辣根过氧化物酶固定化方法的探索及分析应用

1前言固定化酶是20世纪60年代开始发展起来的一项新技术，是酶工程的主要内容，它的发展很快。近年来人们已开始转向固定化酶在工业、医学、化学分析、环境保护、能源开发等方面的应用研究。目前，国际上采用的酶的固定化方法包括：吸附法、健合法、包埋法和交税法等。吸附法制备的固定化酶会导致酶的较大程度的失活。为了克服酶的流失、渗漏，提高酶的活性收率，本实验设计出了两种新的固定化方法：氧化铝吸附一海藻酸钠包埋法及氧化铝吸附-戊二醇交联一海藻酸钠包埋法，以辣报过氧化物酶（HRP）制备固定化酶，并应用于混样中L－Tyr和雨…     

溶胶-凝胶包埋固定化酶的研究

介绍了溶胶-凝胶(sol-gel)包埋法制备固定化酶的基本过程和影响因素,着重论述了S iO2、有机改性硅胶和有机/无机杂化硅胶三类溶胶-凝胶基质材料制备固定化酶的特性和在催化反应中的应用,对溶胶-凝胶包埋法制备高性能固定化酶的发展前景予以展望。     

假丝酵母产脂肪酶在壳聚糖和硅胶上的固定化研究

本实验分别壳聚糖和氨基化后的硅胶作为固定化载体,用戊二醛作为交联剂,将脂舫酶共价固定化于载体上,壳聚糖的最佳固定化条件是戊二醛浓度2．5％,给酶量为4125U／g,氨基化硅胶的最佳固定化条件为戊二醛浓度2％,最佳给酶量在3456U／g,固定化酶活为2952U／g,最佳酶活表现率为85％。两种方法所得的固定化酶的耐温性和储藏稳定性都有了显著提高。氨基化硅胶固定化酶在50℃下保温3小时后仍保留有14％的酶活。结果显示假丝酵母产脂肪酶固定于弱亲水性载体上要比固定于强亲水性载体上效果更好。     

氨基功能载体固定化酶研究进展

综述了甲壳素、壳聚糖天然氨基功能载体和氨基化硅胶化学合成载体的制备方法,并介绍了利用戊二醛直接固定、载体活化和酶活化固定化酶的方法,最后对氨基功能载体固定化酶的发展趋势加以评述:在利用氨基功能载体固定化酶过程中,有必要有针对性地合成一些新的氨基功能载体,使其反应条件更温和、酶的固载量更大、酶活力回收率更高、稳定性更强。或者针对特定的载体和酶,通过结合配体、添加稳定剂、固定前修饰、固定后修饰和后固定化技术处理等方法,进一步改善固定化酶的性能。     

溶胶-凝胶法固定脂肪酶的方法研究

采用溶胶-凝胶技术,以正硅酸乙酯为前驱物,制备了S iO2微粒,以3-氨基丙基三乙氧基硅烷作偶联剂对S iO2微粒进行表面改性,制备了一种功能化载体3-氨基丙基硅胶。以甲醛为偶联剂,将脂肪酶固定于3-氨基丙基硅胶上。用红外光谱对产物结构进行表征,同时研究了固定化酶的性质。结果表明,氨基化硅胶交联固定化脂肪酶具有可行性,固定化酶的最适反应温度在30℃附近,且在碱性范围内其稳定性比自然酶高;当pH=7.5,其它条件相同时,自然酶的活力大于固定化酶的活力。     

无溶剂体系中酶催化小桐籽油制备生物柴油

;考察了无溶剂体系中固定化脂肪酶Novozym 435催化小桐籽油制备生物柴油的工艺条件.结果表明,加入硅胶有利于提高反应速率和转化率,且当硅胶存在时,甲醇可一次性加入,简化了实验的操作步骤.当无外加水分存在时,甲醇与小桐籽油的物质的量之比为3,固定化酶用量为小桐籽油质量的7%,硅胶加入量与小桐籽油质量比0.4,在40...     

