体外抗坏血酸诱导中脑源神经干细胞向多巴胺能神经元的分化

为探索抗坏血酸(ascorbic acid,AA)对小鼠胚中脑区来源的神经干细胞向多巴胺能神经元诱导分化的影响,本研究于体外培养小鼠胚中脑区来源的神经干细胞,传代纯化并分为四组,在有血清条件下分别给予10 μM、100 μM、200 μM AA诱导分化,并设空白组对照,DAPI细胞核标记,抗酪氨酸羟化酶免疫荧光细胞化学技术鉴定分化结果,荧光显微镜下计数阳性细胞比例.结果显示:在本诱导分化实验中,AA作用下中脑神经干细胞分化出多巴胺能神经元比例最高约为9%,明显高于空白对照组(约1%,P＜0.01).     

哺乳动物不同种群蛋白磷酸酶基因家族的序列比较

蛋白磷酸酶(PPP)家族在体内参与调节多种重要的生理功能,包括细胞周期、细胞生长及分化等过程。通过对在信号转导中起着重要作用的PPP基因进行序列比对,研究人、猪、大鼠、小鼠以及大猩猩的PPP基因家族的进化。结果表明:除了ppp1r3a基因序列分化较晚,基因保守性略高外,其它蛋白磷酸酶基因家族序列分化较早,分支较大,但在分化后保守性高。     

关于P16在大肠癌组织中表达的实验研究

目的检测p16蛋白在大肠癌中的缺失情况及与病理分型和临床分期的关系,探索p16基因转染对大肠癌细胞各期的作用。方法应用免疫组织化学法检测p16蛋白在96例大肠癌患者中的表达。结果与结论(1)p16蛋白的缺失在大肠癌的发生发展中起重要作用,P0.05。(2) p16蛋白表达与大肠癌分化程度和临床分期有关,随着病理分型及临床分期的变化,p16蛋白在组织中的表达也随之改变。     

NOTCH1靶基因的筛选

NOTCH1信号通路是影响机体发育的重要通路,而研究NOTCH1的靶基因及其功能对阐明该通路的分子机制非常有意义。NOTCH1蛋白的入核片段ICN1,通过招募共转录因子CSL和MAML1形成转录复合物,启动靶基因的表达。通过生物信息学分析预测了21个潜在的NOTCH1靶基因。半定量PCR、定量PCR和蛋白表达分析的结果表明SEPT4是NOTCH1的一个新的靶基因。     

无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性的影响

在无血清条件下培养KES小鼠胚胎干细胞,研究LIF在无血清条件下对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性维持的影响。联合使用小分子物质SU5402、PD184352和CHIR99021或单独使用LIF培养小鼠胚胎干细胞,检测无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞自我更新能力和全能性的影响。结合使用极限稀释法培养KES细胞单克隆,统计不同培养体系下单克隆的形成率。结果显示:无血清条件下,单独使用LIF,不能维持小鼠胚胎干细胞的自我更新能力和全能性;使用含有3种小分子药物SU5402,PD184352和CHIR99021(3i)的无血清培养液可以维持小鼠胚胎干细胞的自我更新,传代60代以上仍可保持全能性;添加LIF的3i培养系统显著提高了小鼠胚胎干细胞的单克隆形成率。表明在无血清条件下,LIF不能单独维持小鼠胚胎干细胞的多能性。3i培养体系可以维持胚胎干细胞的全能性而不需要LIF;3i条件下,LIF可以显著促进胚胎干细胞体外增殖和单克隆形成。     

腺相关病毒标记神经细胞的三光子显微成像

1 700 nm波段三光子荧光成像已成为研究神经细胞的重要手段,但该技术仅能在转基因小鼠中对荧光蛋白标记的神经细胞成像,无法对普通小鼠的脑部神经细胞成像.结合1 700 nm波段三光子显微成像技术和脑部注射神经细胞标记技术,对普通小鼠急性脑切片中的神经细胞进行三光子荧光成像.结果表明,脑部注射腺相关病毒(AAV9-hSyn-NES-jRGECO1a-WPRE)能够标记普通小鼠灰质和海马体中的神经细胞.三光子荧光成像再现了普通小鼠脑片中灰质和海马体神经细胞形态.同时采集的三次谐波图像实现了普通小鼠脑片内白质等结构的无标记成像,且神经细胞位置处的三光子荧光和三次谐波图像呈互补关系.1 700 nm波段的三光子显微成像技术,结合脑部注射腺相关病毒神经细胞标记技术,可为神经脑科学研究提供一种新颖的成像手段.     

