不同蛋白胨培养仔猪副伤寒菌的效果比较

仔猪副伤寒病是由猪霍乱沙门氏菌引起的仔猪及育成猪发生的败血性急性肠炎。在壮龄猪多为隐性带菌或猪瘟继发感染,人也可因此菌发生食物中毒现象。此菌主要通过污染的饲料和饮水而传播,所引起的仔猪副伤寒病可用疫苗来进行预防。用该菌制备的疫苗在生产中存在着多种不稳定因素。现将不同种蛋白胨培养该菌的效果比较如下。1·材料牛肉蛋白胨、胰蛋白胨、精蛋白胨由北京某厂提供;鱼蛋白胨由上海某厂提供;牛肉汤由本厂提供;仔猪副伤寒标准菌株C500由中国兽医药品监察所提供。2·培养基配制将上述4种蛋白胨按1%~1·5%的比例加入牛肉汤,分别配制…     

猪瘟病毒生物反应器低血清培养及其免疫效力检测

目的利用生物反应器低血清培养基灌流培养猪瘟病毒,制备猪瘟病毒活疫苗,检测其免疫效价。方法对猪睾丸ST细胞进行低血清培养驯化,待ST细胞适应低血清培养后,接种至生物反应器,当细胞达到接种密度后,感染猪瘟兔化弱毒株(Classical Swine)毒种,培养96 h后,连续收液48 d,收获的病毒液经滤膜过滤后,制备猪瘟病毒活疫苗。将疫苗免疫健康新西兰家兔和28日龄健康仔猪,检测病毒滴度及免疫效价。结果用2%血清培养ST细胞,细胞接毒密度为5×106个/m L,病毒按3%~5%比例接种。利用上述条件培养的猪瘟病毒连续收获20次,病毒滴度均在7 500 RID/m L以上。免疫仔猪后第14天抗体效价达1∶128,未免疫仔猪抗体效价低于1∶16;攻毒后观察16 d,免疫仔猪无任何猪瘟临床表现,保护率100%,而未免疫仔猪在攻毒后第6天开始陆续死亡,死亡率100%。结论用低血清培养ST细胞制备的猪瘟病毒活疫苗具有较高的免疫效价,为猪瘟病毒疫苗生产工艺的改进奠定了基础。     

甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原酶联免疫方法的建立及初步应用

目的　采用甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原单克隆抗体 ,建立检测甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原ELISA双抗体夹心法。方法　采用纯化的甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原 ,制备 3株鞭毛抗原单克隆抗体细胞 (2C8、2E6和 5D7)。应用免疫印迹试验、交叉反应试验及表位分析进行特异性鉴定。结果　 3株单抗细胞与甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原及甲型副伤寒杆菌发生免疫反应 ,与伤寒、乙、丙型副伤寒杆菌及部分沙门氏菌、大肠杆菌无交叉反应。选用其中 2株单抗细胞建立了ELISA双抗体夹心法。检测 163份献血员和 65份发热待查患者血清标本均为阴性 ,15份血培养阳性的甲型副伤寒患者血清标本有 14份为阳性。结论　可直接用单克隆抗体进行检测 ,具有简便、快速等特点     

