抗M血型抗原单克隆抗体特性的研究

以OM型人红细胞膜血型糖蛋白A为抗原，通过交瘤技术，获得一株稳定分泌抗M血型抗原的单抗细胞株（4E6）。所分泌抗体类型为IgG2b。4E6能特异性识别M型血型糖蛋白A的双聚体及单体；4E6与M型PanelA红细胞呈持异性反应；临床初步应用表明，4E6可用于对M、N血型系统的分型。     

实验性T多凝集红细胞的血型检测

人红细胞经神经氨酸酶处理后,与A、B、A B、O型成人血清及人血清制备的血型试剂都出现血凝,抗A、抗B血型单克隆抗体只与相应红细胞凝集;抗T单抗和花生血凝素只与T激活红细胞反应;抗M、抗N单抗和兔免疫血清试剂与T激活红细胞无凝集。进一步证实了人血清及其制备的血型试剂中含有抗T抗体。用血型单克隆抗体检测T激活红细胞,能得到正确的ABO定型;T激活红细胞的MN抗原已被神经氨酸酶破坏,用单抗和兔免疫血清试剂抗M、抗N都不能判断其原来MN血型。     

抗人M型红细胞膜血型糖蛋白A单克隆抗体的理论化特性研究

本文报告了理化因素对抗人Ｍ型红细胞膜血型糖蛋白Ａ单克隆抗体活性听影响。在ＰＨ７。５－９。５，反应温度２０－３０℃范围内，只有４Ｅ６特异性凝集具有Ｍ血型抗原的红细胞，其余各单克隆抗体与Ｎ型红细胞有交叉凝集反应。     

抗人GPA~N单克隆抗体的制备及鉴定

目的　制备抗GPA单克隆抗体以建立“GPA体细胞突变分析法”。方法　用O ,N型人红细胞 ,以及纯化人GPAN 免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备 ,用细胞凝集、间接免疫荧光筛选 ,用ELISA、Westernblot、酶处理红细胞的间接免疫荧光标记鉴定。结果　获得抗GPAN 单克隆抗体 6A8杂交瘤细胞系。其单抗属lgG3亚类 ,λ型轻链 ,识别和结合GPAN 氨基端 1～ 8位决定位点 ,对糖链依赖。流式细胞分选结果显示 6A8特异结合二甲亚胺固定的人MN和N型红细胞。结论　对分析由于基因突变和糖基化变异所致N ,MN红细胞GPAN 突变有理论研究和应用价值。     

检测M、N血型抗原的双位点一步ELISA方法的建立

目的　建立一种特异性强、灵敏度高的检测MN抗原的新方法。方法　应用抗M、抗N及抗血型糖蛋白A单克隆抗体 ,建立双位点一步ELISA法。结果　检测M、N抗原的最适pH值分别为 6 0及 7 5。适宜的反应温度为 2 0 30℃。利用表面活性剂l o n octyl β D glucopyranoside(OBG)浸泡血痕 ,可明显提高ELISA法检测陈旧血痕中N抗原的灵敏度 ,检测微量液体血和新鲜血痕的灵敏度分别为 0 .0 3μg血液和 0 .0 1～0 .0 5 μg干血。 结论　该法特异性强、灵敏度高 ,为法医血清学MN分型检验提供了一种新方法     

1名Am亚型患者的血型血清学鉴定及输血策略

目的对Am亚型患者的血型进行血清学鉴定,并为其输血选择适合的血液成分。方法对1名ABO正反定型不相符患者,用抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB和抗-H单抗检测红细胞ABH抗原;A、B、O型红细胞与血浆反应检测ABO血型抗体及不规则抗体;吸收放散试验检测红细胞弱抗原;中和抑制试验检测唾液中ABH血型物质。根据患者血型血清学检测结果,选择相容血液成分进行输血。结果该患者符合Am亚型的血型血清学特征,输入O型少白细胞红细胞6U,A型单采血小板1治疗量后,均能达到预期疗效,无不良反应。输血后3个月的血型血清学检测结果与输血前完全一致。结论ABO血型鉴定时坚持正、反定型,可避免将Am亚型误定为O型,对Am亚型的准确鉴定有赖于多种血型血清学试验。Am亚型患者输血时可选择O型红细胞、A型血小板、A型或AB型血浆。     

ABO血型单克隆抗体与动物血球凝集试验

<正> 为了了解ABO血型单克隆抗体与常见的几种动物血球是否有非特异性的血凝反应,为今后选用单克隆抗体化验血型,提供参考资料。取新采集的13种动物血球,配成2％红细胞悬液与单克隆抗体和人源血型(抗A、抗B试剂等体积混合进行玻片凝集试验,结果发现: 1.兔血球能与抗B单克隆抗体,人源抗B血型试剂发生血凝反应,说明兔血球表面具有人血型B共同抗原决定簇。这种反应属型特异性抗原抗体反应。     

抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品的研制

目的研制抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品。方法将抗D(IgM)杂交瘤细胞培养上清液经0. 22μm滤膜无菌过滤分装,冻干制备抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品(简称参考品)。按YY/T 1238-2014《RhD(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)》行业标准,检测其外观、pH、特异性、亲和力及效价;并由4家实验室进行协作标定,进行瓶间精密度及热稳定性试验。结果参考品外观为白色冻干粉末,复溶后为无色或淡黄色透明液体,无摇不散的沉淀及异物;pH为7. 2;效价为1∶64;与RhD阳性红细胞有凝集反应,与RhD阴性红细胞无凝集反应;凝集时间均在15 s以内,3 min凝集块均大于1 mm2。经各实验室协作标定,随机抽取的2支参考品效价均为1∶64;37℃放置3、7、14 d的效价均为1∶64。结论成功制备抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品,其瓶间精密度及稳定性均较好,可用于抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)效价检测的质量控制。     

辽宁锡伯族群体Rh血型D基因频率分布

<正>人类红细胞血型由约20多种血型系统组成,ABO和Rh血型是与人类输血关系最为密切的两个血型系统。人类红细胞上的Rh血型系统包括5种不同的抗原:C、c、D、E、e。从理论上推断,有3对等位基因Cc、Dd、Ee控制着6个抗原,但实际上未发现单一的抗d血清,因而认为不存在d基因,在红细胞表面不表达d抗原。在5个抗原中,D抗原的抗原性最强。因此,通常将红细胞上含有D抗原的称为Rh阳性(+),     

ABO血型反定型试剂质控方法和质量标准的建立

目的建立ABO血型反定型试剂的质控方法和质量标准。方法用抗P、抗M、抗N、抗C、抗c、抗E、抗e试剂检测O型血浆样本,选择分别与抗P、抗M、抗C、抗e试剂反应呈■强阳性样本,和与抗P、抗N、抗c、抗E试剂反应呈■强阳性样本各2份,配制ABO血型反定型用O型细胞。分别对两个厂家提供的和自制的ABO血型反定型用O型细胞进行抗原性检测,同时进行外观、特异性、ABH抗原性、亲和力、溶血率、稳定性检测,并检测35份含IgM类不规则抗体的阳性血浆样本,对比检出率。结果自制的ABO血型反定型用O型细胞与抗P、抗M、抗N、抗C、抗c、抗E、抗e试剂反应均呈■以上,而其他两个厂家提供的ABO血型反定型试剂均有部分抗体漏检;外观、特异性、ABH抗原性、亲和力、溶血率、稳定性检测均无明显差异,符合相关要求;自制的ABO血型反定型用O型细胞可检出所有IgM类不规则抗体,无漏检,而其他两个厂家提供的ABO血型反定型试剂均有部分血浆样本漏检。结论本研究建立的质控方法和质量标准适用于IgM类不规则抗体的检出。     

疏水作用柱层析技术纯化HBsAg条件的筛选

在应用流水作用柱层析纯化HBsAg中,对流水介质的功能基类型、交联密度、盐的浓度、操作温度等决定疏水性强弱的因素作了比较研究。结果表明,应用以C4为功能基的Butyl—Sepharose（6～8μmol／ml）和以C3为功能基的Propyl－Sepharose（20～22μmol／ml）疏水介质、8％（NH4）2SO4,18～24℃等条件纯化HBsAg时结果较理想。     

B→O血型转换批量制备通用型红细胞的研究

目的建立B→O血型转换红细胞(通用型红细胞)批量制备工艺,为临床提供通用型红细胞制品。方法用不同pH值的缓冲液对1个使用单位(200ml)的B型红细胞进行预处理。在专门设计的转型密闭处理系统中,用α半乳糖苷酶对B型红细胞表面B抗原进行酶解,并检测酶解后红细胞ABO血型抗原及结构、功能。结果酶解前用pH4.2缓冲液预处理组上清游离Hb含量显著低于pH2.8缓冲液处理组;经α半乳糖苷酶(100Uml红细胞)在pH5.6,26℃条件下酶解60min,红细胞B型抗原被完全清除,转换为O型;红细胞形态、变形性、ATP、2,3DPG、胆固醇含量、乙酰胆酐酯酶活性、渗透脆性、pH、上清游离Hb、K+、Na+含量与对照组(正常红细胞)比较差异无显著意义,均在正常范围。结论建立了B→O血型转换通用型红细胞的批量制备工艺。通用型红细胞结构、功能、形态均正常,细菌、热原实验合格。     

