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1.
捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶对山羊PBMCs免疫功能的影响   总被引:1,自引:1,他引:0  
旨在探究捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶(Hc58)对山羊外周血单个核细胞(PBMCs)免疫功能的影响。采集健康山羊血液,分离出PBMCs和单核细胞,分别以质量浓度为0、10、20、40μg·mL-1的重组蛋白Hc58与细胞体外共培养,采用硝酸还原酶法测定不同浓度Hc58对单核细胞分泌一氧化氮(NO)的影响;采用流式细胞术检测重组蛋白对单核细胞吞噬FITC-dextran能力的影响;采用荧光定量PCR检测PBMCs中IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ和TGF-β的mRNA转录情况;采用迁移小室研究重组蛋白对PBMCs迁移的影响;采用流式细胞术检测不同浓度Hc58对PBMCs凋亡的影响。研究表明重组蛋白Hc58显著促进山羊单核细胞分泌NO;并且增强了山羊单核细胞的吞噬能力;Hc58显著上调IL-2、IL-4、IL-17、IFN-γ的表达量;Hc58显著提高山羊PBMCs凋亡比例,也使PBMCs迁移率增加。捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶能通过多种途径影响宿主PBMCs发挥免疫作用。  相似文献   

2.
为研究重组绵羊短腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(rSPLUNC1)的抑菌活性及对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性的调节作用,本实验采用微量稀释法测定rSPLUNC1对巴氏杆菌、大肠杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌生长的抑制作用;采用显色底物检测法测定rSPLUNC1对NE活性的调节作用。抑菌检测结果表明10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL rSPLUNC1能够极显著地抑制巴氏杆菌、大肠杆菌的生长(p0.01),并且呈剂量效应;显色底物检测结果表明10μg/mL和20μg/mL~40μg/mL rSPLUNC1可以显著和极显著地提高绵羊肺炎支原体(Mo)感染的外周中性粒细胞NE的活性(p0.05,p0.01)。表明rSPLUNC1能够抑制革兰氏阴性菌的生长并提高NE活性,可能有助于机体抵御呼吸道的感染。  相似文献   

3.
本文旨在分析旋毛虫二肽基肽酶1(dipeptidyl-peptidase 1, Dpp1)在体外对大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)增殖、迁移、凋亡以及一氧化氮(NO)分泌和吞噬功能的影响。根据GenBank中旋毛虫Dpp1基因序列设计一对特异性引物,RT-PCR获得该基因,将其亚克隆到pET-32a原核表达载体,IPTG诱导后获得重组蛋白rDpp1。将大鼠PBMCs与rDpp1共孵育,用间接免疫荧光试验(IFA)分析rDpp1与大鼠PBMCs的结合情况,分析不同质量浓度(10、20、40μg·mL~(-1))的rDpp1对细胞增殖、迁移、NO分泌、吞噬功能和细胞凋亡的影响。结果表明,40μg·mL~(-1)rDpp1极显著促进PBMCs增殖;10μg·mL~(-1)rDpp1能显著促进PBMCs迁移,而20及40μg·mL~(-1)时表现极显著的促进;20与40μg·mL~(-1)rDpp1极显著促进PBMCs分泌NO;10μg·mL~(-1)rDpp1能显著促进PBMCs的吞噬功能,而20及40μg·mL~(-1)时表现极显著的促进;各质量浓度蛋白均极显著地促进PBMCs的凋亡。旋毛虫二肽基肽酶1在体外能通过多种途径影响大鼠外周血单个核细胞,对调节宿主免疫应答有一定的促进作用。  相似文献   

4.
本文探讨了捻转血矛线虫的谷胱甘肽过氧化物酶(HC29)体外对山羊外周血单核细胞(PBMCs)功能的影响。颈静脉采取无捻转血矛线虫感染的山羊血液,分离单核细胞后加入终浓度为5μg/mL的HC29重组蛋白进行体外培养,通过免疫荧光抗体技术观察重组蛋白与单核细胞的结合情况;HC29刺激山羊外周血单核细胞,用qPCR技术测定各试验组单核细胞中IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ和TGF-βmRNA的转录水平;重组蛋白刺激单核细胞,采用CCK-8法测定细胞的增值情况;将重组蛋白与巨噬细胞共培养,测定巨噬细胞吞噬和分泌NO的情况。结果表明,重组HC29能够与外周血单核细胞结合并刺激细胞因子IL-10和IFN-γ的表达水平显著提高(P<0.01),能够引起单核细胞增值(P<0.01),巨噬细胞吞噬作用增强(P<0.01)和NO分泌增加(P<0.01)。结果表明HC29是捻转血矛线虫的一个重要抗原,主要诱导Th1类免疫反应。  相似文献   