甲型副伤寒细菌单克隆抗体的制备及其初步应用

目的制备甲型副伤寒特异性多糖(O-specific polysaccharide,O-SP)单克隆抗体,建立鉴定甲型副伤寒沙门血清型细菌的全菌体ELISA和O-SP的竞争ELISA定量检测方法。方法用甲型副伤寒全菌体免疫小鼠,通过常规方法融合,以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)为载体偶联的O-SP为筛选检测抗原,间接ELISA法筛选分泌抗甲型副伤寒O-SP的特异性抗体杂交瘤细胞株;分别以甲型和乙型副伤寒的O-SP-TT及伤寒Vi-TT为包被抗原,检测制备的单克隆抗体与不同血清型细菌多糖的交叉反应;以不同沙门菌菌体为包被抗原,用制备的1株甲型副伤寒O-SP特异性单克隆抗体进行菌体间接ELISA,检测细菌血清型;用该株单克隆抗体为竞争抗体,建立定量检测样品中O-SP的竞争ELISA方法。结果筛选出6株分泌抗甲型副伤寒O-SP抗体的杂交瘤阳性细胞株;其中2株仅与甲型副伤寒O-SP呈特异性反应,其余4株与乙型副伤寒O-SP呈交叉反应;用其中1株单克隆抗体进行的菌体间接ELISA显示,该株单克隆抗体仅与甲型副伤寒沙门菌反应,而不与伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和肠炎沙门菌反应;竞争ELISA定量检测O-SP的检测范围在0.4~0.003 2μg/ml最准确。结论制备的特异性抗甲型副伤寒O-SP的单克隆抗体可用于甲型副伤寒细菌血清型快速鉴定和O-SP的竞争ELISA定量检测。     

仔猪超免过敏性休克

1994年5月16日,国营正阳种猪场繁殖二场实行猪瘟疫苗超前免疫。从5月16日至8月2日超免的43窝392头仔猪全部发生过敏性休克,经抢救全部治愈,现报告于后。 一、方法     

甲型副伤寒沙门菌抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及初步应用

目的建立甲型副伤寒沙门菌抗体间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法以甲型副伤寒沙门菌体脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为包被抗原,HRP标记的羊抗小鼠IgG作为二抗,TMB作为显色剂,建立检测甲型副伤寒沙门菌抗体的间接ELISA法,优化间接ELISA法的试验条件,并进行验证。取2批甲型副伤寒结合物原液,分别经NIH小鼠大腿内侧皮下各免疫3次,间隔14 d,第2、3次免疫后7 d采血,按建立的间接ELISA法检测血清中甲型副伤寒沙门菌抗体水平,计算抗体阳转率。结果抗原的最适包被浓度为2μg/ml,血清最适稀释倍数为1∶80,酶标二抗的最适稀释比例为1∶6 000;包被抗原与血清的最适反应时间为2 h,血清与酶标二抗的最适反应时间为1 h,封闭液室温下最适封闭时间为2 h。用建立的方法检测20只小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清,血清稀释500倍阳性检出率仍不低于80%;检测小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清的试验内和试验间变异系数分别为4.6%和7.5%,检测阴性血清样品的试验内和试验间变异系数分别为9.4%和13.9%,均低于15%;检测小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清和甲型副伤寒结合物原液免疫阳性血清的结果为阳性,检测乙型副伤寒结合物小鼠免疫阳性血清、伤寒Vi多糖结合物小鼠免疫阳性血清及阴性血清的结果为阴性。两批甲型副伤寒结合物原液免疫小鼠在第2针免疫后7 d的血清阳转率均为10%,第3针免疫后7 d的血清阳转率均为100%。结论建立的检测甲型副伤寒沙门菌抗体的间接ELISA法灵敏度较高,精密性良好,特异性较强,可用于评价甲型副伤寒结合疫苗的免疫原性。     

甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体的制备及其初步应用

目的制备甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,并对其进行鉴定及初步应用。方法用甲醛灭活的甲型副伤寒沙门菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选出稳定分泌甲型副伤寒沙门菌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对克隆纯化后的阳性细胞扩大培养后,免疫BALB/c小鼠,收获腹水,间接ELISA法检测抗体效价,并进行Ig类和亚类鉴定;腹水经辛酸-硫酸铵盐析法纯化后,采用间接ELISA法、玻片凝集试验、SDSPAGE法、免疫扩散试验进行检测。将纯化后的2株单克隆抗体用于双抗体夹心ELISA法的建立,并用自制配对抗体检测甲型副伤寒患者血浆、乙型副伤寒患者血浆、伤寒患者血浆和正常人血浆。结果共筛选出2株持续分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1H4和2A9,腹水抗体效价为1∶10~7和1∶10~6,分别为IgG_1和Ig G_3亚类,轻链均为κ型。纯化后的单克隆抗体1H4、2A9效价分别为1∶10~7和1∶10~3,1H4纯度大于85%,2A9纯度小于60%。2株单克隆抗体与甲型副伤寒沙门菌50503、50973可产生凝集反应,与伤寒沙门菌50096不产生反应;1H4在稀释度为1∶8时可与甲型副伤寒沙门菌菌体特异多糖(organism specific polysaccharide,OSP)产生凝集反应,而2A9在每个稀释度与OSP均不发生反应。将1H4和2A9用于双抗体夹心ELISA检测法建立,确定1H4/HRP-2A9的组合为最佳配对,用该配对抗体检测阳性样本检出率为100%,正常人血浆样本检出率为0。结论获得2株甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,可用于甲型副伤寒沙门菌的快速鉴定。     

