作用。结果：预孵UA（1 μmol/L和5 μmol/L）可以减轻高糖高脂（30 mmol/L GLU+0.1 mmol/L SPA）造成的HAEC损伤，提升HAEC活力，减轻氧化应激损伤，增加NO的释放和eNOS的蛋白表达，减少黏附分子的蛋白表达，减少细胞焦亡。 结论：UA可能通过减轻高糖高脂诱导的HAEC氧化应激反应，抑制细胞焦亡的发生，减轻内皮细胞损伤。     

α-突触核蛋白激活NLRP3炎性小体介导神经细胞焦亡的发生

目的:研究α-突触核蛋白（α-synuclein）对于神经细胞焦亡发生的影响和机制。方法:以小鼠海马神经元细胞HT22细胞株为对象,体外培养后用α-synuclein干预细胞,以CCK-8法检测细胞活力,确定IC50值。设置对照组（Con组）后,采用TUNEL染色法检测细胞焦亡水平,免疫荧光法观察Gasdermin-D-N（GSDMD-N）的表达,Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、细胞凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Gasdermin-D（GSDMD）、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平,酶联免疫吸附法检测培养基中IL-18、IL-1β的表达水平。采用Caspase-1抑制剂预处理HT22后,同样使用IC50值的α-synuclein干预细胞,同时设置α-synuclein组（单纯α-synuclein干预）和α-synuclein+ML132组,检测细胞焦亡的水平。结果:α-synuclein的IC50值为50 nmol/L。α-synuclein干预后细胞焦亡数目显著增高,TUNEL染色显示阳性细胞数目多于Con组,免疫荧光染色结果显示细胞中GSDMD-N的表达水平上调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著高于Con组,而GSDMD水平下调,同时细胞培养基中IL-18、IL-1β的水平上调。Caspase-1抑制剂处理后,50 nmol/L的α-synuclein干预后,细胞焦亡水平显著低于α-synuclein组,同时免疫荧光染色结果显示GSDMD-N的水平下调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著低于α-synuclein组,而GSDMD水平上调,培养基中IL-18和IL-1β的水平下调。结论:α-synuclein可以通过激活NLRP3炎性小体活化继发神经细胞焦亡的发生,在帕金森病的发生发展中具有一定的作用。     

疏肝健脾方调控TLR4/MyD88/NLRP3信号轴抑制肝纤维化小鼠细胞焦亡的机制研究

目的：基于TLR4/MyD88/NLRP3信号轴探究疏肝健脾方对肝纤维化小鼠的治疗作用及机制。方法：采用四氯化碳（CCl4）与橄榄油混合液背部皮下注射的方法，复制化学性肝纤维化小鼠模型。造模首日，灌胃给予疏肝健脾方，每天1次，连续12周；HE、Masson和天狼猩红染色观察小鼠肝组织病理学损伤程度，透射电镜观察肝组织超微结构的变化及焦亡小体情况；RT-qPCR、Western blot和免疫组织化学染色检测肝组织中α-SMA、Collagen Ⅰ、Caspase-1、IL-1β、IL-18以及TLR4/MyD88/NLRP3信号轴表达的变化情况。结果：病理分析显示模型组小鼠肝脏肝小叶结构模糊，肝细胞索排列紊乱，胶原沉积增加，焦亡小体数量明显增加，肝组织中α-SMA、Collagen Ⅰ、Caspase-1、IL-1β、IL-18以及TLR4、MyD88和NLRP3的mRNA和蛋白表达水平相较于正常组肝脏均显著升高。与模型组相比，疏肝健脾方给药后可改善肝脏病理组织学损伤程度，抑制细胞焦亡，显著下调α-SMA、Collagen Ⅰ、Caspase-1、IL-1β、IL-18以及TLR4、MyD88和NLRP3 mRNA与蛋白表达水平。 结论：疏肝健脾方抗肝纤维化作用可能与调控TLR4/MyD88/NLRP3信号轴，减少细胞焦亡，抑制肝星状细胞活化有关。     

