4个南方山羊品种BMP15和GDF9基因的RFLP分析

以已发现的绵羊高繁殖性能主基因FecXB、FecGH作为候选基因,以南方的4个山羊品种大足黑山羊类群、金堂黑山羊、南江黄羊、川东白山羊为研究对象,采用PCR-RFLP方法分析这两个候选基因在山羊中的多态性.结果发现.在这4个山羊品种(种群)中所有个体均没有检测到FecxB基因和FecGH基因的存在,所有个体均为野生纯合型,表明这两个候选基因位点对所研究的4个山羊品种(种群)的繁殖性能没有影响.     

4个南方山羊品种BMP15和GDF9基因的RFLP分析

以已发现的绵羊高繁殖性能主基因FecXB、FecGH"作为候选基因,以南方的4个山羊品种大足黑山羊类群、金堂黑山羊、南江黄羊、川东白山羊为研究对象,采用PCR-RFLP方法分析这两个候选基因在山羊中的多态性.结果发现,在这4个山羊品种(种群)中所有个体均没有检测到FecXB基因和FecGH"基因的存在,所有个体均为野生纯合型,表明这两个候选基因位点对所研究的4个山羊品种(种群)的繁殖性能没有影响.     

利用mtDNA Cytb基因分析湘黔川五个山羊品种系统发育

试验对四川板角山羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、贵州麻羊及湖南马头山羊5个山羊品种,共计69个个体的Cytb基因片段进行测序分析比较。结果显示,69个山羊Cytb基因序列均为长1140bp的同源基因,共发现17个变异位点,观察到14种单倍型;5个山羊品种的群体遗传多样性在0．442—0．889之间,核苷酸多样度从0．00145—0．00253。表明5个山羊遗传多样性属于中等;5个山羊品种可分为2大类群,即：贵州黑山羊、贵州麻羊、贵州白山羊和湖南马头山羊4个品种为一类,四川板桥山羊1个品种为另一类。     

山东境内五个山羊种群生化遗传多态性研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE），对山东省境内山羊种群的血液生化遗传标记多态性进行分析。结果表明，所测5个山羊品种中，Tf、Akp及EsⅠ基因座均表现出多态性，Hb和EsⅡ基因座仅分别在崂山奶山羊和莱芜黑山羊品种中表现出多态性，Amy未表现出多态性；平均杂合度为0．2876，基因纯合系数在0．6以上，群体的遗传分化系数为0．02614，说明这些山羊群体的遗传变异较低，其97．386％来自群体内遗传多态现象。基于31个多态位点基因频率的系统发育分析证明，带有共同遗传基础的济宁青山羊、鲁北白山羊和崂山奶山羊遗传距离较近，引进的南非波尔山羊与4个地方山羊品种遗传距离最远。     

成都麻羊乳上皮黏蛋白MUC1的遗传多态性研究

采用SDS-PAGE研究成都麻羊乳上皮黏蛋白MUC1的遗传多态性,并以金堂黑山羊、乐至黑山羊、自贡黑山羊、藏山羊作对照进行比较分析。结果表明:成都麻羊与对照山羊乳MUC1的多态性丰富,成都麻羊有7种基因型、5个等位基因优势基因为C、D、E,金堂黑山羊7种基因型、6个等位基因优势基因为B、C、D,乐至黑山羊6种基因型、6个等位基因优势基因为B、C、D,自贡黑山羊5种基因型、5个等位基因优势基因为A、C、D,藏山羊3种基因型、3个等位基因优势基因为C、D。乳MUC1的基因型、等位基因的分布品种间有差异;根据乳MUC1等位基因频率对供试山羊品种进行聚类分析,成都麻羊与金堂黑山羊的遗传距离最小(D=0.2507)先聚为一类,再依次与乐至黑山羊(D=0.2831)、自贡黑山羊(D=0.3721)、藏山羊(D=0.4752)聚为一大类,结果较好的反映了成都麻羊与对照山羊品种间的亲缘关系。     