小鼠睾丸发育过程中Caspase-3蛋白的表达规律

为探讨Caspase-3蛋白在小鼠睾丸生后发育全过程中的表达规律,以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,在其石蜡组织切片上进行Caspase-3蛋白的免疫组化检测;同时部分时段实施Caspase-3基因的DNA-mRNA原位杂交检测.结果发现Caspase-3蛋白在生后1 d直至57 d的小鼠睾丸组织中均有表达,在细胞核中的表达主要涉及精原细胞,而在细胞质中的表达则涉及初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞等多种细胞类型.上述结果表明小鼠睾丸生后发育过程中各级生精细胞内均有Caspase-3蛋白存在,但并不意味着这些细胞均会发生凋亡,Caspase-3蛋白的活性表达可能仅主要涉及精原细胞.     

大豆PM2蛋白及其结构域可提高烟草耐盐性

深圳市微生物基因工程重点实验室已利用大肠杆菌异源表达体系证明了大豆PM2蛋白（LEA3）的耐盐功能，并首次证实PM2蛋白序列中的22-氨基酸结构域（PM2B）为一主要耐盐结构域．为在高等植物中进一步验证PM2蛋白及22-氨基酸结构域的耐盐功能，将大豆PM2及PM2B基因克隆至植物表达载体pB1121，并利用农杆菌侵染法转化烟草叶盘，通过PCR扩增法鉴定转基因植株．结果表明PM2及PM2B基因已整合至转基因烟草的基因组DNA中，转化率分别为44．4％和62．5％．与含1．5％（质量分数）NaCl的培养基比较，转基因烟草植株的生长状况和叶片的叶绿素含量，结果表明转PM2和PM2B基因的烟草耐盐性明显高于对照（转化pB1121载体）植株．这说明转PM2和PM2B基因可提高烟草的耐盐能力．可见，PM2蛋白及22-氨基酸结构域在原核和真核细胞中的耐盐保护作用可能是相似的．     

双珍多糖肽的制备及其保健功能

香菇,金针菇经纤维素酶水解,获得以多糖为主的营养抽提物,牛肉经胰蛋白酶和中性蛋白酶水解,获得水解动物蛋白,再配以甘草和大枣抽提物,经真空浓缩,干燥,制备成营养保健食品双珍多糖肽。本产品能促进小鼠脾淋巴细胞转化,提高自然杀伤细胞活性,增加直接空斑形成细胞数目,但对小鼠吞噬功能无影响。因此,在本实验条件下,双珍多糖肽能增强小鼠细胞免疫和体液免疫水平,具有一定的动物免疫调节作用。水解动物蛋白分子量分布在     

ATP对大鼠成肌细胞抗H_2O_2凋亡模型分析

为了探讨解决L6大鼠成肌细胞被H2O2损伤的问题,分别用1.210 48、2.420 96、4.841 92 g/L ATP溶液对成肌细胞处理后,利用MTT法、流式细胞仪和荧光凋亡抗体检测了细胞损伤程度.结果表明,经H2O2损伤后L6成肌细胞存活率明显降低,凋亡率增加.各种剂量ATP溶液均能提高L6成肌细胞的存活率,促使抗凋亡因子bcl-2表达增加,促凋亡因子bax表达降低,减少凋亡的发生.其保护程度随ATP溶液剂量的减少而增强,在1.210 48 g/L剂量时效果最为显著.ATP溶液对H2O2诱导损伤的L6大鼠成肌细胞具有明显保护作用,其机制是通过mTOR/STAT3信号通路增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,从而与抑制细胞凋亡有关.     

基因转化过程中抗生素对西瓜外植体分化的影响

研究了抑菌性抗生素氨苄青霉素、羧苄青霉素、头孢霉素对西瓜外植体分化的影响,同时对西瓜转基因过程中的选择剂卡那霉素、潮霉素进行筛选.结果表明:氨苄青霉素、羧苄青霉素、头孢霉素3种抗生素浓度在600 mg/L以下对西瓜子叶芽分化没有明显的影响,600 mg/L以上对西瓜子叶芽分化产生明显的抑制作用,3种抗生素中,西瓜子叶对头孢霉素的耐受性更好一些,浓度为250 mg/L的头孢霉素已有良好的抑菌效果;确定潮霉素更适合做为西瓜转基因的选择剂,低浓度潮霉素已严重抑制根和芽发生,20 mg/L的潮霉素为不定芽分化适宜的筛选浓度,6 mg/L的潮霉素即可抑制根的分化.     

