2%宁南霉素水剂对烟草花叶病毒的抑制及作用机制的初步研究

采用半叶法测定2%宁南霉素水剂(AS)在500 mg/L下抗烟草花叶病毒(TMV)的活体治疗、保护及钝化活性,检测2%宁南霉素AS诱导炯叶中内防御酶活性变化及病程相关蛋白基因的表达.结果表明,2%宁南霉素AS具有较高的抗TMV活性,同时2%宁南霉素AS处理可导致接种TMV烟草品种K326叶片的PAL、POD、SOD活性不同程度提高和PR-1a、PR-5基因表达上调,表明2%宁南霉素AS能启动烟草的一系列抗病防御反应,诱导烟草产生抗病性.     

4种药剂对烟草花叶病控制研究

为寻找能有效防治烟草花叶病的药剂，该试验选用了4种药剂，在烟草上进行田间小区实验，结果表明，2％宁南霉素和99植保对烟草花叶病的控制效果较好，防治效果达83．20％和78．78％，同时对烟株的植物学性状有促进作用。     

香椿树皮提取物与宁南霉素的复配增效作用

[目的]进一步研究香椿树皮活性成分与宁南霉素对烟草花叶病毒的复配增效作用。[方法]以烟草花叶病毒(TMV)为供试病毒,采用活性跟踪法对香椿树皮活性物质进行初步分离,通过半叶枯斑法测定香椿树皮活性成分与宁南霉素的复配剂对烟草花叶病毒抑制活性。[结果]香椿的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对TMV均表现较好的抑制活性,并对其继续进行分离,并通过对TMV抑制活性筛选,将高活性组分与宁南霉素复配,发现组分Fr1及组分Fr13分别与宁南霉素的复配比为1∶1时,增效作用最佳;组分Fr11与宁南霉素的配比为1∶2时,增效作用最佳,优于单剂。     

防治作物病毒病新农药—宁南霉素

宁南霉素是一种广谱、高效、低毒、低残留的无公害生物农药,其产生菌是诺尔斯链霉菌西昌变种。宁南霉素系统地诱导植物产生PR蛋白,降低植物体内病毒粒体浓度,破坏病毒粒体结构,从而达到防治作物病毒病的效果。它对烟草等作物的病毒病一般防效为70％左右,最高可达90％以上。筛选后的高产菌株摇瓶发酵水平可达20000u/ml,已实现20t罐的工业化生产。     

2种抗TMV活性筛选方法在农药创制领域的应用

[目的]找到适合新化合物创制领域的抗TMV活性筛选方法。[方法]采用全株法和半叶法,对利巴韦林、宁南霉素、娃儿藤碱和NK007的抗TMV活性进行测定并比较数据。[结果]各药剂活体保护与活体治疗试验数据中全株法抑制率数值普遍高于半叶法,而活体钝化试验数据无规律。[结论]全株法适合应用于创制新化合物抗TMV活性初筛阶段,而半叶法可以作为验证和补充研究手段,应用于复筛和深入研究阶段。     

冷饭团果实提取物与宁南霉素的复配增效试验

[目的]对冷饭团果实提取物与宁南霉素进行复配增效试验研究。[方法]采用活性跟踪法对冷饭团果实活性物质进行初步分离,以烟草花叶病毒(TMV)为供试病毒,通过半叶枯斑法测定复配剂的抗TMV活性。[结果]冷饭团的石油醚萃取物、氯仿萃取物和乙酸乙酯萃取物对TMV均表现较好的抑制活性,并对其继续进行分离。通过对TMV抑制活性筛选,将高活性组分与宁南霉素复配,发现组分Fr8和Fr11与宁南霉素的配比为1∶4时,增效作用最佳,优于单剂。     

0.5%氨基寡糖素AS对烟草TMV的抑制及作用机制的初步研究

研究了0．5％氨基寡糖素AS（净土灵）6．25mg/L对烟草花叶病毒（TMV）枯斑寄主心叶烟（Nicotiana glutinosa）的预防、治疗和钝化作用及其在烟草上引起的寄主体内防御酶系变化。结果表明，0．5％氨基寡糖素AS喷施24h后接种TMV，对烟草花叶病毒的预防效果为58．5％，对烟草花叶病毒侵染的治疗效果达43．6％，对烟草花叶病毒的钝化效果为11．8％。同时，0．5％氨基寡糖素AS处理可导致烟草品种K326叶片的PAL、POD、SOD活性不同程度提高，表明0．5％氨基寡糖素AS可以诱导烟草对TMV的抗性，提高烟草的免疫能力。     

氟吡菌胺对大白菜霜霉病的作用方式和持效期

[目的]探索氟吡菌胺对大白菜霜霉病的作用方式和控制效果。[方法]采用离体子叶浸泡法测定保护作用和持效期,并采用离体子叶接种-浸泡法和离体子叶喷雾法分别测定治疗作用和铲除作用。[结果]氟吡菌胺保护作用与治疗作用的EC50值分别为0.287 3、0.457 2 mg/L,并能抑制大白菜霜霉病菌的病斑扩展、孢子囊产生及孢子囊再侵染,药剂持效期长达7~10 d。[结论]氟吡菌胺对大白菜霜霉病具有很好的保护、治疗及铲除作用,且持效期长。     