米诺环素抑制炎症小体介导的细胞焦亡改善阿尔茨海默病小鼠的认知能力研究

目的: 研究米诺环素(minocycline, Mino)抑制炎症小体介导的细胞焦亡改善阿尔茨海默病认知能力的作用机制。方法: 脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导大鼠神经细胞株PC12构建神经细胞焦亡损伤模型,将细胞分为对照组、LPS组、LPS+Mino组,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹法检测炎症小体关键蛋白NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3, NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC)、Caspase-1及pro-Caspase-1的水平以及焦亡执行蛋白Gasdermin-D(GSDMD)、p30-GSDMD的水平,酶联免疫吸附法检测培养基中白介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平。APP-PS1双转基因小鼠10只,随机分为对照组和实验组,实验组采用50 μg的米诺环素灌胃给药,分别在给药前和给药后3周采用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知记忆能力,处死小鼠后取海马CA3区检测组织中NLRP3、ASC、Caspase-1及pro-Caspase-1的蛋白表达,以及炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α、焦亡执行蛋白GSDMD、p30-GSDMD的水平。结果: 米诺环素可以抑制LPS诱导的细胞凋亡,LPS+Mino组细胞活力显著高于LPS组,而细胞凋亡率显著低于LPS组,差异具有统计学意义(P<0.05)。而LPS+Mino组中炎症小体关键蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达低于LPS组,同时焦亡执行蛋白p30-GSDMD低于LPS组,GSDMD高于LPS组,培养基中IL-1β、IL-18、TNF-α的水平低于LPS组,差异具有统计学意义(P<0.05)。动物实验中,米诺环素可以显著改善小鼠的认知能力;Morris水迷宫实验中,小鼠潜伏期缩短,相比对照组具有统计学意义(P<0.05)。同时小鼠穿越平台次数明显增多,相比对照组具有统计学意义(P<0.05)。实验组小鼠炎症小体关键蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达低于对照组,同时焦亡执行蛋白p30-GSDMD低于对照组,GSDMD高于对照组,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α的水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论: 米诺环素可以通过抑制炎症小体活化,抑制神经细胞焦亡的发生,同时改善阿尔茨海默病小鼠的认知能力。     

细胞焦亡介导慢性间歇缺氧大鼠肾脏损伤及依达拉奉的干预作用

目的：探究依达拉奉对慢性间歇缺氧导致大鼠肾脏损伤的保护作用及其对Caspase-1介导的细胞焦亡信号通路的影响。方法：24只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照（NC）组、间歇缺氧（IH）组、间歇缺氧+生理盐水（IH+NS）组、间歇缺氧+依达拉奉（IH+EDA）组,每组6只。将4组大鼠放置在密闭式饲养舱内造模,NC组舱内氧气浓度维持在21%左右,IH组、IH+NS组、IH+EDA组定时输入纯氧气、纯氮气、压缩空气,使舱内形成缺氧-复氧循环（60 s低氧期+60 s复氧期）,低氧期舱内氧浓度降至6%～7%,每日造模8 h（10∶00-18∶00）,同时IH+EDA组大鼠每天造模前按照5 mg/kg剂量标准予以腹腔注射依达拉奉,IH+NS组大鼠按照同等剂量标准腹腔注射生理盐水。造模8周后采集大鼠血液标本及肾脏组织标本,测定各组大鼠血肌酐（Crea）、尿素（Urea）水平;HE、Masson染色后光镜下观察肾脏病理形态变化、纤维化程度;化学法测定丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力;免疫组织化学染色法测定肾组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;Western blot法测定肾组织Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;RT-PCR法测定消皮素D（gasdermin D, GSDMD）、IL-18 mRNA扩增水平。结果：间歇缺氧暴露后,大鼠血清Crea、Urea明显升高（P<0.01）,肾小管发生病理损害、肾单位球囊间隙出现胶原纤维沉积,MDA含量增加、SOD活力降低（P<0.01）,Caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白表达增加（P<0.01或P<0.05）、GSDMD mRNA、IL-18 mRNA扩增增加（P<0.01）;而经过依达拉奉干预后,上述指标呈现出与间歇低氧暴露后相反的变化趋势,肾脏病理损害减轻（P<0.01或P<0.05）。 结论：慢性间歇缺氧可能通过氧化应激活化Caspase-1参与的细胞焦亡信号通路介导肾脏损伤过程,而依达拉奉可能通过清除氧自由基、下调机体氧化应激水平,抑制焦亡通路的活化,起到保护肾脏的作用。     

