维氏气单胞菌CA07株灭活疫苗生产工艺的优化

目的 优化维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,AV)CA07株灭活疫苗的生产工艺。方法 通过对AV CA07株菌种培养时间(2～16 h)、发酵培养基(优化发酵培养基、LB培养基、NB培养基)、发酵条件[接种量(1%、5%、10%、15%)、通气量(2、4、6、8 L/min)、发酵时间(6、8、10、12 h)]的优化，确定AV CA07株菌液的发酵工艺。通过对灭活剂甲醛溶液的终浓度(0.10%、0.20%、0.30%、0.40%)、灭活温度(28和37℃)、灭活时间(24、48、72 h)的比较，确定最佳灭活工艺。建立AV CA07株灭活疫苗500 L发酵罐规模化生产工艺，并对制备的疫苗进行安全性及免疫原性试验。结果AV CA07株发酵工艺的最佳接种量为5%，通气量为4 L/min，培养时间为10～12 h；最佳灭活条件为：用终浓度0.30%的甲醛溶液于37℃灭活24 h。500 L发酵罐制备的AV CA07株菌液活菌数达8×10⁹CFU/mL以上，灭活后经腹部免疫鲫鱼，鲫鱼全部存活；攻毒后，相对免疫保护率达90%以上。结论 采用优化生产工艺制备...     

鳜致病性嗜水气单胞菌灭活疫苗原液生产工艺的建立

目的建立鳜致病性嗜水气单胞菌灭活疫苗原液的生产工艺。方法分别采用摇瓶和5L发酵罐于28℃培养嗜水气单胞菌GYK1株,测定不同时间菌液的A650值;培养菌液添加不同浓度的甲醛液,检测不同时间的灭活效果;依次采用摇瓶、种子罐、发酵罐培养,甲醛灭活,制备灭活疫苗原液,并进行安全性和效力试验。结果摇瓶培养时,培养菌液18h进入生长稳定期,24h左右达高峰;用5L发酵罐培养时,培养菌液8h即进入生长稳定期,10h左右达高峰;0.30%的甲醛,37℃,24h可完全灭活菌液,且甲醛残留量较低;制备的灭活疫苗原液安全性良好,效力合格。结论初步建立了鳜致病性嗜水气单胞菌灭活疫苗原液的生产工艺。     

嗜水气单胞菌J-1株灭活疫苗生产工艺的改进

目的 改进嗜水气单胞菌J-1株灭活疫苗的生产工艺,提高培养效率.方法 采用改良培养基和产毒素培养基,利用机械式通风搅拌培养J-1菌株.确定发酵培养时间,并比较两种培养基的培养效果;用摇瓶灭活和罐灭活J-1菌株培养液,比较不同浓度甲醛的灭活效果.结果 用机械搅拌发酵罐培养J-1菌株,菌体生长12～14 h达峰值,产毒素培...     

弧菌福尔马林灭活条件的初步研究

目的 初步研究弧菌福尔马林灭活条件,为弧菌灭活疫苗的生产工艺提供参数。方法对弧菌培养菌液添加不同浓度的福尔马林,于不同温度下测定灭活时间;采用摇瓶和发酵罐培养弧菌,在28℃比较灭活效果,并检测弧菌灭活疫苗原液的安全性。结果福尔马林对弧菌的最低抑菌浓度为0.025%,不同浓度的福尔马林及不同温度所需的灭活时间不同,福尔马林浓度越大,灭活时间越短,加热能缩短灭活时间。摇瓶和罐灭活效果检测显示,在28℃,0.3%的福尔马林24 h可完全灭活,弧菌二联灭活疫苗原液的安全性符合要求。结论 0.3%福尔马林在28℃灭活24 h,是比较理想的弧菌灭活方法。     

牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗的制备与检定

目的制备牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗,并进行检定。方法从黑龙江某牛场发病牛病变的肺组织中分离溶血性曼氏杆菌,经各项鉴定合格后,制备种子液。确定甲醛灭活牛溶血性曼氏杆菌的最佳浓度,将最佳浓度甲醛灭活24 h的牛溶血性曼氏杆菌菌液分别与弗氏佐剂和灭菌Al(OH)3佐剂混合乳化,制备弗氏佐剂灭活疫苗和铝佐剂灭活疫苗,对两种佐剂灭活疫苗进行无菌检验、物理性状检查、安全性观察和效力检验。结果甲醛灭活牛溶血性曼氏杆菌的最佳终浓度为0.3%。制备的两种佐剂疫苗在5%绵羊血琼脂平板上培养24 h,均无细菌生长;物理性状良好;疫苗注射昆明小鼠后,弗氏佐剂灭活疫苗组小鼠除在注射部位部分产生结节外,无其他副作用,而铝佐剂灭活疫苗组小鼠注射部位产生了脓肿和结块;弗氏佐剂灭活疫苗对经牛溶血性曼氏杆菌强毒菌液攻击的小鼠的保护效果较明显,保护率为90%;铝佐剂灭活疫苗产生的保护作用较弱,保护率为80%。结论成功制备了弗氏佐剂和铝佐剂的牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗,其中弗氏佐剂灭活疫苗效果较好,可用于临床溶血性曼氏杆菌引起的呼吸道传染病的预防。     