伤寒甲型副伤寒结合疫苗质量标准的建立

目的建立国产伤寒甲型副伤寒结合疫苗的质量控制标准。方法参照《中国药典》三、四部(2015版)、《预防用疫苗临床前研究技术指导原则》、《结合疫苗质量控制和临床研究技术指导原则》及《世界卫生组织生物制品规程续编Ⅱ》(1995年版)等中的相关原则及方法,对4批国产伤寒甲型副伤寒结合疫苗的各项质量指标进行检测。结果 4批国产伤寒甲型副伤寒结合疫苗的各项质量检测指标均符合国家拟定的质量标准。结论建立的国产伤寒甲型副伤寒结合疫苗的质量控制标准适用于该疫苗工艺的质量控制。     

一起由丙型副伤寒沙门菌引起的食物中毒检测分析

目的快速查找食物中毒原因。方法根据临床表现、流行病学调查制定实验室检测项目并作出检测。结果从剩余食物、患者肛拭及粪便中检出丙型副伤寒沙门菌。结论由实验室检测得知,该起食物中毒事件是由丙型副伤寒沙门菌引起。     

广西流行的猪瘟病毒株E2基因序列测定及分析

目的对广西流行的猪瘟病毒E2基因进行序列测定及分析。方法应用PCR对15株猪瘟病毒E2基因进行扩增、克隆及测序,利用DNAstar分析软件对所测定的15株毒株与兔化弱毒(HCLV)、石门(Shimen)毒株的相应基因片段进行同源性分析。结果得到长度为1092nt猪瘟病毒E2基因,编码364个氨基酸残基的目的基因片段。广西株与HCLV、Shimen株的核苷酸同源性分别为81.5%～82.8%和82.8%～84.3%,推导的氨基酸同源性分别为87.1%～88.8%和88.5%～89.9%,广西毒株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为92.3%～99.9%和94.8%～100%。广西15株猪瘟病毒E2蛋白上的全部半胱氨酸(Cys)位点均未改变,推测其E2蛋白的抗原结构保持很高的稳定性。但广西毒株中与特定单克隆抗体结合的724、725、729、734和738位的氨基酸发生了变异,这些变异可能导致不完全免疫保护。把所测定的广西15株与国内外已发表的19株病毒相应序列进行比较,建立系统发育树,所比较的34株猪瘟病毒被分为两个群,广西毒株皆属于基因群Ⅱ。结论成功进行了广西流行猪瘟病毒E2基因序列分析,为进一步探讨猪瘟病毒E2蛋白的抗原结构提供了依据。     

不同菌种卡介苗人体免疫应答比较

我们于1983～1991年,分别用六株菌种制备的六种试制苗和全国五个生物制品研究所生产的5种成品苗,在杭州市、大连市和辽宁省3个点,对17524名新生儿接种,分别于接种后不同时间用PPD作皮肤试验进行免疫反应观察。结果表明,试制苗大连点12周的阳性率以上海株苗、巴西株苗为高,北京株苗为低;5年持续阳性率以上海株苗为最高,北京株苗为最低。在杭州点,以上海株苗和日本株苗为最高,亦以北京苗为低。成品苗杭州点和辽宁点12周的阳性率以上海所苗为最高,兰州所苗为最低。综合评议均以上海所苗为优。其淋巴结化脓仅出现在活菌数较高的制品中,发生率不超过1‰。     

