巴马香猪类固醇激素急性调节蛋白(StAR)基因真核表达载体的构建及鉴定

本试验通过RT-PCR扩增巴马香猪StAR基因,分析其序列的结构特点并构建真核表达载体,为StAR基因在猪睾丸间质细胞中的超量表达研究奠定基础.根据NCBI中猪StAR基因序列设计并合成引物,以巴马香猪睾丸组织总RNA为模板进行RT-PCR,将所得目的基因与pEGFP-C1进行双酶切后连接构建真核表达载体pEGFP-C1-StAR.结果显示,连接到pSURE-T克隆载体上的目的片段测序结果为858碱基组成,编码含有285个氨基酸残基的蛋白质,与NCBI报道的StAR基因比对,核酸同源性在99.3％以上,并成功构建了重组载体pEGFP-C1-StAR.     

StAR蛋白与生殖

类固醇激素生物合成的调节机制,尤其是快速调节机制是近半个世纪研究的热点.StAR蛋白(steroidogemc acuteregulatory protein)在这一过程中发挥了重要作用.StAR蛋白首先由Clark等[1]从MA-10鼠间质肿瘤细胞中分离,其能在人、小鼠、大鼠、牛、绵羊和猪的卵巢、黄体、睾丸等类固醇合成组织中表达.     

类固醇合成急性调节蛋白的生物学特性及作用研究概况

类固醇合成急性调节蛋白(StAR)是胆固醇的一种转运蛋白,在类固醇激素合成过程中StAR作为限速酶起着特别关键的作用。类固醇激素合成主要在肾上腺、性腺和胎盘等组织中进行,对于维持正常生殖功能和机体内环境的稳定非常重要。有关StAR的发现和特性在以往的文献中已有报道,在此基础上,论文对StAR的生物学特征、作用机制及其与生殖疾病的关系等方面进行综述。     

HCG通过StAR蛋白快速调节睾酮的合成

以2~3周龄长白仔猪睾丸间质细胞为材料研究HCG对睾酮合成的快速调节作用。结果表明:(1)在2h内,对照组间质细胞分泌睾酮的量为(3.25±0.28)ng/mL,而HCG(浓度为50IU/mL)处理组睾酮的浓度为(8.79±0.54)ng/mL,增幅为4.54ng/mL,二者差异极显著(P<0.01);(2)在2h内,对照组细胞内cAMP的浓度为(13.13±1.12)pmol/mL,而处理组cAMP的浓度为(39.22±2.38)pmol/mL,二者之间差异极显著(P<0.01);(3)加入前体物后,胆固醇对照组睾酮浓度为(3.81±0.45)ng/mL,处理组睾酮浓度为(27.13±1.27)ng/mL,处理组睾酮的浓度明显高于对照(P<0.05),其它几种前体对照组与处理组差异不显著(P>0.05)。(4)在2h内,HCG增加了StAR蛋白和mRNA的表达。这表明在快速反应期,HCG通过促进StAR蛋白的表达,增强睾酮的生物合成。     

类固醇激素免疫的研究进展

本文总结了近年来动物类固醇激素免疫的研究成果,包括免疫的意义、原理和对生殖内分沁的影响,以及该领域的最新研究动向和存在的问题,为进一步的研究工作提供了参考和指导。     

类固醇合成相关酶在小鼠不同组织中的表达

利用RT-PCR和Western-blotting技术分析了胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、3β-羟甾脱氢酶（3β-HSD）、C17-20裂解酶（P450c17）、StAR mRNA和蛋白在成年昆明小白鼠心脏、脾、肝、肾中的表达.结果显示,StAR mRNA及其蛋白、P450scc mRNA在以上组织中均有表达;3β-HSD在肾中有较强的表达,在其他组织的表达较弱;P450c17在上述组织中无明显的表达,但在睾丸中有明显的表达.这表明,心脏、脾、肝、肾均具有合成类固醇的能力,但合成类固醇的类型存在一定的差异.     

固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)调控牛科物种脂合成的研究进展*

固醇调节元件结合蛋白(Sterol Regulatory Elemental Binding Protein ,SREBPs)是细胞核内调控脂代谢的重要转录因子,其在细胞核内通过结合下游靶基因调控区的顺式作用元件来参与转录过程,进而调控脂代谢,包括调控体脂的沉积和乳脂的合成。本文综述了SREBPs的结构与功能、SREBPs参与的生物学路径及SREBP1参与牛科物种体脂沉积和乳脂合成的研究进展,旨在为牛SREBPs的深入研究提供参考。     