丙酸高产菌株的选育及发酵培养基优化

通过环境压力筛选获得了一株耐受30 g/L丙酸的产酸丙酸杆菌菌株(Propionibacterium acidipropionici WY320),降低了发酵过程中丙酸的反馈抑制作用,采用正交实验设计优化了发酵培养基. 结果表明,发酵培养基最适的玉米浆、酵母膏和(NH4)2SO4浓度分别为60, 10和7.5 g/L. 该条件下,摇瓶培养耐酸菌株的发酵周期为240 h,丙酸产量为49.35 g/L,较优化前提高72.98%,产率为0.21 g/(L×h); 5 L发酵罐培养的发酵周期为168 h,丙酸产量达51.96 g/L,产率为0.31 g/(L×h),较摇瓶培养提高47.62%,优于文献报道水平.     

鳗弧菌Vibro anguillarum MVM425sh高效电转化条件的优化

目的建立高效的鳗弧菌电转化系统。方法分别从感受态细胞制备的洗涤缓冲液与浓度、复苏培养基、二级细胞收获时间、电转化的电压与脉冲时间等方面,对鳗弧菌的电转化条件进行优化。结果获得的鳗弧菌最佳转化条件为二级培养3h左右收获细胞,用272mmol/L蔗糖洗涤缓冲液制备电转化细胞,在2.0kV3ms的脉冲条件下,pUC18的转化率达106个转化子/μgDNA。结论采用优化的电转化方法,可获得较高的转化率,为鳗弧菌中的常规遗传操作奠定了良好的基础。     

产壳聚糖酶菌株的筛选及其发酵产酶条件的研究

从采集的土样中分离得到一株产壳聚糖酶的菌株,对该菌株发酵产酶条件进行了初步研究.确定其最适的产酶培养基为(%):壳聚糖1.0,葡萄糖0.1,酵母提取物0.5,(NH4)2SO4 1.0,K2HPO4 0.07,KH2PO4 0.03,NaCl 0.5,MgSO4·7H2O 0.05,起始pH值6.0;最适产酶培养条件为:装液量为70 mL/250 mL,接种量3%,30℃、150 r·min-1培养72 h.在最适产酶条件下,该菌株发酵液中壳聚糖酶活力最高达到1.96 U·mL-1.     

成年SPF鸡胃肠道中芽胞杆菌的分离与部分生物学特性鉴定

目的　鉴定从SPF鸡分离出的芽胞杆菌的生物学特性。方法　从成年SPF鸡胃肠道的不同部位选择性分离 13株芽胞杆菌 ,并进行生物学特性检测。结果　 ( 1)所有菌株均能在含 5 %、10 %和 15 %NaCl的LB平板上生长 ,其中 11株能在含 6 %NaCl的LB平板上生长 ,7株能在含 7%NaCl的LB平板上生长。 ( 2 ) 2株能在pH 4 0的LB平板上生长 ,8株菌能在pH 5 0生长 ;所有菌株均能在pH 6 0～ 10生长 ,其中 12株能在pH 11生长 ,11株能在pH 12生长 ,而不能在pH 13～ 14生长。 ( 3)所有菌株在 75℃水浴中均能活存 2～ 5h ;11株能活存 10h ,9株能活存2 7h。所有菌株在 10 0℃水浴中加温 ,均能活存 0 5～ 2h ,其中 11株能活存长达 3h。 ( 4 )所有菌株在pH 4 0和pH11 0的LB培养基中均能存活半年以上 ,在pH 2 0和 13 0环境中能存活 1周和 3周以上。 ( 5 )菌体以沸石粉做载体常温保存 ,1年之内含量基本不变。 ( 6 )所有菌株均具有蜡样芽胞杆菌的特性。 ( 7)所有菌株对链霉素、丁胺卡那霉素、氯霉素、庆大霉素、红霉素均敏感 ,对青霉素、土霉素和黄胺药均有抗性。结论　所有菌株均有望成为制备微生态制剂的候选菌株。     

高产L-乳酸米根霉的选育

经过紫外诱变获得一株来根霉菌株R8416产L-乳酸高，产酸稳定．探讨了不同氮源、通气量、培养基配方、中和剂等发酵条件对其产L-乳酸的影响。试验结果表明．该菌株最适发酵培养基组成(％)：淀粉水解糖11，MgSO4、0.025．KH2PO4 0．06．ZnSO4 0．004．CaCO3 6．pH自然。8批平均产L-乳酸85．9g／L，对糖转化率80．3％，发酵周期50h，几乎不舍杂酸．L-乳酸旋光纯度与Purac公司乳酸相当。