浙江金华地区猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫程序的筛选及推广应用

目的筛选现阶段浙江金华地区猪场常用的3种猪繁殖与呼吸综合征疫苗[高致病性蓝耳弱毒活疫苗(JXA1-R株)、弱毒活疫苗(CH-1R株)和灭活疫苗(NVDC-JXA1株)]的免疫程序,并进行推广应用。方法采集免疫了3种疫苗的38个不同规模猪场猪血清,ELISA法检测蓝耳抗体水平,记录主要的免疫程序(包括猪瘟、蓝耳和口蹄疫)。按筛选出的不同规模猪场适合的蓝耳疫苗免疫程序,选择6家应用不同猪蓝耳病疫苗的猪场进行效果验证与示范,根据这些猪场的养殖规模及免疫情况,进行疫苗或免疫程序的调整,免疫后28 d采血,分离血清,检测蓝耳抗体水平。结果蓝耳、猪瘟和口蹄疫的免疫程序较普遍,并能获得较高的蓝耳抗体水平和抗体合格率,蓝耳疫苗免疫时间一般为15或21日龄。其中高致病性毒株JXA1-R在金华地区的不同规模猪场使用最为广泛,特别是小规模和大规模猪场分别占61%和55%,临床应用以猪瘟-口蹄疫-蓝耳和蓝耳-猪瘟-口蹄疫两种免疫程序为主,且免疫时间分别为65日龄和14日龄,猪群可获得最高的蓝耳抗体水平和抗体合格率。蓝耳活疫苗(CH-1R株)在小、中、大规模猪场的使用率分别达15%、10%和18%,免疫程序为蓝耳、猪瘟和口蹄疫,且21日龄免疫蓝耳疫苗猪群可获得更高的蓝耳抗体水平和抗体合格率。猪蓝耳灭活疫苗(NVDC-JXA1株)也以蓝耳、猪瘟和口蹄疫免疫程序为主,其在小、中、大规模猪场的使用率分别达2%、10%和0%,且在15日龄免疫比在21日龄免疫可获得更高的蓝耳抗体水平。验证效果显示,6家猪场的抗体水平整体均有所提高,抗体效价至少提高12%,抗体合格率平均提高15%。结论大规模猪场采用蓝耳-猪瘟-口蹄疫免疫程序可获得更高的蓝耳抗体水平,中等规模猪场采用蓝耳-猪瘟-口蹄疫,而小规模猪场采用猪瘟-口蹄疫-蓝耳免疫程序可达到更好的免疫效果。     

壳聚糖纳米粒在甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白疫苗中的应用

目的探讨壳聚糖(chitosan,CS)纳米粒作为甲型副伤寒沙门菌重组外膜蛋白NmpC和PagC的佐剂对小鼠的免疫效果。方法采用离子交联法将甲型副伤寒沙门菌重组外膜蛋白NmpC和PagC与CS结合制成CS纳米粒,扫描电镜观察纳米粒外观,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径和多分散系数,BCA法测定其包封率。将CS纳米粒经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG、IgG_1和IgG_(2a)水平。结果载蛋白CS纳米粒粒径约为300 nm,包封率达85%以上。NmpC和PagC的CS免疫组小鼠血清IgG抗体滴度远高于铝佐剂组,产生的IgG_1和IgG_(2a)抗体滴度也均高于相应的铝佐剂免疫组,且差异均有统计学意义(P0.05);IgG_1和IgG_(2a)之间差异无统计学意义(P0.05)。结论 CS纳米粒作为新型疫苗佐剂可用于甲型副伤寒蛋白疫苗的研究。     

朗盛卫可消毒剂能有效防控非洲猪瘟确保生物安全

正中国于8月3日首次报道了非洲猪瘟疫情的暴发,目前这一高度传染性疾病的威胁日益加剧,可能影响日本和朝鲜半岛。为此,朗盛集团为养猪场提供经过检验的广谱消毒剂卫可,用于生物安全防控措施。英国皮尔布赖特动物卫生研究所进行的杀灭非洲猪瘟(ASF)的独立试验表明,即使在1∶800的稀释比例下,卫可消毒剂对非洲猪瘟仍然有效。测试方法涵盖了在有机物干扰和低温(低至4℃)条件下的试     

