修饰固定化青霉素酰化酶在非水相中的催化

为提高酶的催化水解活力和稳定性,将青霉素酰化酶组装于介孔泡沫二氧化硅(MCFs)中,并应用于水/有机混合体系催化水解。分别考察了有机介质种类和体积分数、葡聚糖(Dex10k)修饰对固定化酶活力的影响,研究了不同条件下固定化酶的稳定性。实验结果显示:体积分数20%石油醚中,添加Dex10k的介孔泡沫硅固定化酶比活力达209.5U/mg,是缓冲液中MCFs固定化酶活力的196.2%。20%石油醚中,经25次连续操作,固定化酶保持初始活力的71.5%。结果表明:石油醚等烷烃形成的水/有机体系是适合青霉素酰化酶催化的二相体系,且添加Dex10k能提高固定化酶在二相体系中的催化活力及稳定性。     

融合蛋白CR2-GDH固定化及不对称还原制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯

比较介孔分子筛材料SBA-15、MCM-41、海藻酸钙、改性二氧化硅4种载体固定化融合蛋白CR2-GDH其酶固载量和酶活回收率,选择SBA-15为固定化载体。研究固定化条件对固定化融合酶量的影响以及固定化酶的稳定性,固定化酶在双相体系催化不对称还原反应。结果表明,在p H值为5.5、酶浓度为1.4mg/m L、反应1h条件下,固定化酶量为27.7mg/g。加入25mmol/L的Ca2+,固定化酶的酶活回收率由58.6%提高到78.1%。与游离酶相比,固定化酶的热稳定性显著提高,40℃条件下酶活回收率提高19.1%。固定化酶水相中反复使用7批次后,剩余活性仍超过30%,具有较好的操作稳定性。与游离酶相比,固定化酶更耐受烷烃类有机溶剂。在水/有机溶剂双相反应体系中,Ca2+/SBA-15固定化酶和游离酶催化相比,产物得率提高23.8%。     

一种选择性拆分布洛芬对映体的固定化脂肪酶

为了提高扩展青霉TS414脂肪酶(PEL)对布洛芬的拆分效率,建立了适于非水相中选择性拆分(R,S)-布洛芬的固定化方法. 结果表明,固定化介质的类型、冻干pH和外加水量等因素对固定化PEL酶促拆分(R,S)-布洛芬有较大影响. 在冻干pH为9.0、外加水量为0、以大孔吸附树脂AB-8为固定化载体的体系中,40℃反应30 h后,拆分反应的转化率可达47%,对映体过量值eeP可达98.75%. AB-8固定化后,PEL在有机相反应体系中的分散性得到了明显改善,大幅度提高了酶促拆分反应的效率;大孔吸附树脂AB-8固定化PEL具有较高的操作稳定性,连续10批拆分反应的平均转化率在47%以上,eeP值均稳定在98%以上.     

海藻酸钠包埋法共固定α-淀粉酶和糖化酶的研究

以海藻酸钠为载体,用包埋法共固定α-淀粉酶和糖化酶双酶体系,研究了共固定化过程中双酶的比例、pH值、温度对共固定化后体系稳定性的影响,并探讨了此双酶体系在热稳定性、储藏稳定性、连续使用稳定性方面的效果.     

聚氨酯泡沫材料对氰降解菌固定化影响的研究

在聚氨酯泡沫(PUF)固定化细胞降解氰化物研究的基础上,探讨了泡沫组分硅油(L-580)、交联剂(1006-2)以及发泡剂(水)质量分数对材料亲水性、孔壁性质的影响,并对氰化物降解菌固定化细胞量、降氰酶活的影响进行了研究。结果表明,当PUF组分中L-580、1006-2和水的质量分数分别为1%、10%、0%时制备所得泡沫用于氰降解菌的固定化,体系的总生物量比游离细胞体系提高了43%,降解氰化物的总酶活约为游离细胞体系的2倍。     

吸附-聚合物修饰组合固定化Candida antarctica脂肪酶研究

通过吸附法联合PEG非共价修饰,研发了一种固定化南极假丝酵母脂肪酶(Candida antarctica lipase)的新方法,可以有效提高固定化酶在非水介质中的催化活性。最佳固定化条件为硅藻土:酶粉(W/W)=8,PEG4000:酶粉(W/W)=0.6,缓冲液pH7.5。采用三油酸甘油酯与甲醇的转酯化反应,测定了固定化酶的转酯活性。结果表明,固定化酶同时加入PEG进行非共价修饰,可显著提高固定化酶的转酯活力。PEG修饰的固定化酶转酯比活是未经PEG修饰的固定化酶的4.1倍,转酯酶活回收率为604.8%,说明PEG两性分子的特性对制备用于非水介质的固定化酶有重要作用。该固定化方法可显著提高Candida antarctica脂肪酶在非水介质中的催化效率,且固定化方法简单、成本低,具有工业应用价值。     

酶的固定化方法在微流控芯片技术中的应用

对微流控芯片上酶的固定化方法进行了综述，系统总结了酶的常见固定化方法及微流控芯片体系中酶的固定化方法，如常见的包埋法、物理吸附法、化学交联法、共价键合法等。为微流控芯片体系酶的固定化研究提供参考，对药物筛选新方法的建立指出新思路。     

磁性高分子微球固定化酶的制备及应用

利用磁性高分子微球通过化学反应固定化酶,可以借助外部磁场方便地分离回收固定化酶,将固定化酶放入磁场稳定的流动床反应器中还可以减少持续反应体系中的操作.简要地介绍了磁微球的制备方法,包括包埋法、分散聚合、乳液聚合和悬浮聚合,对磁性微球固定化酶的制备方法和原理进行了探讨,论述了磁性高分子微球固定化酶的特点及应用.     

漆酶在介孔分子筛MCM-41上的固定化研究

以介孔分子筛MCM-41作为漆酶固定化的载体,采用物理吸附法进行固定化,考察了时间、pH和给酶量对固定化效果的影响,并对固定化酶的活性及其稳定性进行了研究,讨论了影响固定化过程和固定化酶性质的主要原因.结果显示,在pH为3时,酶和载体比例为62.5 mg·g-1时吸附12 h固定化效果最好,固定化酶活性回收率为50%;与游离漆酶相比,MCM-41固定化漆酶的最适反应pH略有升高,最适温度没有变化,其pH稳定性和热稳定性都显著优于游离漆酶,固定化漆酶具有可重复操作的性质,与底物反应反复操作10批次后剩余活性为40%.以上表明,MCM-41作为固定化漆酶的一种新型载体材料,有利于改善漆酶的稳定性和实用性.     

大孔载体固定化脂肪酶

用自制大孔载体固定化脂肪酶，对固定化条件进行了优化，比较了固定化酶与游离酶的酶学参数. 结果表明，酶粉与载体质量比为1:1、固定化温度在20~25℃之间、固定化时间1.5 h的条件下，所得固定化酶的酶活最高. 固定化酶的最适pH为8.5，最适温度为40℃，其热稳定性、操作稳定性都比游离酶高，4℃下保存7 d后，酶活仍剩余94%.