内质网应激及其在肺癌中作用的研究进展

内质网（endoplasmic reticulum, ER）是真核细胞分泌蛋白和膜蛋白合成和加工的场所，内质网环境的稳定是保持内质网蛋白质合成顺利进行所必须的。当未折叠蛋白和错误折叠蛋白在内质网内异常聚集时,常常会导致蛋白质合成紊乱并引发内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）。内质网可通过诱发未折叠蛋白反应（unfolded protein response, UPR）来维持内质网稳态和恢复细胞功能。然而，随着ERS的持续加重，持续发生的UPR将引发细胞的程序性死亡。肺癌的发生发展与细胞内的ERS和UPR都有着密切联系。本文将对ERS和UPR及其相关通路进行介绍，并对其主要诱因、抑制剂以及ERS在肺癌中的作用进行总结，为肺癌的基础研究及临床治疗提供新的思路和潜在治疗靶点。     

PDCD4增强鼻咽癌细胞系CNE1对顺铂化疗敏感性机制研究

目的: 探讨抑癌基因程序性细胞死亡因子4（the programmed cell death 4,PDCD4）在促进化疗药物顺铂（CDDP）诱导肿瘤细胞凋亡中的作用及可能的机制。方法: CCK8法检测人鼻咽癌系CNE1细胞转染PDCD4前后对CDDP导致的细胞毒性作用影响;Annexin V/FITC和PI凋亡检测转染PDCD4前后对CDDP诱导凋亡的作用;Western blot实验初步探讨其可能的分子机制。结果: PDCD4增强CDDP对人鼻咽癌系CNE1细胞的杀伤作用;PDCD4增加CDDP诱导人鼻咽癌系CNE1细胞凋亡率;机制研究发现PDCD4显著降低人鼻咽癌系CNE1细胞中Twist及MDR1蛋白的表达量,从而促进化疗敏感性。结论: PDCD4通过抑制Twist蛋白增强化疗药物敏感性,提示其参与了鼻咽癌化疗治疗进程。     

铁死亡调控信号通路以及在相关疾病中的研究进展

铁死亡（ferroptosis）是具有铁依赖性的一种新的程序性细胞死亡方式。铁死亡的主要特征包括脂质活性氧积累、铁离子积累和脂质过氧化。铁死亡的主要机制和信号通路较为复杂,与胱氨酸/谷氨酸逆向转运体、谷胱甘肽过氧化物酶4、铁死亡抑制蛋白1、二氢乳清酸脱氢酶等密切相关。本文就现有铁死亡的调控机制进行整理,并对铁死亡与肿瘤、非酒精性脂肪肝、帕金森综合征和充血性心力衰竭等疾病的研究进展进行论述。     