羊布鲁菌O链M抗原提纯及其单克隆抗体的研制

目的研制羊布鲁菌O链M纯化抗原及其单克隆抗体。方法采用冷酚法提纯羊布鲁菌16M的O链抗原,并经琼脂糖凝胶免疫扩散和SDS-PAGE鉴定,用灭活的该抗原免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并进行鉴定。结果建立3株分泌单克隆抗体的细胞株2D10、3C6和1E10,ELISA效价分别为1.380、1.109和1.048,与大肠杆菌0:157、小肠结肠炎耶尔森菌0:9、鼠伤寒沙门菌和猪胸膜肺炎放线杆菌均无交叉反应。3C6和1E10与牛布鲁菌544A发生交叉反应,2D10的亲和常数达5.30×10~7M~(-1)。结论已制备出纯化的羊布鲁菌O链M抗原及其单抗。     

Development of a Rapid Fluorescent Diagnostic System to Detect Subtype H9 Influenza A Virus in Chicken Feces

The circulation of the H9N2 virus results in significant economic losses in the poultry industry, and its zoonotic transmission highlights the need for a highly sensitive and rapid diagnostic and detection system for this virus. In this study, the performance of lateral flow test strips for a fluorescent immunochromatographic test (FICT) was optimized for the diagnosis of H9N2 virus-infected animal samples. The novel monoclonal antibodies (McAbs) against influenza A H9 viruses were developed, and two categories of McAbs with linear and conformational epitopes were compared for the performance of rapid diagnostic performance in the presence of feces sample at different time points (2, 4, and 6 days) post-infection (dpi). The limit of detection (LOD) of FICT and Kd values were comparable between linear and conformational epitope McAbs. However, superior performance of linear epitope McAbs pairs were confirmed by two animal studies, showing the better diagnostic performance showing 100% relative sensitivity in fecal samples at 6 dpi although it showed less than 80% sensitivity in early infection. Our results imply that the comparable performance of the linear epitope McAbs can potentially improve the diagnostic performance of FICT for H9N2 detection in feces samples. This highly sensitive rapid diagnostic method can be utilized in field studies of broiler poultry and wild birds.     

人MNS_s血型系统抗N单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术,将 NS-1细胞与完整的红细胞免疫的 BALB/c 鼠脾细胞融合,获得MNS_s 血型系统分泌 IgG 抗 N 抗原的杂交瘤细胞株——10D_6。细胞培养上清效价1∶1024,亲和力7秒,经过8个月以上的连续传代培养,细胞增殖良好,性状稳定,持续分泌高效价,高亲和力,抗N 抗原的单克隆抗体。可作为血型检测的又一标准试剂。     

牛布氏杆菌抗独特型杂交瘤细胞的悬浮培养研究

牛布氏杆菌抗独特型杂交瘤细胞F9株能稳定地分泌高效价的抗独特型抗体,其Ig类型为IgG2a,并具有抗原“内影象”和良好的免疫原性。该细胞培养在Techne－T104型1．5L细胞培养装置中,最适连续培养条件是pH7．1～7．5;36．5±0．5℃,搅拌速度35～45r／min。在连续悬浮培养时,细胞密度维持在3．2×105～8．2×105／ml,单克隆抗独特型抗体浓度可达1．04mg／ml,培养上清ELISA捕获法效价达1：160。     

一种测定血型物质含量的新方法

基于补体介导的溶血原理，建立了测定血型物质含量的溶血抑制试验。分型血清抗体与血球结合后，在补体的作用下可以溶解血球而释放血红蛋白，通过测定上清中血红蛋白含量求出所测样品中的血型物质含量。该方法的灵敏度（0．078μg／ml）比常规的血凝抑制试验（0．3125～0．165μg／ml）高4～8倍，重复性好，简便易行，可用于测定生物制品中血型物质的含量。     

抗霍乱弧菌O1群单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗霍乱弧菌O1群特异性单克隆抗体(McAb),并进行鉴定。方法以福尔马林灭活的O1群霍乱弧菌免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术建立分泌抗O1群霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株。对配对较好的6个细胞株分泌的McAb进行腹水效价、免疫球蛋白类及亚类、抗体亲和常数测定及凝集试验和稳定性试验。与细菌培养法对比检测208份临床标本。结果6个细胞株分泌的McAb腹水效价均为105,均为IgM;抗体亲和常数为1.84×105～5.38×107;且均与O1群霍乱弧菌菌株发生凝集反应,与霍乱弧菌O139群、大肠杆菌、出血性大肠杆菌O157∶H7、副溶血弧菌、麦弧菌、河弧菌、结肠炎耶尔森菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及各型副伤寒杆菌均不发生凝集反应。6个分泌McAb的细胞株连续培养15周,经液氮冻存12个月后复苏,仍能稳定分泌抗体;与细菌培养法对比检测208份临床标本,特异性和灵敏度均达100%。结论制备的McAb具有较高的特异性,有可能用于开发霍乱弧菌O1群的检测试剂。