类固醇激素受体与中性粒细胞功能的研究进展

"免疫抑制"一直是临床医学上关注的焦点,而内源性的雌激素、孕酮和糖皮质激素等主要的类固醇激素水平的剧烈变化被认为是导致PMN等免疫细胞功能障碍,进而诱发免疫抑制的原因。本文就类固醇激素受体介导类固醇激素对中性粒细胞功能影响的分子机制进行综述。     

促性腺激素释放激素(GnRH)结构及调控的研究进展

促性腺激素释放激素(Gn RH)最初被认为是一种下丘脑神经肽,但是越来越多的研究发现该激素具有多重功能,如参与类固醇生成、细胞增殖、受精、粘连细胞外基质和细胞迁移等生理功能的调节,并在动物的生长发育、生殖行为、妊娠、分娩等生命活动中起着至关重要的作用。主要对Gn RH的结构特点及其调控进行了综述。     

野生动物尿和粪中类固醇激素的研究进展

概述了野生动物尿和粪中类固醇激素的测定方法,血、尿与粪样中类固醇浓度的相关性,尿和粪中类固醇激素监测在野生动物卵巢功能检查和妊娠诊断上的应用及其应用前景与存在的问题。     

营养基因组学、瘤胃衍生生物活性脂肪酸及乳脂合成调节的研究进展

乳腺中乳脂合成的研究一直是热门的领域,生物活性脂肪酸在脂类合成调节中有显著的作用。生化还原理论表明,日粮引起的奶牛乳脂低下(MFD)是由于瘤胃的生化还原产生的特异脂肪酸使得乳腺乳脂合成受到抑制而引起的。影响乳脂合成最重要的脂肪酸是t10,c12CLA,它的作用非常具有特征性,包括效应关系的剂量效应。在MFD期,脂肪的生产能力及乳腺关键的脂肪生成调节基因都是协同下调的。研究结果已经证明,在反刍动物和啮齿类动物中SREBF1及Spot 14是脂肪生产信号通路中的生化还原中间应答物。MFD及瘤胃衍生特定生物活性脂肪酸对其的调节是现在动物营养研究中营养基因组学的一个成功的例子,并在动物生产中有潜在的应用。     

催乳素对促性腺激素诱导的鸡卵泡膜细胞类固醇激素合成的抑制作用

利用无血清培养的鸡卵泡（Ｆ３）膜细胞模型研究了催乳素（ＰＲＬ）对卵泡膜细胞类固醇激素合成的作用。用不同剂量的ＰＲＬ、黄体生成素（ＬＨ）及促卵泡激素（ＦＳＨ）分别或共同处理在无血清培养液中培养了４８ｈ的鸡卵泡膜细胞，２４ｈ后收集培养液，测定培养液中睾酮（Ｔ）和雌二醇（Ｅ２）含量。结果表明，ＬＨ能明显刺激膜细胞合成Ｔ和Ｅ２，并具有剂量依赖关系；ＰＲＬ单独对膜细胞类固醇合成无明显作用，但可抑制ＬＨ诱导的Ｔ和Ｅ２合成，以及ＦＳＨ刺激的Ｅ２合成。本研究证明ＰＲＬ能作用于鸡卵泡膜细胞，并能抑制促性腺激素ＬＨ和ＦＳＨ诱导的类固醇激素的合成     

小肽转运蛋白(PepT1)的活性调节

小肽是蛋白质在动物体内消化的主要产物,而位于小肠刷状缘膜上的小肽转运蛋白(PepT1)在小肽的吸收过程中发挥着重要作用,因此PepT1的活性直接影响小肽的吸收。文中主要介绍底物、营养不良、激素、昼夜节律和生长发育对PepT1的活性调节。     

类固醇激素对牛输卵管上皮细胞分泌的调节及其分泌物对小鼠胚胎发育的影响

模拟发情期（０～６ｄ）母牛外周血浆雌激素和孕酮变化水平，在添加相应水平１７β－雌二醇和孕酮的ＴＣＭ－１９９液中，培养间情期牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）。５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＢＯＥＣ分泌物，发现上皮细胞受类固醇激素作用分泌的２类蛋白质分子量与自然发情期（０～６ｄ）分泌的特异蛋白相似。证明类固醇激素可以调节和启动间情期ＢＯＥＣ的分泌活动。当雌二醇浓度高达１ｍｇ／Ｌ时，即使不加孕酮，ＢＯＥＣ仍能分泌这２类蛋白质。在培养小鼠原核胚的ＣＺＢ培养液内添加牛输卵管上皮细胞分泌蛋白（ＢＯＥＰ），与添加间情期牛输卵管冲洗蛋白（ＢＯＰ）和小牛输卵管冲洗蛋白（ＣＯＰ）相比，能显著提高通过２－细胞阶段胚胎的百分率和桑囊形成率，表明ＢＯＥＰ能较好地促进胚胎的分裂和发育。但ＢＯＥＰ组的桑囊形成率显著低于对照组，表明ＢＯＥＰ中可能缺少某些低于Ｍｒ１．０×１０４的蛋白因子的协调作用，以及含有Ｍｒ３．０×１０４～５．６×１０４的分泌蛋白的抑制作用而阻碍胚胎分裂与发育。     