山东境内五个山羊种群生化遗传多态性研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE),对山东省境内山羊种群的血液生化遗传标记多态性进行分析。结果表明,所测5个山羊品种中,Tf、Akp及EsⅠ基因座均表现出多态性,Hb和EsⅡ基因座仅分别在崂山奶山羊和莱芜黑山羊品种中表现出多态性,Amy未表现出多态性;平均杂合度为0.2876,基因纯合系数在0.6以上,群体的遗传分化系数为0.02614,说明这些山羊群体的遗传变异较低,其97.386%来自群体内遗传多态现象。基于3个多态位点基因频率的系统发育分析证明,带有共同遗传基础的济宁青山羊、鲁北白山羊和崂山奶山羊遗传距离较近,引进的南非波尔山羊与4个地方山羊品种遗传距离最远。     

新批准的西南地区5个山羊遗传资源mtDNA D-loop遗传多样性与亲缘关系研究

为了研究新批准的西南地区5个山羊遗传资源的遗传多样性及其与其他羊种的亲缘关系,试验利用设计的引物对山羊的mtDNA D-loop序列进行了PCR扩增和测序,对序列数据进行了核苷酸多样性、单倍型和亲缘关系分析。结果表明:在西南地区新批准的5个山羊遗传资源中,大足黑山羊、黔北麻羊和酉州乌羊平均多态位点数比较接近,均高于渝东黑山羊和贵州黑山羊;大足黑山羊、黔北麻羊和酉州乌羊遗传多样性高于贵州黑山羊和渝东黑山羊;从亲缘关系来看,渝东黑山羊与板角山羊和南江黄羊亲缘关系较近,酉州乌羊与板角山羊亲缘关系最近,贵州3个羊种(贵州白山羊、贵州黑山羊和黔北麻羊)遗传距离近,大足黑山羊与乐至黑山羊遗传距离较近。说明渝东黑山羊和贵州黑山羊遗传多样性较低,需要加强遗传资源的保护和提纯;新批准的5个山羊遗传资源的遗传距离和亲缘关系与其所处的地理位置存在密切关系。     

川渝部分山羊品种(类群)遗传多样性微卫星标记研究

为分析川渝山羊品种(类群)的遗传多样性和系统发生关系,利用30个微卫星标记,对6个山羊品种(类群)进行分析。结果表明:金堂黑山羊遗传多样性最丰富,群体多态信息含量、平均杂合度和有效等位基因数分别为0.777、0.819和6.54;大足黑山羊各项指标最低,分别为0.736、0.787和5.57。对6个品种(类群)聚类分析表明,金堂黑山羊与南江黄羊的首先聚类在一起,然后依次与板角山羊、川东白山羊、大足黑山羊和波尔山羊聚类。各山羊品种(类群)的聚类关系与其来源、育成史及地理分布基本一致。     

山羊生长分化因子9基因FecTT突变检测

本研究采用PCR-RFLP方法检测生长分化因子9(growth differentiation factor 9, GDF9)基因FecTT突变在济宁青山羊、贵州白山羊、大足黑山羊、陕南白山羊、古蔺马羊、马头山羊、波尔山羊、成都麻羊、萨能奶山羊、文登奶山羊、板角山羊、金堂黑山羊、关中奶山羊、川东白山羊、安哥拉山羊、辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊等17个山羊品种中的分布。结果表明,在17个山羊品种中都未检测到FecTT突变,提示,GDF9基因影响Thoka绵羊高繁殖力的FecTT突变对以上17个山羊品种的繁殖力均没有显著影响。     

骨形态发生蛋白15基因（BMP15）多态性与山羊繁殖性能的研究

以贵州黑山羊、酉州乌羊和努比亚山羊3个品种为实验群体,采用PCR产物直接测序技术检测BMP15基因的多态性,并探讨其多态性对山羊繁殖性状的影响,为山羊繁殖力的标记辅助选择和育种提供理论依据。利用在线软件预测BMP15蛋白质二级结构和三级结构;利用Excel计算基因频率、基因型频率;利用POPGEN软件计算纯合度、杂合度、有效等位基因数和多态信息含量,并对HardyWeinberg平衡状态进行分析;用SPSS软件对3个山羊群体BMP15基因多态性与产仔数进行相关性分析。结果显示:BMP15基因外显子中检测到1个SNP位点,BMP15基因在外显子2处存在突变位点C6260G,3个山羊群体在此突变位点处均存在3种基因型CC、GC、GG;贵州黑山羊、酉州乌羊和努比亚山羊χ2检验均未达到显著水平(P0.05),处于Hardy-Weinberg平衡状态,贵州黑山羊和努比亚山羊表现为中度多态,酉州乌羊表现为低度多态;GG基因型个体在贵州黑山羊群体中产羔数显著高于CC基因型个体和GC基因型个体(P0.05),GC基因型个体在努比亚山羊中的产羔数显著高于CC基因型个体和GG基因型个体(P0.05),3种基因型在酉州乌羊中差异均不显著(P0.05)。该研究结果初步表明山羊BMP15基因的突变与其繁殖性能有关,可能是影响山羊繁殖率的一个因素。     