5.
为了探究不同浓度的铁皮石斛对环磷酰胺(Cyclophosphamide,Cy)所致免疫抑制模型小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响,选取6周龄清洁级KM小鼠50只,体重18~22 g,全为雌性,随机分为对照组、免疫抑制组。每组各设5个重复,每个重复5只小鼠。免疫抑制组给予腹腔注射环磷酰胺(100 mg/kg·bw),对照组给予腹腔注射等量的生理盐水。1日1次,隔天注射,连续15 d。结果:铁皮石斛在终质量浓度5~135μg/mL范围内促进效果显著,其中作用48 h增殖幅度明显。对于小鼠脾脏T淋巴细胞而言,铁皮石斛浓度为20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL均能促进免疫抑制小鼠T淋巴细胞的增殖(P0.05),尤以浓度为20μg/mL时最佳。铁皮石斛浓度为80μg/mL时对于正常小鼠脾脏T淋巴细胞分裂增殖显著(P0.05)。对于小鼠脾脏B淋巴细胞而言,铁皮石斛浓度为40μg/mL时对免疫抑制小鼠脾脏B淋巴细胞增殖效果最佳。各浓度铁皮石斛OD值均高于单纯LPS刺激,且细胞增殖情况差异显著(P0.05),但对照组中3个铁皮石斛浓度差异不显著(P0.05)。结论:铁皮石斛浓度在40μg/mL、80μg/mL时能有效协同Con A、LPS刺激小鼠脾脏T、B淋巴细胞的增殖。  相似文献   

6.
本文旨在分析旋毛虫二肽基肽酶1(dipeptidyl-peptidase 1,Dpp1)在体外对大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)增殖、迁移、凋亡以及一氧化氮(NO)分泌和吞噬功能的影响。根据GenBank中旋毛虫Dpp1基因序列设计一对特异性引物,RT-PCR获得该基因,将其亚克隆到pET-32a原核表达载体,IPTG诱导后获得重组蛋白rDpp1。将大鼠PBMCs与rDpp1共孵育,用间接免疫荧光试验(IFA)分析rDpp1与大鼠PBMCs的结合情况,分析不同质量浓度(10、20、40 μg·mL-1)的rDpp1对细胞增殖、迁移、NO分泌、吞噬功能和细胞凋亡的影响。结果表明,40 μg·mL-1rDpp1极显著促进PBMCs增殖;10 μg·mL-1rDpp1能显著促进PBMCs迁移,而20及40 μg·mL-1时表现极显著的促进;20与40 μg·mL-1rDpp1极显著促进PBMCs分泌NO;10 μg·mL-1rDpp1能显著促进PBMCs的吞噬功能,而20及40 μg·mL-1时表现极显著的促进;各质量浓度蛋白均极显著地促进PBMCs的凋亡。旋毛虫二肽基肽酶1在体外能通过多种途径影响大鼠外周血单个核细胞,对调节宿主免疫应答有一定的促进作用。  相似文献   

7.
EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟的影响   总被引:3,自引:0,他引:3  
研究了在培养液中添加不同浓度的EGF、IGF-1以及EGF联合IGF-1对山羊有腔卵母细胞体外成熟的影响。结果表明: (1)10, 20, 30μg/LEGF对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05)。(2) 10μg/L的IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05); 20, 30μg/L的IGF-1能显著提高山羊卵母细胞体外成熟率 (P<0.05)。(3)添加 10μg/LEGF+20μg/LIGF-1组卵母细胞体外成熟率显著高于添加 20μg/L的IGF-1组(P<0.05),极显著高于添加 10μg/LEGF组和对照组(P<0.01)。可见,EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟有协同作用。  相似文献   