锅炉酸洗后过氧化氢钝化的试验研究

研究了锅炉酸洗后过氧化氢钝化的工艺条件。pH为6．5—7．5，0．5％—1．0％过氧化氢(含过氧化氢稳定剂)，25—30C下钝化4—6h，可获得良好的钝化膜。X光电子能谱测定结果表明，钝化膜组成均匀，膜层致密。在锅炉清洗中取得了较好的效果。     

SPE-HPLC-MS/MS测定梨中多抗霉素B和宁南霉素残留

[目的]建立固相萃取-高效液相色谱-串联质谱(SPE-HPLC-MS/MS)同时测定梨中多抗霉素B和宁南霉素残留的分析方法。[方法]样品用0.2%甲酸水提取,经HLB和MCX固相萃取柱净化上机。用Waters ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱分离,以0.1%甲酸和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,多反应离子监测模式(MRM)扫描,以基质匹配标准曲线外标法定量。[结果]多抗霉素B和宁南霉素在0.005～0.2 mg/L的质量浓度范围内均呈现良好的线性关系(R20.999);在0.02、0.5、2.0 mg/kg的3个加标水平下,回收率为77%～91%,相对标准偏差(RSD)为2.8%～5.8%。[结论]该方法易于操作,灵敏度高,适用于梨中多抗霉素B和宁南霉素残留的同时检测。     

Antiviral activity and mechanism of action of novel thiourea containing chiral phosphonate on tobacco mosaic virus

Using half-leaf method O,O'-diisopropyl (3-(L-1-(benzylamino)-1-oxo-3- phenylpropan-2-yl)thioureido)(phenyl)methyl phosphonate (2009104) was studied for its activity on tobacco mosaic virus (TMV). It showed good curative activity in vivo and the curative activity at 500 μg/mL was found to be 53.3%. In vivo treatment with the control agent Ningnanmycin at 500 μg/mL resulted in 51.2% inhibition and curative inhibition rates respectively. Dot-ELISA test was employed to verify the efficacy of activity of compound 200910 for anti-TMV activity. The mechanism of action of compound 2009104 to resist TMV was also studied. The results showed that the resistance enzymes PAL, POD, SOD activity and chlorophyll content after TMV inoculation K(326) (Nicotiana tabacum K(326)) of tobacco plants followed by treatment with compound 2009104 were significantly enhanced. The study of the effect of compound 2009104 on TMV capsid protein (CP) showed that it inhibited the polymerization process of TMV-CP in vitro.     

鼠细小病毒感染性滴度测定方法的建立及病毒制备

目的建立鼠细小病毒(MMV)感染性滴度测定方法,并制备高滴度的MMV,为生物制品病毒清除/灭活工艺的验证奠定基础。方法通过分析NB324K细胞接种量、培养时间及病毒吸附时间等参数,建立MMV病毒滴度测定的半数细胞感染剂量法(CCID5)0,并分析其精密性;以A9细胞制备MMV,分析感染复数(MOI)、收获时间及收获样本对病毒滴度的影响,并检测病毒的稳定性。结果NB324K细胞的最佳接种浓度、培养时间及病毒吸附时间分别为5×103个/孔、48h及2h,所建立的检测方法精密性较好;A9细胞沉淀中病毒滴度高于上清,且随病毒MOI值的升高而逐渐增加,在MOI为10时,感染后48h收获,病毒滴度最高。制备的病毒液的平均滴度为8.69CCID50/ml,4℃和37℃保存7d及反复冻融5次,稳定性良好。结论已建立了MMV感染性滴度测定方法,并制备了高滴度的病毒,为以MMV为指示病毒进行病毒清除/灭活工艺验证奠定了基础。     

重组MVA病毒载体疫苗的冻干保护剂研究

目的研制重组MVA病毒载体疫苗的耐热冻干保护剂。方法在重组MVA病毒载体疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜的条件下制备成冻干剂型。根据冻后外观、病毒滴度和热稳定性等结果,筛选出保护剂的最适配方。结果以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等按比例、配伍而成的保护剂,对MVA病毒载体疫苗显示了较好的保护性,疫苗冻干前后病毒滴度下降在0.12LgPFU/ml以内,37℃放置1周,滴度下降0.35LgPFU/ml左右;放置3周,滴度下降不超过1LgPFU/ml。而无保护剂的液体疫苗对照于37℃放置1周,滴度下降近1LgPFU/ml;放置3周,滴度下降3.5LgPFU/ml左右。结论以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等配伍而成的保护剂是一种良好的疫苗保护剂。     

