健康奶牛子宫颈乳酸菌筛选方法的建立及其抑菌活性分析

为筛选用于防制奶牛子宫炎的乳酸菌菌株,本试验选取产后30~50 d的健康奶牛,采集子宫颈口处分泌物,利用MRS选择性培养基进行乳酸菌初步筛选。纯化后的菌株进行革兰氏染色镜检,将具有乳酸球菌或乳酸杆菌典型形态的疑似菌株进行针对性生化鉴定。提取分离菌株的基因组DNA,扩增其16S rDNA全序列并测序,将所得序列与NCBI数据库中的相应序列进行同源性比对分析。采用琼脂扩散法检测分离菌株对致病性金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性,并检测分离菌株对山羊上皮细胞的黏附活性。结果显示,经染色镜检、生化鉴定和16S rDNA测序分析,得到13株乳酸菌,其中5株具有较强抑菌活性,6株具有较强黏附上皮细胞的能力,7、12和23号3株兼有良好的抑菌活性和黏附上皮细胞能力。综上,本试验建立了健康奶牛子宫颈中乳酸菌的筛选方法,得到3株具有良好益生特性的乳酸菌,为制备微生态制剂提供了基础材料,对防制奶牛子宫炎具有重要意义。     

健康奶牛生殖道乳酸菌的分离鉴定及其抑菌活性研究

【目的】 从健康奶牛生殖道分离筛选益生乳酸菌,为未来防治奶牛子宫内膜炎提供益生菌菌株并为开发防治此病的微生态制剂奠定基础。【方法】 采集10份健康奶牛的生殖道分泌物样品,用MRS培养基进行分离培养,通过形态学观察和16S rDNA序列对分离出的菌株进行鉴定,将所得序列结果与NCBI核酸数据库参考菌株进行相似性比对,确定各分离菌株的种属。利用牛津杯法分离筛选出具有较好抑菌活性的菌株,研究这些筛选出的菌株的生长曲线、产酸能力及抗菌药敏感性,并对其主要抗菌物质进行检测。【结果】 从10个样品中共分离出13株乳酸菌,经染色镜检和16S rDNA测序分析鉴定出13株乳酸菌,分别为植物乳杆菌11株、殊异肠球菌和鼠肠球菌各1株。单株抑菌试验得到5株对大肠杆菌抑菌能力较好的乳酸菌,5株乳酸菌生长特性及产酸能力均良好,对氨苄西林、四环素、红霉素、利福平、甲氧苄啶、氯霉素和青霉素7种抗菌药物敏感性较强。其中21和35号菌株的抗菌物质为过氧化氢和细菌素,而25、33和34号菌株的抗菌物质除过氧化氢和细菌素外还包括有机酸。【结论】 从奶牛生殖道中分离得到的3株乳酸菌有望作为微生态制剂用于奶牛子宫内膜炎的临床防治,其具体防治效果有待进一步探究。     

番鸭肠道乳酸菌的分离鉴定及抑菌性能

通过革兰染色、菌落形态观察、生化分析鉴定、牛津杯抑菌试验、Caco-2细胞黏附试验对分离到的6株乳酸产生菌进行研究。结果显示:经16SrDNA序列测定,比对分析6株乳酸产生菌与鼠李糖乳杆菌、乳酸乳球菌乳亚种、唾液乳杆菌、乳链球菌、哥伦比亚肠球菌和鼠乳杆菌高度同源。6株乳酸菌抑菌试验检测显示:对大肠杆菌、沙门菌、蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌具有很强的抑菌效应,以CM3菌株的抑菌效果最强。同时,这6株乳酸菌对Caco-2细胞均有一定的黏附能力。结果表明:6株番鸭肠道乳酸产生菌能够黏附于肠道模型Caco-2细胞上并具有较强的抑菌活性,但其黏附性能及保护机制还有待进一步研究。     

健康奶牛阴道乳酸菌分离筛选及益生特性

对产后健康奶牛阴道的乳酸菌进行分离筛选并对乳酸菌功能特性进行研究。采用传统方法对健康奶牛阴道内乳酸菌进行分离,通过抑菌试验对乳酸菌分离株进行筛选,并研究其产酸性能、抗生素敏感性,通过16SrDNA序列分析方法对分离株进行鉴定。最后获得4株乳酸菌分离株,经鉴定分别为唾液乳杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌和巴黎链球菌。4株菌株均可作为防治奶牛子宫内膜炎潜在的益生菌使用。     