8.
本试验旨在研究烟曲霉毒素B1(FB1)对鸡肝脏细胞的毒性作用。将体外培养的鸡肝脏细胞分为6组,每组6个重复,1组为对照组,2~6组为FB_1组,分别在培养基质中添加FB_1,使FB_1终浓度为2.5、5、10、20、40μg/mL。染毒培养48 h,检测肝脏细胞存活率以及培养基质、肝细胞相关生化指标。结果表明:2.5~40μg/mL FB_1组肝脏细胞存活率显著低于对照组(P0.05),10~40μg/mL FB_1组基质中总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化物酶(POD)活性显著低于对照组(P0.05),2.5~40μg/mL FB_1组基质中乳酸脱氢酶(LDH)活性显著高于对照组(P0.05),20μg/mL FB_1组基质中总胆固醇含量显著低于对照组(P0.05),5~40μg/mL FB_1组丙二醛(MDA)含量和谷丙转氨酶(ALT)活性显著高于对照组(P0.05),5~40μg/mL FB_1组超氧化物酶(SOD)活性显著低于对照组(P0.05),40μg/mL FB_1组谷草转氨酶(AST)活性显著高于其余各组(P0.05);AST、ALT活性以及MDA含量与FB_1浓度呈正相关(P0.05),LDH、SOD活性以及T-AOC与FB_1浓度呈负相关(P0.05)。由此可以看出,FB_1具有明显的肝细胞毒性,氧化损伤是FB_1致肝细胞毒性的重要致病机制。  相似文献   

9.
为了评价自制中药复方的免疫活性,将健康昆明种小鼠随机分成对照组、中药低剂量(0.125 g/mL)组、中药中剂量(0.25 g/mL)组和中药高剂量(0.5 g/mL)组,分别灌服生理盐水(对照组)或中药(中药组),每天每只0.3 mL,试验10 d后测定脾脏指数、胸腺指数、外周血中性粒细胞和腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果表明:中药复方可显著或极显著提高小鼠脾脏指数、胸腺指数、外周血中性粒细胞和腹腔巨噬细胞的吞噬功能,且以中剂量组效果最好。初步证明中药复方对正常小鼠的免疫功能有较强的促进和调节作用。  相似文献   

10.
试验旨在探讨脂多糖(LPS)刺激大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)对跨内皮迁移中性粒细胞(PMNs)溶菌酶释放量的影响及白头翁、黄连、黄柏、秦皮、马齿苋的干预作用。选取0、0.1、1、10、100μg/mL LPS刺激RIMVECs,采用ELISA法检测12和24h细胞培养上清液中IL-6水平以确定后续试验所需LPS浓度。建立PMNs跨RIMVECs黏附模型和迁移的Transwell模型,采用细胞计数法、染色法、ELISA方法评价5种中药对LPS刺激RIMVECs后PMNs的黏附情况、迁移率及其溶菌酶释放量的影响。结果显示,与对照组相比,10μg/mL LPS作用RIMVECs后24h时的IL-6水平极显著升高(P0.001);与LPS组相比,黄连、白头翁组的PMNs黏附率显著降低(P0.05),溶菌酶释放量极显著升高(P0.001),秦皮、白头翁组迁移率显著降低(P0.05)。提示LPS刺激内皮细胞显著抑制了PMNs杀菌酶的释放,中药黄连、白头翁可以显著减轻这种抑制作用,PMNs杀菌酶的释放可能与内皮细胞的功能完整性有关,本试验为进一步筛选有效中药水溶性成分提供了理论依据。  相似文献   

11.
为了研究5种土霉素注射液肌肉注射后在山羊体内的药动学特征,给临床用药及其研究提供参考依据,选取30只山羊为靶动物,将其随机分为5组,分别注射不同品种的土霉素注射液(10%A、B、C)和(20%D、E),然后采用高效液相色谱法对山羊体内的土霉素含量进行测定,3P97软件拟合血药浓度-时间曲线,计算药动学参数。结果显示,5种土霉素注射液均符合一级吸收二室模型,10%A、10%B、10%C、20%D和20%E主要药动学参数分别为:消除半衰期(t_(1/2β))为7.13μg/mL、6.62μg/mL、6.97μg/mL、21.16μg/mL和27.32μg/mL;达峰浓度(C_(max))为(2.71±0.37)μg/mL、(3.11±0.81)μg/mL、(3.60±0.83)μg/mL、(5.52±0.53)μg/mL和(4.69±1.20)μg/mL;达峰时间(T_(max))为(2.08±1.52) h、(2.17±2.2) h、(3.05±2.30) h、(2.05±0.80) h和(2.80±1.01) h;药时曲线下面积(AUC)为(61.41±20.94) h·μg/mL、(50.34±8.74) h·μg/mL、(58.57±7.31) h·μg/mL、(124.23±7.23) h·μg/mL和(109.47±22.35) h·μg/mL。表明高浓度(20%)的土霉素注射液具有半衰期长,峰浓度高,药时曲线下面积大等特点,与低浓度(10%)土霉素注射液之间差异显著,可能与有机溶媒的用量和种类有关,此结论为临床合理使用剂型提供依据和指导。  相似文献   