促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因多态性及其与山羊产羔数的相关性分析

本研究采用候选基因法对与繁殖性能有关的遗传标记进行筛选,旨在为山羊高产仔数的标记辅助选择提供确切的遗传依据。参考牛的促性腺激素释放激素受体(Gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因序列设计4对引物,采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测GnRHR基因在波尔山羊以及我国西南地区9个地方山羊品种中的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP),同时在川东白山羊、古蔺马羊和贵州白山羊3个群体中研究该基因多态性与山羊产仔数之间的相关性。结果显示,4对引物中只有引物P1扩增片段检测出多态性。对于P1的扩增片段,在不同的山羊品种中检测到AA、GG和AG 3种基因型,测序分析表明GG与AA型相比有一处单碱基突变(154G→A)。AA基因型个体在3个群体中产羔数最小二乘均值都显著高于GG和AG基因型个体(P<0.05),GA基因型个体在古蔺马羊中的产羔数显著高于GG型个体(P<0.05),而在其它2个品种中差异不显著(P>0.05)。本研究结果初步表明山羊GnRHR基因的突变与其繁殖性能有关,可能是影响山羊繁殖率的一个因素。     

3个山羊品种KAP6.2和KAP7基因的PCR-SSCP分析

采用PCR-SSCP法对３个山羊品种角蛋白辅助蛋白（KAP6.2,KAP7）进行了多态性研究。结果显示,３个品种中KAP7均未出现多态,而KAP6.2均出现了３种带型：AA、BB和AB。Hardy-Weinberg分析表明辽 苛高代杂种山羊和黎城大青羊未达到平衡状态,辽宁绒山羊达到了平衡。测序结果显示,和GenBank登陆序列相比,AA和BB均发生了碱基变化。其中AA型出现了以下变异：107 bp(A-G),196 bp(C-T),199 bp(T-G),252 bp(A-T),265 bp(C-T),291 bp(A-G),292 bp(T-C),345 bp(T-G);BB型出现了以下变异：164 bp(T-C),194 bp(T-C),199 bp(T-G),201 bp(C-G),233 bp(A-G),275 bp(A-G),299 bp(A-G),309 bp(G-C),327 bp(A-G),352 bp(G-T)。分析表明AA型和BB型变异均造成了氨基酸序列的变化。     

山羊GnRHR基因部分序列多态性及其与产羔数的关联性分析

采用聚合酶链式反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）技术,用3对引物鉴定了黄淮山羊和波尔山羊促性腺激素释放激素受体（GnRHR）基因外显子2和外显子1部分序列的多态性,并对黄淮山羊Gn—RHR基因多态性与产羔数的关联性进行了分析。结果表明,引物P1、P3扩增片段在2种山羊中均只,检测到1种基因型,不存在多态性;而引物P2扩增片段,2种山羊类型均检测到AA、AB和BB基因型。黄淮山羊AA、AB和BB基因型频率分别为0．725、0．200和0．075;波尔山羊AA、AB和BB基因型频率分别为0．765、0．206和0．029。测序分析发现AA型基因与BB型基因相比在58bp处发生A—C碱基突变,该突变导致编码氨基酸由赖氨酸改变为谷氨酰胺。在黄淮山羊中,BB型比AA型个体平均产羔数多0．66只（P〈0．05）。因此,山羊GnRHR基因第1外显子具有多态性;GnRHR基因可能是控制黄淮山羊多胎性能的一个主效基因或是与之存在紧密连锁的一个遗传标记。     

Exploring polymorphisms and their effects on reproductive traits of the INHA and INHβA genes in three goat breeds