分泌抗金黄色葡萄球菌细菌素乳酸菌的分离鉴定

为分离和筛选产抗金黄色葡萄球菌乳酸菌素的优势乳酸菌,利用乳酸菌分离培养基MRS从收集的各种腌制菜汁中分离培养乳酸菌,通过细菌培养特性、革兰氏染色特点、生理生化特性初步鉴定,同时根据Genbank中乳酸菌的16SrDNA序列设计特异性引物,采用PCR方法进一步鉴定,并以金黄色葡萄球菌为指示菌对乳酸菌的发酵上清液进行抑菌特性研究。结果表明,从腌渍菜汁中分离获得90株产酸菌,通过形态学、生理生化特性和PCR鉴定,结果73株产酸菌为乳酸杆菌;分泌产物抑菌试验表明,有10株菌具有抑制金黄色葡萄球菌活性,经酸排除和过氧化氢排除试验,仍然有5株乳酸菌的分泌产物具有抑制金黄色葡萄球菌活性。可见,从腌渍菜汁分离到的乳酸菌具有抑制金黄色葡萄球菌活性的特性,主要是通过分泌乳酸菌素来发挥作用。     

酸马奶中一株具有高效抑菌活性的乳酸菌的分离与鉴定

乳酸菌作为益生菌对人体健康十分有益,近年来关于益生菌的研究及应用发展较快。为了开发优质乳酸菌资源,试验采用常规的细菌分离鉴定方法,从酸马奶中分离了46株乳酸杆菌和24株乳酸球菌,对抑菌活性较强和生长较快的菌株进行生理生化初步鉴定,并在分子水平上进行保守基因16S rRNA和gyrB基因鉴定。结果表明:分离到的XM-38菌株具有较强的抑菌活性(可抑制大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌),XM-48菌株具有生长优势但没有明显的抑菌活性;结合生理生化和分子水平序列聚类分析,发现XM-38为干酪乳杆菌,XM-48为一株新的乳酸菌菌株。     

水貂源乳酸菌的分离鉴定及其抑菌性研究

通过革兰染色、菌落形态观察、生化分析鉴定、牛津杯抑菌试验对分离到的1株乳酸菌进行研究。结果显示,经16 S r DNA序列测定,比对分析该株乳酸菌与鼠李糖乳杆菌、乳酸乳球菌乳亚种、唾液乳杆菌、乳链球菌、哥伦比亚肠球菌和鼠乳杆菌高度同源。乳酸菌抑菌试验检测显示,对大肠杆菌、沙门菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有很强的抑菌效应。同时该株乳酸菌对水貂肠道上皮细胞有一定的粘附能力。结果表明,该株乳酸菌株产生菌能够粘附于水貂肠道上皮细胞上并具有较强的抑菌活性。     

鸡源乳酸菌细菌素的分离筛选及鉴定

为了分离鉴定产乳酸菌细菌素,采用双层琼脂扩散法,对从健康鸡肠道内容物分离到的68株乳酸菌进行筛选,获得对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鸡白痢沙门菌均有抑制作用的17株乳酸菌,在排除酸、过氧化氢等因素作用后仍具有较强抑菌活性,表明发酵液中还有其他抑菌活性物质的存在,用蛋白酶处理上清液后有6株菌的抑菌效果消失,表明抑菌物质具有蛋白质性质,是一种细菌素类物质。筛选出的菌株所产抑菌物质是一种广谱细菌素,它们对革兰阳性菌和革兰阴性菌均具有较强抑制效果。结合形态鉴定、生理生化特性试验以及16S rRNA序列同源性分析鉴定菌株LABJN02、LABJN05、LABJN06和LABJN14分离菌为唾液乳杆菌,LABJN16为约氏乳杆菌,LABJN31为卷曲乳杆菌。细菌素作为潜在的抑菌物质,与其产生菌一起在平衡肠道菌群中具有重要意义。     