微RNA hsa-miR-125a-5p通过激活p53诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡的研究

为了探讨微RNA hsa-miR-125a-5p对肺癌细胞凋亡的影响及其可能的调控机制,通过实时定量RT-PCR (qRT-PCR法)检测hsa-miR-125a-5p在不同细胞系表达的相对含量,流式细胞术检测肺癌细胞的凋亡情况,Western blot和RT-PCR检测p53蛋白和mRNA表达情况,进一步的功能性实验选择SPC-A-1细胞进行。结果显示,与人支气管上皮HBE细胞相比较,hsa-miR-125a-5p在不同的肺癌细胞系中表达下降。在功能获得性实验中,hsa-miR-125a-5p促进凋亡,hsa-miR-125a-5p过表达能够增加野生型p53 mRNA和蛋白表达;阻断野生型p53能够减弱hsa-miR-125a-5p在凋亡中的作用。在功能丧失性实验中,阻断hsa-miR-125a-5p能够降低野生型p53的mRNA和蛋白表达,阻断野生型p53同样能够减弱hsa-miR-125a-5p抑制剂在凋亡中的作用。最后,在p53缺陷细胞系H1299中转染正义或反义miR-125a-5p混合物,结果显示凋亡率均没有明显变化。上述研究表明,微RNA hsa-miR-125a-5p在肺癌细胞SPC-A-1中通过激活p53诱导凋亡。这些结果将为miR-125a家族在肺癌中的作用提供新的视点。     

打印室PM2.5导致的体内外损伤与机制探究

为研究打印室PM2.5造成的体内外损伤及其机制,建立了细胞和小鼠模型来评估打印室PM2.5对细胞和肺损伤的影响及其可能的机制。结果表明:打印室PM2.5明显上调了细胞和小鼠体内磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)蛋白表达量,而磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的激活,促进基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达量上调,MMP-2表达量上调加剧了细胞以及小鼠肺部纤维化的形成,同时,血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达量被下调,导致了血管生成的抑制作用(P<0.05)。打印室PM2.5还下调了小鼠体内B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量,同时,上调了Bcl-2同源水溶性蛋白(BAX)的表达量。当这2个蛋白表达比例变化时,可以激活凋亡启动子Caspase-8和执行子Caspase-3,所以Caspase-8和Caspase-3蛋白的表达量在打印室PM2.5处理组中上调(P<0.05),预示了凋亡的开始。综上所述,打印室PM2.5的暴露明显加剧了细胞和小鼠体内纤维化、小鼠体内凋亡的发生,对长时间待在打印室的人员构成潜在威胁。     

Bax蛋白在小鼠睾丸发育过程中的表达

以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,在其石蜡组织切片上采用免疫组化技术探讨Bax蛋白在小鼠睾丸生后发育全过程中的表达规律.结果发现：Bax蛋白在生后1d直至57d的小鼠睾丸组织中均有广泛性的表达,其表达涉及睾丸曲细精管中各类型生精细胞.上述结果表明：小鼠睾丸生后发育过程中各级生精细胞内均有Bax蛋白的存在,但生精细胞中Bax蛋白的表达可能并不意味着这些细胞最终走向凋亡.     

Ras-GRF1基因敲除小鼠的行为学研究

Ras基因广泛存在于自然界中,其控制的Ras-GRF1蛋白在细胞信号传导,在细胞分化与生长过程中起着极其重要的作用。已有研究表明,Ras基因与信号通路和学习记忆功能密切相关。本实验利用行为学研究敲除Ras-GRF1基因的小鼠在学习记忆上与野生老鼠的差异,通过Morris水迷宫等实验发现Ras-GRF1基因敲除小鼠的学习记忆能力弱于野生型小鼠。     

以干细胞特异性转录因子诱导小鼠肝癌细胞Hepa1—6重新编程的研究

利用逆转录病毒携带小鼠Oct4、Klf4、SOx2和c-Myc基因介导Hepa1-6小鼠肝癌细胞系重新编程,得到一团自律性跳动的细胞团,及一群形态学上明显类似于小鼠胚胎干细胞的克隆样细胞团。经长期传代,克隆样细胞能保持其形态。检测证实,这些克隆样细胞团表达Oct4、Sox2蛋白。证实,Hepa1-6小鼠肝癌细胞可以被携带Oct4、KK4、SOX2和cMyc基因的逆转录病毒感染的方法诱导重新编程。     

