线粒体ATP合酶基因组成及生化机制研究进展

线粒体ATP合酶是能量合成过程中的一个关键酶。该酶由水溶性的F1和跨膜的脂溶性F02个亚基组成,其中F1亚基由核基因编码,F0亚基由线粒体ATP6和ATP8基因以及核基因共同编码。该酶利用线粒体内膜两侧质子梯差形成的势能,通过结合改变机理旋转合成ATP,达到了很高的能量转化效率。因此,研究其基因组成及作用机制对分析和改良与动物能量代谢密切相关的重要经济性状及其基因效应具有重要价值。本文对线粒体ATP合成酶的基因组成及其作用机制进行了阐述。     

仙台病毒F基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达及抗原性分析

为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞DH10Bac,提取重组杆粒rBacmid-F,经PCR鉴定正确将rBacmid-F转染Sf9细胞,连续传代后,细胞病变明显。经SDS-PAGE分析,成功表达了相对分子量为65ku左右的F蛋白,western blot和ELISA分析表明重组F蛋白具有良好的抗原性。     

牛、羊POU1F1基因的研究进展

POU1F1基因是 POU 基因家族的重要成员.POU1F1蛋白在哺乳动物胚胎分化和生长发育过程中起着关键作用.本文综述POU1F1基因的结构特征与功能,POU1F1蛋白的结构特征与作用方式,POU1F1蛋白的调控机制以及近年来对牛、羊POUlFl基因遗传变异及其与经济性状关系研究的最新进展.     

ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立

表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21(pCold I-F4-F5),SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达F4-F5相对分子质量为29 000,与ETEC高免血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度6ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15 000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间15min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强的特点,是猪场ETEC感染和疫苗免疫效果检测的有效工具,进而指导疫苗使用和新型疫苗研发。     

新城疫病毒F基因在大肠埃希菌中的表达及其抗原性分析

构建新城疫病毒融合蛋白F基因的原核表达载体,并将其在宿主菌BL21(DE3)感受细胞中表达.以含有融合蛋白F基因的重组质粒pMD19T-F为模板,设计特异性引物,应用PCR技术扩增获得F基因的F1片段,定向插入原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-F1,将构建成功的重组质粒pET-F1转化宿主菌BL21(DE3)感受态细胞经IPTG诱导,将其在宿主菌细胞中表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot方法检测.结果显示,成功克隆出了新城疫病毒F1基因片段序列852 bp.构建的pET-F1载体经PCR、双酶切、测序鉴定均无误,转化表达宿主菌后经SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,目的基因被成功表达,并具有良好的反应原性.成功构建了新城疫病毒的融合蛋白F基因原核表达载体,转化宿主细胞后成功表达了融合蛋白F1重组蛋白片段.     

加拿大披碱草和老芒麦及其杂种F1同工酶分析

采用聚丙烯酰胺垂直平板电泳技术对加拿大披碱草和老芒麦及其杂种F1的过氧化物酶(POD)同工酶、酯酶(EST)同工酶做了比较分析.结果表明,亲本加拿大披碱草和老芒麦的POD同工酶可明显地分成A、B两区,共有8条相同位点的酶带,为亲本的基带,在EST同工酶谱中双亲有6条基带,从酶蛋白分子水平验证出两亲本的亲缘关系相对较近;杂种F1的POD和EST同工酶谱主要表现为互补双亲的酶带类型,同时还丢失了部分双亲的酶带,杂种F1的POD和EST同工酶谱有偏向母亲遗传的倾向;亲本与杂种F1的酶谱表型均有一定的差异;POD与EST同工酶具多态性,可作为遗传标记用于杂种鉴定和目标性状植株的检测.     

新城疫病毒F蛋白和禽致病性大肠杆菌OmpA嵌合蛋白的表达及双特异性抗体制备

为获得Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)融合蛋白(fusion protein, F蛋白)和O18型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)外膜基因A(outer-membrane proteases, OmpA)嵌合蛋白和双特异性抗体，试验首先采用基因合成技术获得Ⅶ型NDV F基因和O18型APEC的OmpA基因片段，使用同源重组技术将F基因插入到OmpA基因中，再将重组基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中构建嵌合表达质粒，对重组质粒中的插入基因序列进行测序鉴定；将序列正确的嵌合表达质粒转入大肠杆菌BL21(Rosetta)感受态细胞中，利用IPTG诱导嵌合蛋白表达，使用SDS-PAGE和Western-blot检验嵌合蛋白的表达情况；纯化嵌合蛋白后免疫兔获得抗血清，抗血清再经抗原亲和纯化层析柱纯化获得多克隆抗体，采用间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定抗体效价。结果表明：成功合成了Fo和OmpA1、OmpA...     