健康奶牛阴道乳酸菌分离鉴定及作为候选益生菌株的体外评价

为分离健康奶牛阴道乳酸菌并鉴定其益生特性,本研究采集健康奶牛阴道临床样品并分离筛选到4株乳酸菌,对其抑菌活性、产酸性能、产H_2O_2能力及对抗生素敏感性进行检测,通过16S rDNA序列分析鉴定乳酸菌分离株。结果显示,4株乳酸菌具有较好的抑菌活性和产酸性能,在体外均能够产生H_2O_2,并对万古霉素具有抗性;经鉴定4株乳酸菌分别为唾液乳杆菌1株、黏膜乳杆菌2株、坚强肠球菌1株。本研究分离鉴定的4株乳酸菌均可以作为候选益生菌株用于奶牛子宫内膜炎防治。     

青贮苜蓿中抑菌活性乳酸菌的筛选及鉴定

研究旨在从苜蓿青贮材料中筛选出有高效抑菌活性的乳酸菌,并分析其抑菌机理。实验从苜蓿青贮材料中分离出104株乳酸菌通过牛津杯双层平板法筛选得到两株具有高效抑菌活性的菌株;在对其抑菌活性进行初步分析后发现,其中一株菌发挥抑菌活性的主要成分为蛋白类物质,另一株菌发挥抑菌活性的主要成分为有机酸。经过生理生化、碳源发酵及16S r DNA序列同源性分析,这两株乳酸菌分别被鉴定为Enterococcus mundtii及Lactobacillus plantarum。两株菌的抑菌活性物质在pH值范围及温度范围分别表现出广泛的耐受性,表明它们在苜蓿青贮中具有潜在的应用价值。     

肉鸡肠源产细菌素乳酸菌的分离和鉴定

研究旨在从肉鸡肠道中筛选具有良好抑菌效果的产细菌素乳酸菌,并对其生物学特性和抑菌特性进行初步研究。试验采用牛津杯法,以大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,从饲喂菌丝霉素的肉鸡肠道分离筛选具有抑菌功能的乳酸菌。利用形态学、生理生化鉴定及16S rD-NA序列同源性分析进行菌种鉴定,通过热处理、过氧化氢酶、蛋白酶K处理确定抑菌活性物质,并绘制乳酸菌生长曲线及抑菌活性曲线。分离筛选到两株对大肠杆菌、沙门氏菌和金色葡萄球菌均具有较强抑菌活性的乳酸菌LAB12和LAB19,经鉴定菌株LAB12为乳酸片球菌,菌株LAB19为植物乳杆菌。过氧化氢酶处理不影响LAB12和LAB19抑菌活性,加热处理和蛋白酶K处理后抑菌活性减小。乳酸片球菌LAB12接种后2 h进入对数生长期,18 h左右进入稳定期,随着菌体数量增加发酵液上清抑菌作用增强,22 h抑菌活性达到最大且趋于稳定;植物乳杆菌LAB19在发酵2 h进入对数生长期,经约10 h快速生长后,生长速度趋于稳定,抑菌活性也基本保持不变。研究从饲喂菌丝霉素的肉鸡肠道中分离筛选到两株具有良好抑菌功能的乳酸菌,分别为乳酸片球菌LAB12和植物乳杆菌LAB19,初步鉴定这两株菌抑菌活性物质为细菌素。     

健康奶牛阴道乳酸菌的分离与鉴定

采集10份健康奶牛阴道临床样品,利用MRS琼脂培养基进行细菌分离培养与纯化,通过形态特征观察、生化试验、16S r RNA基因序列对分离菌株进行鉴定,并通过抑菌试验检测分离菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌等致病菌的抑菌能力。结果显示,分离筛选到3株乳酸菌,其菌落特征、形态特征、生化特性均符合乳酸杆菌的特性,均具有较好的生长性能和较强的产酸能力,与Gen Bank中乳酸杆菌的同源性均在99%以上,对病原菌的抑菌环直径均在11.41 mm以上。研究表明分离鉴定的3株乳酸杆菌是有潜质的有益菌株,可作为奶牛子宫内膜炎防治的候选益生菌。     