生物酶固定化方法的研究新进展

酶作为一种生物催化剂,在体外同样可以高效率的催化大多数化学反应的进行。通过不同方法对酶进行固定化可以提高其催化稳定性,降低使用成本,便于大规模生产应用。本文系统的综述和分析了各种固定化方法的优缺点及其在固定化酶方面的研究进展,并对这些方法的应用前景进行了展望。     

利用酰胺活化聚乙烯醇作为载体固定漆酶的研究

交联聚乙烯醇经羧基化、酰胺化制成一种活性固定化酶的载体,并在温和的条件下对漆酶进行了固定。比较不同的固定化时间,pH值,温度和离子强度对固定化效果的影响,发现在12 h,40℃,pH值为3.2所制得的固定化酶的活力最高;在0.05~1.0 mol/L的范围内,随着作为固定化反应介质的缓冲溶液浓度的增加,所制得的固定化酶的活力有所下降。还发现固定化酶较游离酶的酶催化反应最适pH值有所升高。     

聚鸟嘌呤核苷酸的制备

多核苷酸磷酸化酶(pNp_■)在Mg~(2 )存在的条件下,可加速各种核糖核苷二磷酸(NDP)的聚合反应,生成聚核苷酸并释放出无机磷酸。其连接方式与天然核糖核酸相同,一种核苷二磷酸的3’-OH基团与另一种核苷二磷酸的5’-磷酸基团缩合成二酯键,形成聚核苷酸。其反应式是:     

用氨基化硅胶和甲醛固定脂肪酶的研究

以甲醛为偶联剂,将脂肪酶固定在3-氨基丙基硅胶上。以差热分析法测试了自然酶和固定化酶的热稳定性,并研究了反应介质的温度和pH值对自然酶和固定化酶活性的影响。自然酶和固定化酶的最适pH值都在7.5附近,但固定化酶的最适温度较自然酶低。另外,还测试了固定化酶在37℃的磷酸盐缓冲溶液中贮存的稳定性,与自然酶相比其贮存的稳定性有显著的提高,同时发现固定化酶在37℃的磷酸盐缓冲溶液中有一个恢复活力的过程。     

聚尿嘧啶核苷酸与聚胞嘧啶核苷酸的制备

Poly U与Poly C是两种核糖核苷酸的均聚物。在核酸结构与功能的研究上是不可缺少的生化试剂,特别是近年来在对抗癌药物的制备中应用更为广泛。本文的合成方法基本上是参照C. Basilio and S. Ochoa以及黎高沃等的报导,并根据具体条件做了一些改进,得到了满意的结果。一、材料 1.用大肠杆菌提纯的多核苷酸磷酸化酶粗酶液,生物物理所生化厂制备。 2.5'-尿嘧啶核苷二磷酸钠盐,含量95%,上海生化所制备。     

酶定向固定化方法及应用的研究进展

传统固定化方法常会导致酶活性大幅度下降,回收率较低,而酶定向固定由于固定化后可完全暴露其活性部位,因而可以保持较高的酶活回收率。本文主要综述了定向固定化酶的两种方法,分别为共价定向固定和非共价定向固定。其中非共价定向固定化主要是抗体与抗原、亲和素/链霉亲和素和生物素以及组氨酸标签与Co2+/Ni2+之间的亲和作用;共价定向固定化主要是通过半胱氨酸残基上的巯基与载体作用。简述了其在生物传感器、分子识别、酶生物燃料电池及酶纯化方面的应用。最后指出今后的主要研究方向为探索新的定向固定化标签以降低对酶活性部位的影响,应用新的载体以提高固定化酶酶活回收率,优化固定化过程及简化固定化步骤等。     

以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶的研究

介绍了以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶需首先制备壳聚糖颗粒 ,使用戊二醛、甲醛、乙二醛 3种活化剂处理所得的壳聚糖颗粒 ,确定了以戊二醛为活化剂交联其上的氨基共价结合青霉素酰化酶的固定化方法。从戊二醛的浓度、pH值、固定化时间、固定化pH值、酶用量等条件摸索了最佳固定化条件 ,获得了酶活力为4 0 0 0 0U/ (g·h)、回收率为 5 0 %左右的固定化青霉素酰化酶。     

固定化漆酶的最佳条件及其稳定性研究进展

介绍了固定化漆酶的最佳条件及其稳定性的研究现状。从吸附法、包埋法、结合法和交联法等四种固定化方法阐述了固定化最佳条件的选择及其原因,并分析了固定化漆酶的操作稳定性、热稳定性和储存稳定性。另外对新型固定化技术和固定化漆酶的稳定性研究前景做了分析和展望。     