生长因子、类固醇激素及儿茶酚胺对动物的免疫调控作用

1生长因子1．1胰岛素样生长因子胰岛素样生长因子（IGF）包括IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ,是一类广谱的促生长因子,化学结构与胰岛素类似,为同源的单链多肽。生长激素（GH）的许多生理学作用是间接的,期间主要经由IGF—Ⅰ介导。IGF—Ⅰ的作用由一系列至少6种结合蛋白质所调节。     

α-亚麻酸对猪颗粒细胞胆固醇合成、类固醇激素合成和凋亡的影响

本试验旨在探究α-亚麻酸(ALA)对猪颗粒细胞(GCs)胆固醇合成、类固醇激素合成和凋亡的影响。试验收集150日龄健康母猪卵巢GCs,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot和流式细胞术探究ALA对猪GCs胆固醇合成、类固醇激素分泌及其凋亡的影响。结果表明：1)50μmol/L ALA处理极显著抑制了雌二醇(E₂)的合成(P<0.01),但对孕酮(P₄)的合成没有显著影响(P>0.05);2)50μmol/L ALA处理显著下调了胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1)和3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著下调了CYP11A1和类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)的蛋白相对表达量(P<0.05);3)50μmol/L ALA处理显著下调了关键胆固醇合成基因3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、清道夫受体B类成员1 (SCARB1)和胆固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)的mRNA相对表达量(P<0....     

家禽食欲的外周调节激素研究进展

家禽采食量受多方面因素调控,除了下丘脑这个中枢组织外,外周激素的作用越来越引起人们的注意.这些影响家禽采食量的肽类和类固醇类激素主要有:来自脂肪细胞的瘦素、脂联素和白细胞介素;来自胃肠道的胆囊收缩素、肽YY、生长素、肥胖抑制素、胰高血糖素样肽-1和胃泌酸调节素;来自胰腺的胰岛素和胰多肽.在脂肪组织对食欲的调控上,瘦素起关键作用,其它脂肪信号起辅助作用;而某些个别的胃肠肽(能够)单独调控食欲的证据并不充分,但是肠道信号和脂肪衍生信号形成一个综合系统,共同作用于食物的摄取和终止.本文对这些外周激素在食欲调控中的作用进行总结,对生产实践有一定指导意义.     

免疫增强类神经激素的研究进展(一)

1催乳素(prolactin,PRL)催乳素(PRL)能促进细胞免疫和体液免疫,是生物学作用最多的神经内分泌激素[1]。PRL在免疫系统中的作用必须通过与其细胞膜上的PRL受体(PRLR)结合才能发挥作用[2]。在T、B、NK细胞和巨噬细胞上都存在PRLR。PRL能够促进T、B细胞及其前体细胞的生成和分化[3     

激素敏感脂肪酶的研究进展

激素敏感脂肪酶 (HSL)是动物体脂肪分解的关键酶 ,它能水解甘油三酯成甘油和脂肪酸以满足动物体的需要。在结构上 ,HSL含有三个相互独立的功能区域 :调节区、催化区和脂质结合区。调节区内包括 2个磷酸化位点。 1个调节位点和 1个基本位点 ,调节位点可调节HSL的活性 ,而HSL活性的变化会影响动物的背膘厚和瘦肉率。日粮的能量浓度、日粮蛋白质和氨基酸的比值以及日粮脂肪类型均可影响HSL的活性     

保幼激素类似物对天蚕后部丝腺丝蛋白合成的影响

保幼激素类似物具有明显的增丝作用,天蚕方面,前人曾以ZR515做过初步探索[1]。我们业已证实,保幼激素类似物（methoprene）对天蚕有明显的增丝效果,为探明其增丝的生化机理,笔者以3种浓度的methoprene处理5龄两个不同时期的天蚕,比较分析了激素处理后,后部丝腺中核酸含量及可溶性蛋白组成与含量的变化。1材料和方法1．1激素处理先将methoprene（日本制药株式会社产）用丙酮稀释成一定浓度,分别以5、10、15ng／头的剂量涂布于5龄第4或第8天的天蚕的第6～7腹节的腹面,同时以涂布等量的丙酮为对照。1．2后部丝腺的解剖与制样激素处理…