牲血素药效试验

刚出生仔猪,体内含铁量约15毫克左右,每日消耗铁约为7～10毫克。然而仔猪从母乳中每日获得的铁量仅1毫克(约1升乳)。如没补充铁质,就会出现缺铁性贫血症,从而机体抵抗力下降,引起多种疾病,不但影响仔猪生长发育,还会造成僵猪,甚至大批死亡。故贫血和疾病是仔猪成活率低、窝重不高的一个重要因素。     

丹麦_2株卡介苗人体反应及效果观察

成都、兰州和长春生物制品研究所分别用上海丹麦2株卡介苗菌种在各所各生产3批卡介苗，并以上海所卡介苗为对照，同时分别在北京、杭州和广州3地区，对新生儿作接种后的异常反应和免疫效果比较。各地观察人数分别为9016、7240和9986人；阳转率分别为：成都苗95．6％～99．8％；兰州苗97．2％～98．9％；长春苗99．2％～100％；上海苗95.5％～99．1％；淋巴结总反应率为0．138％；分别为长春苗0．216％，成都苗0．241％，兰州苗0，上海苗0.075％。其中长春苗出现淋巴结化脓5例（0．059％），成都苗4例（0．085％）。广东省生物制品所也自制了丹麦2株卡介苗在广州地区作了观察，结果亦相近。     

超高压处理对青稞苗汁品质的影响

以昆仑十四号青稞苗为原料,探究超高压处理对青稞苗汁中多酚氧化酶(PPO)的影响,以保压压力、保压时间及pH为单因素,采用响应面法优化工艺过程,并确定多酚氧化酶最佳钝化条件为:保压压力为500 MPa、保压时间为25 min、pH为4.0,此时PPO残留酶活性为18.88%。通过对比超高压处理前后青稞苗汁理化指标变化,探究了保压压力和保压时间对青稞苗汁品质的影响。结果表明,随着压力增大和保压时间延长,微生物含量显著降低,达到国家要求的果蔬汁卫生标准; pH变化不显著;总花色苷、总黄酮、总酚含量比未超高压组含量增加显著,说明超高压处理能更好地保持青稞苗汁的品质。     

血源乙肝疫苗与基因工程乙肝疫苗联合免疫的效果观察

应用血源乙肝疫苗和基因工程乙肝疫苗,对婴幼儿和小学生按0、1、6免疫程序进行联合免疫的效果观察。结果第1、2针用血源苗,第3外用基因苗免疫的阳转率（82．9％）明显低于3针均用血源苗的阳转率;第1、2针用血源苗,第3针用基因苗与3针均用基因苗免疫的阳转率均达100％;用血源苗基础免疫,5年后用基因苗加强免疫的阳转率（98．2％）与用血源苗加强免疫的阳转率（100％）差异无显著意义,但加强免疫后的GMT值,基因苗（515．2）明显高于血源苗（31．6）。表明基因苗同样具有良好的免疫效果。     

用腐植酸钠防治仔猪黄白痢病的试验

温宿县食品公司猪场,每年仔猪拉痢发病率均在50％,断奶前因仔猪拉痢死亡的约占20％。如去年春秋两季计产仔822头,因拉痢死亡的约占400多头,约占50％。地区站未对拉黄、白痢的仔猪进行过病原分离。我们认为仔猪拉痢是初生仔猪由于肠道的条件性细菌,     

甲基立枯磷防治棉花苗病试验

棉花苗病是影响棉花早播、齐苗和棉苗素质的主要障碍因子。防治棉花苗病以往主要是以多菌灵、敌克松、稻脚青拌种或苗期喷雾。稻脚青对棉花苗病虽有较好的防治效果,但该药残毒高,属于限制和停止使用之列。多菌灵、