赤霉素产生菌原生质体理化诱变-定向筛选模型的建立与应用

针对赤霉素工业生产菌株皆为不产生孢子的多核多细胞菌丝型,通过酶解手段溶去赤霉素菌丝体的细胞壁,使其成为单一游离的原生质体,在此基础上建立赤霉素产生菌原生质体抗药性致死突变标志诱变筛选模型,以解除高浓度反应底物及内源赤霉素对其产生菌生物合成的反馈抑制和阻遏,提高赤霉素生物合成酶的活力,从而获得赤霉素高产菌株。应用所建立的赤霉素诱变筛选模型,进行产生菌原生质体理化诱变-定向筛选,成功得到N7298等多株原生质体再生的抗药性突变高产菌株,其摇瓶效价比出发菌株N提高23.4%,在20m3罐生产水平提高24.1%。     

复合诱变抗性筛选法选育高转化甘油产1，3-二羟基丙酮菌株

在测定不动杆菌（Acinetobactersp．）Aspl6菌株链霉素最低杀菌浓度的基础上,对菌株进行UV和Co诱变处理后,利用链霉素抗性平板筛选获得l株遗传性能稳定、高转化甘油产1,3-二羟基丙酮的突变株Asrl68,将突变株在5．0g·L-1酵母膏、140．0g·L-1甘油、7．0g·L-1。CaC03组成的发酵培养基中于30℃、250r·minll摇床培养50h,1,3-二羟基丙酮的产量达到136g·L-1,比出发菌株提高200％。表明通过UV和”Co诱变,结合链霉素抗性平板筛选,可大幅提高不动杆菌转化甘油产1,3-二羟基丙酮的能力。     

大气压冷等离子体诱变产1,3-丙二醇菌株Klebsiella pneumoniae

采用大气压冷等离子体介质阻挡放电法对产1,3-丙二醇的克雷伯氏菌进行诱变,采用诱变与筛选同时进行的单细胞平板诱变方法,同时获得了可耐受高浓度甘油且1,3-丙二醇产量较高的优良突变株. 对诱变后菌的间歇发酵结果表明,诱变菌株比出发菌株1,3-丙二醇的质量转化率提高了23%,对数期比生长速率提高了18%. 批式流加发酵过程中,1,3-PD浓度在发酵36 h时达到70.5 g/L,甘油的质量转化率为0.57 g/g,分别比野生菌提高47%和58%. 该诱变和筛选方法具有操作简单、效率高等特点,对具有工业应用价值的菌株筛选具有实用价值.     

抗药性基因突变筛选高产菌株

本文通过洁霉素对盐酸林可霉素产生菌 98-1菌株孢子的致死浓度测定 ,采用诱变剂EMS的四种不同诱变剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含洁霉素 ( 2 0 0 0 0ug/ml)的高氏平板上 ,获得了大量的洁霉素抗性基因突变株 ,然后从 90 0株洁霉素抗性基因突变株中通过初筛获得高于诱变出发菌株产素能力的菌株 5 6株 ,再进一步通过摇瓶复筛 ,并结合菌丝生长及摇瓶代谢情况 ,获得优于出发菌株的诱变菌株 4株。将这 4个菌株连同出发菌株连续三批次进行摇瓶发酵 ,结果 4个突变株的产素能力 (产量 )及摇瓶代谢和菌丝生长情况均优于出发菌株 ,试验筛选出最优菌株 0 2 -0 3 -40 2。将 0 2 -0 3 -40 2进行罐上发酵生产试验 ,结果试验罐比对照罐平均效价提高 1 7.5 6% ,平均产量提高 1 9.3 4%。本文建立了林可霉素高产菌株的洁霉素抗性基因突变诱变快速高效的筛选方法     

紫外-ARTP复合诱变选育达巴万星前体高产菌株

采用紫外-常压室温等离子体(ARTP)技术对达巴万星前体产生菌野野村放线菌属(Nonomuriaspp.)菌株DW-3-19进行复合诱变,并进行链霉素抗性突变选育,获得了具有稳定遗传性的高产菌株,该菌株发酵单位比出发菌株提高了68.7%。表明,ARTP技术可有效应用于放线菌的诱变选育,紫外-ARTP复合诱变可提高达巴万星前体发酵单位,降低生产成本,为短时间内获得稳定遗传的高产菌株提供了可行的方法。     

高产刺糖菌素发酵菌株的选育

采用紫外线结合氯化锂以及硫酸二乙酯结合氯化锂2种常规诱变方法对刺糖多孢菌进行复合诱变,分别筛选鼠李糖抗性突变株、2-脱氧-D-葡萄糖抗性突变株和刺糖菌素抗性突变株,并结合自然分离纯化,最终获得高产菌株D-S-23,其产量达N89.57 mg/L,较出发菌株提高了104.3%.     

利用前体物质定向选育阿维菌素高产菌株

以除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)AV-0105为出发菌株,采用紫外线诱变处理,并结合前体抗性定向选育阿维菌素高产菌株. 通过对致死率的考察,确定了紫外线诱变的最适剂量. 在分离培养基中分别加入不同体积分数的缬氨酸和D -脱氧葡萄糖作为前体物质进行正突变株的定向筛选,选育得到阿维菌素高产菌株 AV-03-35,其摇瓶发酵效价达到4 695 u/mL,较出发菌株提高15.5%. 采用该菌株在2 t罐进行生产验证,平均发酵效价达4 592 u/mL,较出发菌株提高了13%.     

丙酮-丁醇发酵生产菌的快速筛选方法

建立了高效丙酮-丁醇生产菌的快速筛选方法,采用氮离子注入诱变技术选育丙酮-丁醇发酵生产菌,以2-脱氧-D-葡萄糖作为抗代谢阻遏物,筛选高淀粉酶活性的突变株. 首次根据丙酮-丁醇发酵代谢途径中先产酸后产溶剂及高活力厌氧发酵细胞具有较强还原力的特点,设计了溴甲酚绿和刃天青2种筛选平板,所筛突变株经发酵验证丁醇和总溶剂产生能力均有显著提高,I4-28突变菌株总溶剂产量和丁醇产量分别较出发菌株提高了27.96%和40.66%,丁醇/总溶剂比由63.39%提高到71.94%,突变菌株具有较好的传代稳定性.     

He-Ne激光与紫外线复合诱变选育西罗莫司高产菌株

以吸水链霉菌为出发菌株,采用He-Ne激光-紫外复合诱变对其单孢子悬液进行诱变筛选高单位突变株,经复筛选育出具有较好遗传稳定性的高产突变株11-1-6#,摇瓶效价达到401.9u/mL,比出发菌株提高了79%。     

高产1,3-丙二醇的等离子体诱变菌株选育及发酵动力学分析

以肺炎克雷伯氏菌为出发菌株,利用大气压介质阻挡放电等离子体诱变,确立等离子体诱变的物理参数和最佳诱变条件,分别以不同浓度的底物和产物筛选培养基对诱变菌液进行驯化,并结合96孔板筛选单菌落,获得一株高产1,3-丙二醇的突变菌株,命名为Kp-M2,其间歇发酵1,3-丙二醇产量比野生菌提高43%.基于Logistic和Lue...