海因酶法耦合原位分离技术制备N-氨甲酰-D-苯丙氨酸

利用自行筛选的海因酶高产菌株Burkholderia cepecia njut01发酵后，经过硫酸铵分级沉淀、phenyl sepharose FF、DEAE sepharose FF等纯化步骤，得到初步纯化的D-海因酶；利用碳二亚胺法建立了一种基于EAH sepharose 4B的D-海因酶共价固定化方法，酶活回收率达到79.44%，固定化酶经100d 25个批次转化后仍可保持63.2％的初始酶活。将固定化酶填充为固定床反应器，考察了不同条件下固定床与固定床耦合离子交换原位分离（in situ product removal，ISPR）两种反应体系在转化过程中pH值变化及转化率的差异。结果表明，耦合离子交换原位分离技术可大幅度提高D，L-苄基海因转化率，经24h转化，N-氨甲酰-D-苯丙氨酸转化收率最高达62.725%，较采用单一固定床酶转化体系的转化率提高了89.3%。     

固定化酶技术及其载体材料研究

固定化酶技术已经成为酶应用领域中的一个重要研究方向，此技术可以有效地提高酶的催化性能和操作稳定性，为酶在大规模生产中提供有利条件。载体作为固定化酶技术的关键组成部分，其材料的选择对于固定化酶技术的性能至关重要。本文对比了目前载体材料的特点并总结了固定化酶筛选方法，以期为后续固定化酶技术的研究提供基础。     

膜材料的亲疏水性对固定化脂肪酶的影响

用吸附法固定脂肪酶时,膜材料的亲疏水性对固定化酶的量、比活力和活力稳定性等有很大影响.今以柱状假丝酵母脂肪酶和猪胰脂肪酶为研究对象,选取了8种亲疏水性不同的膜材料(醋酸纤维素、聚丙烯腈、聚酰胺、聚砜、聚醚砜、聚偏二氟乙烯、聚丙烯和聚四氟乙烯)作为固定化载体,用吸附法制备了固定化脂肪酶膜.研究结果表明,强疏水性聚四氟乙烯和聚丙烯膜对两种酶的吸附量都比较大,且固定化酶的比活力和活力回收率比较高,聚四氟乙烯固定化柱状假丝酵母酶比游离态酶的半衰期提高了6倍以上.强亲水性醋酸纤维素膜对猪胰脂肪酶的吸附量比聚四氟乙烯高,但是固定化酶的比活力、活力回收率比强疏水性膜低,而接触角在40°～50°的聚酰胺膜和聚砜膜的吸附量最小.因此吸附法制备固定化脂肪酶膜,选择聚丙烯膜和聚四氟乙烯膜是合适的,制备的优化条件为吸附温度25℃,酶溶液的pH为7.5,吸附时间10 h.     

微乳凝胶固定化脂肪酶及其催化酯化反应的研究

描述了以ＡＯＴ／异辛烷／水／明胶组成的反相微乳凝胶的制作过程,作出了不同ＡＯＴ浓度下的凝胶相图。以此反相微乳凝胶固定脂肪酶,在有机溶剂中催化脂肪酸 和脂肪醇酯化反应,转化率可达９５％以上,在０℃时有有较快的反应速度,固定化酶重复使用２９次,反应初速度仍有７０％。     

超声波对固定化辣根过氧化物酶活性影响研究

为了研究超声波对固定化酶活性的影响,以固定化辣根过氧化物酶为对象,研究了不同超声波处理条件(超声功率,超声时间)以及超声条件下催化体系的pH、温度对固定化酶活性的作用。同时对超声波处理后固定化酶活的重复利用性进行测定。结果表明,超声波处理对提高固定化酶在高温、强酸碱条件下催化活性有一定帮助,最佳处理条件为:超声波功率50 W,超声时间30 min,pH 8,温度35℃,在此条件下,与未经超声波处理相比,固定化酶活性提高了17.6%,固定化酶重复利用性增强,经7次使用后,固定化酶催化活性是未经处理的1.8倍。     

无机固定化酶载体材料的研究进展

无机固定化酶载体材料具有较高的化学稳定性、机械强度和较低的使用成本,特别适合大规模工业应用。固定化酶作为一种高选择性的生物催化剂,在生物体外同样可以高效率的催化化学反应的进行。本文系统的分析和综述了各种无机载体材料的优缺点、制备方法及其在固定化酶方面的研究进展,并对这些固定化载体材料的应用前景进行了预测。