12.
MTT比色分析法检测山羊白细胞介素—2方法的建立   总被引:1,自引:1,他引:0  
以伴刀豆蛋白A(ConA)活化的山羊外周血单核细胞作为应答细胞,建立了检测山羊白细胞介素-2(IL-2)的MTT比色分析法。结果表明,以3μg/mL的ConA浓度刺激,经过36h活化所得的应答细胞活性最好;MTT的用量及作用时间分别以20μL(50μg/μL)及4h为最佳;IL-2与活化细胞的作用时间以18h为最适。  相似文献   

13.
本实验旨在研究不同浓度没食子酸(GA)对猪精液常温(17℃)保存效果的影响并筛选没食子酸的浓度范围。在猪精液稀释剂中分别添加不同浓度(0、5、6、7、8、9、10μg/mL)没食子酸,于不同保存时间测定猪精子的活率、A+B级精子数、质膜完整率及顶体完整率指标。结果表明,保存第1~3 d各浓度组间指标无明显差异(P0.05),保存第5 d, 6、9μg/mL组除组质膜完整率极显著高于对照组(P0.01),保存第5、7 d时,7、9μg/mL组精子活率显著高于对照组(P0.05);保存至第9 d时9μg/mL组活率显著高于对照组(P0.05)。综上表明,一定浓度范围的没食子酸有助于提高常温(17℃)保存下猪精液的质量,并延长保存时间。  相似文献   

14.
为研究艾叶水煎醇提液不同剂量对肉兔血液及生化指标的影响,将24只断奶体重相当的伊拉兔,随机分为A组、B组、C组和D组,每组6只,其中A组、B组、C组肉兔每天每只灌服艾叶水煎醇提液的量分别为2.0、3.0、4.0mL,D为生理盐水对照组,总灌胃量为4.0mL。结果显示,与D组比较,A组、B组、C组白细胞(WBC)、中性粒细胞百分比(NEUT,%)、中性粒细胞(NEUT)、淋巴细胞/单核细胞百分比(LYMPH/MONO,%)和谷草转氨酶(AST)差异极显著(P0.01)。表明艾叶水煎醇提液可以显著提升肉兔血液中白细胞数量,对肉兔血清谷草转氨酶(AST)的活性有一定降低作用,具有提高动物机体免疫力的功效。  相似文献   

15.
为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.10和10μg/mL TCDCA可以极显著地对抗地塞米松(DEX)诱导的RAW264.7细胞系凋亡(P0.01)。1μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1和XIAP表达有显著的促进作用(P0.05);10μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有显著的促进作用(P0.05)。TCDCA给药后对DEX诱导的RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有极显著的促进作用(P0.01),但不同给药剂量的TCDCA作用有所差异。以上研究结果表明,TCDCA具有对抗DEX诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡作用,且与上调凋亡抑制蛋白mRNA表达有关。  相似文献   

16.
为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,本试验研究了在成熟培养液中添加不同浓度的促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体素(luteinizing hormone,LH),不同来源的FSH+LH对山羊卵母细胞体外培养成熟效果的影响。结果表明,采用TCM199添加10%FCS,1~2mg/L17β-E2,10mmol/LHepes,0.055mg/mL丙酮酸钠,2.2mg/mL NaHCO3,500μg/mL链霉素,500μg/mL青霉素,10mg/L FSH及20mg/LLH的培养体系,有利于山羊卵母细胞的体外成熟;进口的和国产FSH和LH对山羊卵母细胞成熟有相同促进效果。  相似文献   