新城疫病毒F基因重要功能区和HN基因单核苷酸多态性研究

对广泛应用的新城疫疫苗株La Sota进行了全基因组测序,并对来自9个不同基因型新城疫病毒株的血凝素神经氨酸酶(haemagglution-neuraminidase,HN)基因和融合蛋白(fusion protein,F)基因47～435 nt区域进行了用单核苷酸多态性(SNP)分析.结果表明:在F基因47～435nt间和HN基因中都存在高密度的SNP位点,Tajima's D检验结果表明这些核苷酸变化符合中性突变假说,Pi(a)/Pi(s)分析暗示F蛋白编码基因N端的一些区段和HN蛋白编码基因中散在的部分区域受到了正向选择.但F基因和HN基因在整体上却都受到了强大的负向选择压力的影响.     

德本F1蓝本F1牛适应性分析研究

研究了德国黄牛和比利时蓝牛的杂种后代德本F1、蓝本F1牛在甘肃省陇东地区肉牛带的适应性能，主要包括生长发育、增重、抗病性和繁殖性能等因素。结果表明德本F1、蓝本F1牛在试验期内（0～12月龄）的各项指标均优于本地牛，对当地饲养条件和环境条件表现出了良好的适应能力，可以在当地推广应用。     

新城疫病毒F48E9株病毒F基因表达盒的火鸡疱疹病毒转移质粒载体构建

将新城疫病毒（NDV）F48E9株融合蛋白（F）基因1700bp克隆到真核表达载体pcDNA3中，构建成表达F基因的载体pc3F。然后将包含F基因及其上游的细胞巨化病毒启动子和增强子的3800bp DNA片段再克隆入包含火鸡疱疹病毒（HVT）非必须片段载体pTK2B中，构建成功含有F基因表达盒的HVT转移质粒体pTK3F。经限制性内切酶酶切分析，F基因表达盒的插入方向与pTK2B中TK基因转录方向一致。该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的HVT重组病毒奠定了基础。     

家蚕杂种一代数量性状预测模型的探讨——Ⅰ.模型的提出与验证

在前人利用遗传距离预测杂种优势的基础上,进一步对杂种F_1性状的构成因素进行了剖析,指出F_1的性状表现决定于双亲平均值和双亲遗传差异的共同作用。用多元统计分析中的主成分分析法,分析若干具有相关关系的性状,找出控制这些性状的公共因子(主成分),把主成分的差异作为度量遗传差异的指标,从而提出用F_1的性状值对中亲值、双亲主成分差的多元回归,作为F_1的预测模型。通过几种方法对F_1的预测效果的对比,初步对本模型进行了验证。     

地中海水牛杂交后代生长性能测定初报

[目的]为了解地中海水牛引进我国后,在广西地区的气候适应性及其生长发育情况。[方法]本试验选取地中海杂交后代水牛32头,对其生长发育前期阶段(0～12月龄)的体重、体斜长、体高、胸围、腹围等参数进行连续跟踪测定,并对其的生理生化相关指标进行了测定。[结果]地中海水牛及其杂交后代水牛之间的体温、呼吸、脉搏等生理数值和各项血液生化指标没有差异(P>0.05),并与先前引进的摩拉、尼里及其杂交水牛数值相似;地中海水牛与摩拉、尼里和本地的杂交后代初生重是差异不显著的(P>0.05),随着月龄的增长,地中海水牛与摩拉、尼里杂交后代的各月龄体重增长速度比地中海—本地杂交水牛高,但差异不显著(P>0.05),而地×摩、地×尼杂交水牛在0～12月龄之间的生长速度基本相同;地×摩、地×尼和地×本的杂交水牛1～12月龄的体高、体斜长、胸围和腹围变化趋势大体一致。[结论]地中海水牛引进我国后,不仅能够完全适应我国南方地区尤其广西的环境气候条件,而且表现出良好的生长优势。     

肝片形吸虫与巨片形吸虫的DNA和氨基酸含量的分析

本文对肝片形吸虫和巨片形吸虫进行了组织化学探讨。结果表明：肝片形吸虫和巨片形吸虫的ＤＮＡ含量不同，二者比值为２：３，且所含１７种氨基酸种类相同，含量却不相同，某些氨基酸含量差别很大。     

禽副粘病毒2型F4分离株F基因的克隆和变异分析

克隆了分离自七彩纹鸟的禽副粘病毒2型F4分离株F基因的全长,对它的生物特性进行了较为详细的研究,并试图通过与标准株Yucaipa株进行全面的比较,探讨该变异株的变异情况.研究结果表明:在电镜形态结构上,这两个毒株没有明显的差异;而血凝抑制交叉反应以及F基因序列同源性比较、疏水性和预测的二级结构比较分析显示它存在一些较为重要的变异,这对于禽副粘病毒2型病毒的流行病学分析有着重要的意义.     