RNA甲基化酶NSUN2对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的:研究RNA甲基化酶NSUN2对胃癌细胞侵袭以及迁移能力的影响，并探讨其机制。方法:抑制NSUN2基因的慢转染病毒和阴性对照的空载病毒分别转染进胃癌SGC7901细胞和MGC803细胞，建立干扰组和对照组。实时荧光定量PCR法和Western blot法检测两组NSUN2的mRNA和蛋白表达；Transwell和划痕实验研究NSUN2对细胞迁移和侵袭的影响；Western blot法检测两组细胞中上皮细胞-间充质转化(EMT)分子标志物(E-Cadherin、N-Cadherin) 蛋白表达情况。结果:与对照组相比，干扰组细胞RNA甲基化酶NSUN2 mRNA和蛋白表达量下降，穿膜细胞数减少，迁移距离缩短，N-Cadherin蛋白表达量降低，E-Cadherin蛋白表达量升高，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论:抑制NSUN2基因表达可降低胃癌细胞SGC7901和MGC803的侵袭和迁移，其机制是抑制EMT过程。     

铁死亡的机制及其在淋巴瘤中的研究进展

淋巴瘤是常见的血液系统恶性肿瘤，对人类健康造成极大的威胁。目前淋巴瘤的治疗方法包括化疗、分子靶向治疗、造血干细胞移植等，但耐药和复发难治仍是待解决的问题。铁死亡是新发现的一种细胞死亡模式，与铁依赖性的脂质过氧化损伤相关。靶向铁死亡为抑制淋巴瘤进展提供了新思路。本文从铁死亡的起始信号、中间事件、效应阶段、防御机制来阐述铁死亡的机制并回顾了铁死亡在淋巴瘤中的研究进展，为铁死亡在淋巴瘤治疗方法的应用方面提供新的思路。     

钠钙交换体与肾缺血再灌注损伤

钠钙交换体（sodium calcium exchanger,NCX）是一种广泛分布于膜性结构（细胞质膜、线粒体膜和分泌小泡膜等）上的阳离子转运蛋白,具有前向模式和反向模式。通过这种双向模式,可以对胞质内的Ca2+浓度进行快速精准的调节,继而影响细胞的一系列生理活动。而肾缺血再灌注时,NCX反向模式的异常激活可介导细胞Ca2+超载,进而触发一系列有害代谢反应导致细胞损伤和死亡。目前,选择性抑制NCX反向模式的苯氧基衍生物得到了较多研究,并成为治疗肾缺血再灌注损伤的新药物靶点。     

肺鳞癌成纤维细胞生长因子受体分子改变及其治疗对策

肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。针对肺癌尤其是非鳞非小细胞肺癌的分子靶向治疗发展迅速,取得了较好的治疗效果。研究发现,成纤维细胞生长因子受体（fibroblast growth factor receptor, FGFR）信号通路通过不同的机制促进肿瘤血管生成和支持癌细胞增殖,在多种肿瘤的发生发展中起作用。这提示阻断FGFR信号通路,有可能抑制肿瘤的增殖。研究观察到FGFR途径失调发生于多个恶性肿瘤,其中包括肺鳞癌（lung squamous cell carcinoma, LUSC）。这使得FGFR有希望成为LUSC潜在的药物治疗靶点。本文就该通路在LUSC中的基因改变、作用及其抑制剂作一综述。     

组蛋白甲基化及乙酰化修饰酶在卵巢癌中的机制研究及治疗进展

卵巢癌是恶性程度最高的妇科恶性肿瘤。近年来,组蛋白修饰（histone modifying enzymes, HMEs）作为表观遗传修饰的重要部分在卵巢癌中被广泛研究,包括组蛋白甲基转移酶及去甲基酶、组蛋白乙酰转移酶及去乙酰化酶在内的多种组蛋白修饰酶通过对组蛋白及非组蛋白进行修饰,在卵巢癌细胞的增殖、迁移等方面发挥了重要作用,并且能够调控化疗耐药的发生。多种组蛋白修饰酶的抑制剂通过促进细胞生长停滞及凋亡、抑制肿瘤细胞的侵袭、增加化疗敏感性等在卵巢癌中发挥良好的抗肿瘤作用,有望成为卵巢癌精准治疗的新策略。本文将针对参与甲基化及乙酰化过程的组蛋白修饰酶在卵巢癌中的作用机制及治疗潜力作一综述。