狂犬病毒糖蛋白重组痘苗病毒的热稳定性

将狂犬病毒糖蛋白重组痘菌病毒422株（简称重组病毒）放37℃3天后，滴度下降不到1个对数值，与亲本林之间无明显差异；而对照狂犬病毒放37℃3天，滴度下降3．5个对数值．在重组病毒中加有5％蛋白际作保护剂，保护率达51．6％～926％；放37℃3天，下降不到0．5个对数值，放22℃和4℃更稳定．     

二乙烯亚胺灭活流感病毒的效果观察

目的观察二乙烯亚胺(BEI)对流感病毒的灭活效果。方法分别使用甲醛和BEI对流感病毒进行灭活试验,通过血凝试验检测二者灭活效果,并确定各自最佳灭活时间。用灭活的病毒液免疫小鼠,检测其抗原性,并用RT-PCR方法分析灭活病毒基因组的完整性。以裂解剂TritonX-100裂解病毒后,分别加入甲醛和BEI灭活,采用单向免疫扩散法检测灭活不同时间病毒液的HA含量。结果BEI灭活36h可将病毒完全灭活;BEI灭活的病毒免疫小鼠较甲醛灭活病毒产生较高的血凝抑制抗体;BEI灭活病毒液经RT-PCR,不能扩增出病毒基因;BEI灭活病毒的HA平均含量比甲醛灭活病毒的HA平均含量略高。结论BEI在灭活流感病毒感染性的同时,能够灭活病毒基因,并较好地保持病毒的抗原性。     

禽流感病毒抗原-抗体复合物的制备及其免疫原性

目的制备禽流感病毒抗原-抗体复合物,并检测其免疫原性。方法以H5亚型禽流感病毒的HA蛋白为抗原,其病毒的高免卵黄为抗体,将抗原与抗体按不同比例混合,制备禽流感病毒抗原抗体复合物。免疫1日龄SPF仔鸡,进行保护力试验;于免疫后不同时间检测血清HI抗体水平,并与H5亚型油乳剂灭活疫苗进行比较。结果抗原与抗体比例为1∶0.6的抗原-抗体复合物在免疫仔鸡15d后,其诱导的平均抗体水平达6.5log2,与H5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗(6.2log2)相比,差异无统计学意义;在等量病毒攻击后,二者对仔鸡的保护率相同(93.3%)。结论制备的禽流感病毒抗原-抗体复合物具有良好的免疫原性,为研制禽流感新型复合物疫苗提供了依据。     

国产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的安全性及免疫原性

目的观察国产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的安全性及免疫原性。方法按照随机、对照、盲法的原则,0、21d程序选择老年组、少年组和少儿组各220人,按1︰1比例随机接种15μg、30μg甲型H1N1流感疫苗;成年组330人,按1︰1︰1比例随机接种15μg、30μg甲型H1N1流感疫苗和安慰剂对照(PBS);0、28d程序只选择成年组220人,按1︰1比例随机接种15μg、30μg甲型H1N1流感疫苗。观察各组接种后的总体不良反应率、全身和局部不良反应率以及免疫后HI抗体阳转率、保护率、GMT水平和平均增长倍数。结果1210名观察对象总体不良反应发生率为21.82%,均以1级不良反应为主,未观察到3级及3级以上不良反应、其他异常反应和严重不良事件。30μg剂量组免疫后HI抗体阳转率和保护率与15μg剂量组比较,差异无统计学意义。两接种程序同一剂量组内第1针免疫后HI抗体阳转率、保护率、免疫后GMT及增长倍数各指标比较,差异均无统计学意义。结论国产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗具有良好的安全性和免疫原性,按照0、21d程序各接种1针15μg甲型H1N1流感疫苗,即可在12～60岁人群中产生良好的免疫效果。     

甲型肝炎灭活疫苗的研制

甲型肝炎病毒8347毒株在人二倍体细胞（2BS株）中增殖4周，收获的病毒液经冻融、超声、过滤．德液用1：4000福尔马林、37℃灭活6天以上制成灭活疫苗，病毒灭括前的滴度（TCID50／ml）至少可达6．5左右．疫苗免疫豚鼠和小鼠三针后，75％～100％的动物甲肝抗体阳转。经超声处理后疫苗免疫原住可大幅度提高，三针后动物血清中的中和抗体效价可达1：20以上．     

重组人干扰素βSer~(17)的制备及其对SARS病毒的抑制作用

目的制备重组人干扰素-βSer17(rhIFN-βSer17),并检测其对SARS病毒的抑制作用。方法通过发酵收集菌体,经高压匀浆破碎收集包涵体、有机溶剂抽提、酸沉淀、柱层析纯化重组蛋白,通过细胞病变抑制法检测其对SARS病毒的抑制作用。结果研制的rhIFN-βSer17的纯度超过95%,比活性超过2.0×107IU/mg蛋白,在体外对SARS病毒具有明显的抑制作用。结论已成功制备rhIFN-βSer17,并在体外对SARS病毒具有抑制作用。