The F18 fimbrial adhesin FedF is highly conserved among F18+Escherichia coli isolates

F18⁺ Escherichia coli cause postweaning diarrhoea and oedema disease in newly weaned piglets. Protection against these diseases can be established by preventing the fimbrial adhesion of these bacteria to the enterocytes of the porcine intestine. To test a vaccine against F18⁺ E. coli consisting of the adhesin of F18 fimbriae, FedF, the conservation of the FedF subunit had to be examined. Therefore, the fedF sequence of 37 F18⁺ E. coli isolates from different countries was determined and compared to the fedF gene of the F18ab reference strain F107/86. The amino acid sequence of the mature FedF from the individual F18⁺ E. coli isolates was 96–100% identical to that from E. coli F107/86, but the overall homology was 90.4%. Hyper variable regions were not found in the FedF sequence. The FedF sequence was conserved over the different countries and between the two antigenic variants, F18ab and F18ac, suggesting that F18ab and F18ac strains have the same receptor. Furthermore, the conserved C-terminal region in the FedF adhesin suggests that the F18 fimbriae, in analogy with type 1 and P pili, are assembled by a donor strand mechanism. In conclusion, the reported conservation of FedF supports the usefulness of the fimbrial adhesin as a subunit vaccine against F18⁺ E. coli infection.     

奶牛乳腺中4F2hc基因的表达模式及亮氨酸对其表达的调控研究

为了研究4F2hc在奶牛乳腺中的表达模式及调控方式，进一步明确氨基酸在奶牛乳腺上皮细胞中的跨膜转运过程，本研究采用Western blotting和实时荧光定量PCR技术检测了4F2hc在泌乳期和干奶期奶牛乳腺组织中的表达变化；在体外培养的泌乳期奶牛乳腺上皮细胞中添加亮氨酸，采用Western blotting和实时荧光定量PCR技术检测其对奶牛乳腺上皮细胞中4F2hc表达的影响；采用雷帕霉素抑制剂抑制mTOR信号通路，使用Western blotting方法检测mTOR信号抑制后奶牛乳腺上皮细胞中4F2hc表达以及乳蛋白合成的变化。结果显示，在泌乳期的奶牛乳腺组织中4F2hc的mRNA和蛋白表达水平均显著或极显著高于干奶期（P<0.05，P<0.01）；在体外培养的奶牛乳腺上皮细胞中添加亮氨酸可以极显著提高乳腺上皮细胞中4F2hc的mRNA和蛋白质表达水平（P<0.01）；亮氨酸刺激可以激活细胞内的mTOR信号通路（P<0.05），而雷帕霉素处理则可以显著抑制mTOR信号分子的磷酸化并极显著抑制亮氨酸诱导的4F2hc的表达（P<0.05，P<0.01），进而极显著抑制β-Casein的合成（P<0.01）。以上研究结果表明，4F2hc基因的表达与奶牛乳腺的泌乳活性之间呈正相关，亮氨酸可以通过激活mTOR信号通路来调节4F2hc基因的表达，进而影响乳蛋白的合成。     

萨陶寒、陶寒、特寒F1代繁殖成活率比较试验

本文对某场2010、2011年所产萨陶寒、陶寒、特寒F1代羊生产性能进行数据分析后结果显示,萨陶寒、陶寒、特寒代羔羊繁殖率高,都遗传了小尾寒羊的高繁殖力,3组之间萨陶寒F1代繁殖成活率明显高于陶寒、特寒F1代羊。小尾寒羊虽然产羔多,产羔率可达180％以上,但其繁活率却略低于陶寒F1代羊。     

新城疫病毒F48E9株F基因主要功能区的核苷酸序列分析

本试验首先以ＮＤＶＦ４８Ｅ９株的基因组ＲＮＡ为模板,逆转录合成Ｆ基因ｃＤＮＡ第一链,再通过ＰＣＲ技术扩增Ｆ基因的ｃＤＮＡ,然后将其克隆到质粒ｐＵＣ１９中,经分子量比较、酶切分析、ＰＣＲ等方法证明,我们已经获得了ＮＤＶＦ４８Ｅ９株Ｆ基因的阳性克隆。经初步序列分析,ＦＡ段核苷酸序列与参考株（Ｄ２６／７６）序列同源性为８９％,ＦＢ段同源性为９１％。二者的氨基酸序列表明,Ｆ４８Ｅ９株Ｆ蛋白裂解位点与其它强毒株裂解位点氨基酸组成相同,即１１２ＲＲＱＲＲ１１６Ｆ１１７。这两段序列中包含的三个Ｃｙｓ残基和三个潜在的糖基化位点都相当保守。     

NDV长春株和四平株HN/F核酸疫苗的构建及表达

将新城疫病毒（NDV）长春株和四平株HN插入pIRES1多克隆位点（EcoRⅤ）中，构建成核酸表达疫苗pIRcHN和pIRsHN，然后切除pIRcHN和pIRsHN的新霉素基因，将长春株和四平株F基因分辊手稿其中，构建成pIRcHNF和pIRsHNF，而后分别转染Hela细胞。经血凝效价测定、Western blot分析，弱毒株构建疫苗的血凝活性比强毒株高1个数量级，Hela细胞表达的HN蛋白量以pIRcHN最高，pIRsHN次之，pIRcHNF和pIRsHNF较低。将重组疫苗转染Hela细胞，用兔抗鸡IgY进行间接免疫荧光试验，结果，在细胞膜和细胞浆中观察到了特异性的黄绿色荧光，证明表达产物具有特异性。