以干细胞特异性转录因子诱导小鼠肝癌细胞Hepa1-6重新编程的研究

利用逆转录病毒携带小鼠Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因介导Hepa1-6小鼠肝癌细胞系重新编程,得到一团自律性跳动的细胞团,及一群形态学上明显类似于小鼠胚胎干细胞的克隆样细胞团。经长期传代,克隆样细胞能保持其形态。检测证实,这些克隆样细胞团表达Oct4、Sox2蛋白。证实,Hepa1-6小鼠肝癌细胞可以被携带Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因的逆转录病毒感染的方法诱导重新编程。     

生物还原响应的葡聚糖修饰的线性聚乙烯亚胺基因释放载体的研究

通过二硫吡啶端基化的线性聚乙烯亚胺(LPEI-SSPy,M_n=5 000)与巯基化葡聚糖(Dex-SH,Mw=5 000)的偶联反应,制备出生物还原响应的葡聚糖基线性聚乙烯亚胺(Dex-SS-LPEI),并将其用于基因释放载体的研究。核磁共振氢谱分析表明Dex-SSLPEI的氢谱与其化学结构一致。动态光散射及琼脂糖凝胶电泳分析证明Dex-SS-LPEI能够复合基因形成纳米尺寸的、表面带正电荷的复合物。毒性实验表明该聚合物对细胞的毒性较小。在n(N)/n(P)为最佳值(10/1)时,Dex-SS-LPEI与绿色荧光蛋白报告基因的复合物可以有效转染MCF-7和HepG2细胞,其效率优于22kDa的线性聚乙烯亚胺(LPEI,M_w=22kDa)阳性对照。荷瘤小鼠体内转染实验表明Dex-SS-LPEI可以通过静脉给药输送荧光素酶基因,导致体内各器官及肿瘤的转基因表达。在肿瘤内该转基因表达较其它脏器更高,并高于22kDa的LPEI在肿瘤内的基因表达。     

甜菜雄性不育系及保持系花期蛋白差异分析

为揭示甜菜雄性不育的原因,从蛋白质组学角度对甜菜细胞质雄性不育进行研究,利用双向电泳与MALDI-TOF-MS方法,对Owen型甜菜质核互作型雄性不育系DY5-CMS及同型保持系DY5-O花粉发育3个阶段(雄蕊原基分化期、四分体时期和单核时期)的花蕾蛋白差异表达进行研究．结果表明： 在雄蕊原基分化期花蕾中鉴定出6个差异蛋白,在四分体时期鉴定出4个差异蛋白,这些蛋白多数与呼吸和能量代谢有关,推测甜菜细胞质雄性不育可能是花粉发育早期(雄蕊原基分化期和四分体时期)与能量和呼吸代谢有关的蛋白表达上调导致呼吸和能量代谢紊乱造成的;在花粉发育的单核时期鉴定出6个差异蛋白,这些蛋白主要与植物的光合作用有关,推测到花粉发育后期雄性不育性状已形成,雄性不育导致植物光合机能下降．     

角蒿咖啡酸酯对小鼠耳肿胀的抑制作用

研究了角蒿咖啡酸酯((+)-2-(1-hydroxyl-4-oxocyclohexyl)ethyl caffeate,JH2)对花生四烯酸(arachidonic acid,AA)致小鼠耳肿胀的抑制作用,探讨其作用机制,采用花生四烯酸诱导的小鼠急性耳肿胀模型评价JH2的体内药效,通过酶联免疫吸附测定实验检测JH2对AA通路中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)活性的影响.实验结果显示,在AA诱导的小鼠耳肿胀模型中,JH2能显著抑制AA所致的小鼠耳肿胀程度和组织蛋白渗出量,并降低小鼠发炎耳组织中白三烯B4(leukotrienes B4,LTB4)的生成量.体外活性研究显示,JH2对5-LOX有较强的抑制活性,半抑制浓度IC50值为12.16μmol/L.说明JH2对AA诱导的小鼠耳肿胀急性炎症具有抑制作用,其作用机制可能与JH2抑制AA通路中5-LOX的活性从而降低炎症介质LTB4的产生有关.