17.
本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)对人结直肠腺癌细胞(HCT116细胞)、人肺癌细胞(A549细胞)、人肝癌细胞(Hep G2细胞)的促增殖和促迁移作用。设空白对照组,并以赭曲霉毒素A(OTA)作为阳性对照,采用噻唑蓝(MTT)比色法和细胞划痕愈合试验分别检测细胞活力和细胞迁移能力。结果表明:与空白对照组相比,0.080、0.400μmol/L OTA能显著或极显著增强HCT116、A549和Hep G2细胞活力(P0.05或P0.01),50.000μmol/L OTA则能极显著降低HCT116、A549和Hep G2细胞活力(P0.01);DON在低浓度(0.016、0.080μmol/L)时对HCT116和A549细胞活力无显著影响(P0.05),但能极显著增强Hep G2细胞活力(P0.01),而在DON中高浓度(2.000、10.000、50.000μmol/L)时则能极显著降低HCT116、A549和Hep G2细胞活力(P0.01);ZEN浓度在0.016~50.000μmol/L时能显著或极显著增强Hep G2细胞活力(P0.05或P0.01),ZEN在高浓度(50.000μmol/L)时能极显著降低HCT116和A549细胞活力(P0.01)。细胞划痕愈合试验结果表明,与空白对照组相比,1、10 nmol/L OTA、DON和ZEN作用24、48 h能极显著促进Hep G2细胞迁移(P0.01)。由此可见,在0.016~50.000μmol/L浓度内,DON和ZEN对Hep G2细胞有显著的促进增殖和迁移的作用,表明DON和ZEN在Hep G2细胞系上具有潜在的致癌性。  相似文献   

18.
为了研究牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠机体环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量的影响,试验用环孢菌素A诱导特异性免疫低下模型,按相应组别对应的剂量对小鼠灌胃给药7 d,获取血清;体外培养正常小鼠腹腔巨噬细胞,用MTT方法筛选TCDCA作用于腹腔巨噬细胞的最佳药物浓度;用最佳药物浓度作用于巨噬细胞后超声破碎,获取上清液;ELISA方法测定血清和上清液中cAMP和cGMP的含量。结果表明:在TCDCA高剂量(0.2 g/kg)组小鼠血清中,cAMP含量极显著高于环孢菌素A组(P<0.01);各组小鼠血清cGMP含量差异不显著(P>0.05);TCDCA促进小鼠腹腔巨噬细胞增殖的体外浓度为1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL;1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL的TCDCA均能显著或极显著提高细胞内cAMP含量(P<0.05或P<0.01),对cGMP含量均没有显著影响。说明TC-DCA能够显著提高正常和免疫抑制小鼠血清中和正常腹腔巨噬细胞内cAMP含量。  相似文献   

19.
本文旨在研究大豆异黄酮对高温下体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖和抗氧化能力的影响,采用细胞培养方法,将奶牛乳腺上皮细胞分为4组,分别在细胞基础培养基中添加0、10、100μg/m L和1000μg/mL的大豆异黄酮,各组细胞正常(37℃、5%CO2)培养48 h后,在42℃下处理1.5 h,再正常培养12 h检测相关指标。结果发现:(1)与0μg/mL组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P 0.05)。(2)与0μg/m L组相比,10~1000μg/mL大豆异黄酮组细胞活性氧(ROS)的浓度显著降低(P 0.05)。(3)与0μg/mL组相比,100μg/m L和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著升高(P 0.05),而乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量显著下降(P 0.05)。(4)与0μg/m L组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞内Caspase3和Bax基因的相对表达显著降低(P 0.05),而Bcl-2基因的相对表达显著升高((P 0.05)。综上所述,大豆异黄酮能够通过增强奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力,抑制细胞凋亡,进而促进细胞增殖。  相似文献   

20.
为阐明IL-17等相关炎性因子在山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumoniae,CCPP)中的作用,将20只6周龄~8周龄SPF雌性Balb/c小鼠随机分成试验组和对照组,每组10只,建立CCPP小鼠模型,按时间点处死小鼠后采集血液和肺组织,进行组织病理学分析和肺部山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)载量检测鉴定模型。应用real-time PCR检测肺部IL-17及其相关细胞因子、趋化因子及其受体的mRNA水平,应用ELISA检测血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平,应用流式细胞术检测肺组织中中性粒细胞和巨噬细胞数量变化。结果显示,试验组小鼠精神状态不佳,肺部病理损伤严重,Mccp载量为5.9×10^4 copies/μL,与对照组相比有极显著差异(P<0.001);与对照组小鼠相比,试验组小鼠肺组织IL-17相关炎性因子mRNA表达升高,血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平显著升高(P<0.001,P<0.01),肺部中性粒细胞和巨噬细胞数量极显著增加(P<0.01,P<0.001)。说明成功构建了CCPP小鼠模型,在Mccp诱导小鼠肺部炎症早期,IL-17参与肺部炎症反应。  相似文献   

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