In this study, we report the analysis of INHA and INHβA gene polymorphisms in 786 goats of three breeds: Xinong Saanen (SN), Guanzhong (GZ) and Boer (BG). We identified three new allelic variants: P1–C80G and/126G (GenBank accession no. HQ202573) in the three goat breeds and P2–C936T (GenBank accession no. HQ202572) in SN and GZ goat breeds. At P1 locus, AA, AB and BB genotypes were found in the three goat breeds. At P2 locus, CC and CT genotypes were found in SN and GZ goat breeds. After comparing genotype distribution within the three goat breeds, BG had conspicuous differences from SN and GZ (P < 0.001) at P2 locus. The SNP locus was in Hardy–Weinberg disequilibrium at P1 locus in the three goat breeds (P < 0.05). At P2 locus, the SNP locus was in Hardy–Weinberg disequilibrium in SN and GZ goat breeds (P < 0.05). Association of polymorphisms with litter size was done at P1 locus in the three goat breeds. The result showed that AA genotype had remarkable litter size at P1 locus in the three goat breeds (P < 0.05). Therefore, these results suggest that INHA gene is a strong candidate gene that affects litter size in goats.     

山羊品种遗传多样性的分析

利用6个微卫星标记对中西部7个山羊品种(陕南白山羊、陕北白绒山羊、西农萨能羊、关中奶山羊、太行山羊、黄淮山羊、伏牛山羊)共计322个个体进行了遗传多样性检测,并根据Nei氏遗传距离进行了聚类分析。结果表明:6个微卫星标记在这7个品种中存在高度多态性;陕北白绒山羊的遗传变异程度最大,平均杂合度和平均多态信息含量分别为:0.8401和0.8244;而关中奶山羊的遗传变异程度相对较小,平均杂合度和平均多态信息含量分别为:0.7990和0.7784。UPGMA聚类分析表明,黄淮山羊和伏牛山羊聚为一类,陕南白山羊,太行山羊,陕北白绒山羊依次加入,西农萨能羊和关中奶山羊作为一类最后加入。     

江苏地方山羊品种H-FABP基因的SNPs检测及群体遗传学分析

采用PCR-SSCP和DNA测序技术对2个江苏地方山羊品种的心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid binding protein,H-FABP)基因进行单核苷酸多态性(SNP)检测和群体遗传学分析。结果表明,在所扩增的片段中,仅在H-FABP基因外显子2的第132位检测到G/C碱基突变,形成GG和GC基因型,2个山羊群体均是纯合GG基因型占主导优势,且该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态;黄淮山羊群体的杂合度、有效等位基因数和多态信息含量指标均高于长江三角洲白山羊群体,表明其群体内的遗传变异程度相对较大、遗传多样性也更为丰富。     

3个山羊品种角蛋白辅助蛋白7基因的遗传多态性分析

本研究采用PCR-SSCP方法对陕北白绒山羊、太行黑山羊及南疆绒山羊的角蛋白辅助蛋白(keratin-associated proteins,KAP)7基因进行遗传多态性研究。结果显示,KAP7基因在3个山羊品种中有多态性,有AA和AB 2种基因型,AA基因型均为其优势基因型。测序结果发现,KAP7基因在129 bp处存在C→G的突变,突变的位置位于5'调控区。     

我国主要地方山羊品种随机扩增多态DNA研究

利用随机扩增多态DNA技术研究了我国主要地方山呼吸主部分国外品种共计23个山羊品种251个山羊个体的随机扩增多态DNA。结果表明：（1）总群体平均遗传多样性指数（Hsp)为0.7084,群体遗传分化指数为0.8583,山羊品种间平均遗传距离指数（AIGD）（0.0810－0.2044）明显大于品种内的AIGD（0.0444－0.1112),不同山羊品种的遗传多样性指数（Ho)除安哥拉山羊和承德无角山羊大于50％外,其它各品种均低于50％,上述结果说明所研究山羊群体不仅具有较为丰富的遗传多样性,而且山羊核基因组遗传变异主要存在于品种间,我国地方山羊品种间遗传分化比较明显。（2）中卫山羊（0.3410)和辽宁绒山羊（0.2589）的Ho值明显低于各品种的平均值（0.3881）;雷州山羊（0.0566）、中卫山羊（0.0564）和辽宁绒山羊（0.0444)的AIGD值也明显低于各群体的平均值（0.0749),说明辽宁绒山羊、中卫山羊和雷州山羊核基因组的遗传多样性相对其它品种来说较为贫乏,应作为重点保护对象。