弯曲杆菌中具有高抑菌活性乳酸菌的筛选

使用微生态制剂来替代抗生素用于动物疫病防制是未来的发展趋势,而乳酸菌是目前微生态制剂最主要的成分。试验旨在筛选弯曲杆菌中具有高抑菌活性并耐受动物胃肠道环境的乳酸菌。从广东不同地区采集家禽粪便样品,对分离的乳酸菌进行生化鉴定、PCR鉴定及16S rDNA测序。同时,对分离菌株进行鸡源空肠弯曲杆菌、鸭源空肠弯曲杆菌和鹅源结肠弯曲杆菌的抑菌试验,以及模拟胃肠道环境的耐酸、耐胆盐和耐胰蛋白酶试验。结果表明,唾液乳杆菌R3对不同禽源的弯曲杆菌都具有高抑菌活性和耐受能力。因此,唾液乳杆菌R3为开发防控家禽弯曲杆菌疾病的微生态制剂提供了候选株。     

鸡源乳酸菌的分离与初步鉴定

为筛选具有优良抑菌特性的鸡源乳酸菌,本研究在鸡盲肠中分离出5株菌株,经过菌落形态观察、革兰氏染色以及生化鉴定,初步确定为乳酸菌。     

猪源乳酸菌抑制致病性大肠埃希菌研究

为筛选能够抑制猪源致病性大肠埃希菌的优势乳酸菌,采集不同日龄的健康仔猪新鲜粪便,分离纯化得到35株疑似乳酸菌。应用牛津杯法对3株致病大肠埃希菌抑制作用进行研究,筛选出2株有抑菌作用的疑似乳酸菌(11号和14号)。利用生化鉴定和16SrDNA序列同源性分析,该两株菌被鉴定为乳杆菌属唾液乳杆菌;综合牛津杯法和生长曲线、pH的测定结果,筛选出产酸性能和抑菌效果好的14号菌株,为研制仔猪用微生态制剂奠定了基础。     

蔬菜废弃物中高抗菌活性乳酸菌的筛选及鉴定

试验应用传统纯培养技术从蔬菜废弃物中分离出62株乳酸菌,并通过牛津杯双层平板法筛选得到4株,对革兰阳性指示菌和阴性指示菌,均具有高效抑菌活性的乳酸菌;应用高效液相色谱法分析发酵上清液中的有机酸成分。经过生理生化试验及16S rDNA序列同源性分析,这4株高抗菌活性的乳酸菌菌株其中2株被鉴定为Lactobacillus plantarum,另外2株为Leuconostoc lactis。试验结果表明,这4株乳酸菌在青贮添加剂,生物防腐剂方面具有良好的应用潜力。     

奶牛生殖道内益生乳酸菌的筛选及分子鉴定

为了筛选出用于制作微生态制剂的候选菌株,选取15头产后30⁶0d的健康荷斯坦奶牛,使用MRS琼脂培养基厌氧技术从生殖道分泌物中分离得到47株革兰阳性菌株。随后对其抑菌效果和产过氧化氢能力进行测试,从中挑选出抑菌效果和产过氧化氢能力相对较强的菌株4株,通过生化试验和16SrDNA序列分析方法对其进行鉴定。鉴定结果为:1株为魏斯氏菌,1株为大芬戈尔德菌,1株为乳酸明串珠菌,1株为营养泥杆菌。最后测试混合菌株的抑菌效果得出以下结论:大芬戈尔德菌、乳酸明串珠菌、营养泥杆菌混合之后抑菌效果在这几组混合液中抑菌效果是最好的。     

一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及抑菌活性分析

为了对兔源枯草芽孢杆菌进行生化特性及抑菌活性的分析鉴定,试验将1株枯草芽孢杆菌进行扩大培养后,革兰氏染色,镜检,利用PCR技术扩增16S rRNA序列;测序后构建系统进化树,分析遗传变异特性,借助生化管分析生理生化特性,并进行体外抑菌活性分析。结果表明:该菌株为产芽孢的革兰氏阳性菌,在系统进化树中与枯草芽孢杆菌聚为一簇,同源性高达99%,对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具有一定抑菌活性。     

上海地区苜蓿附生乳酸菌中优良菌株的筛选和鉴定

研究旨在筛选和鉴定适用于低可溶性糖含量的牧草青贮中的优良乳酸菌。将上海地区35个苜蓿样品中分离得到的67株乳酸菌进行抑菌活性检测和产酸性能的测定,分离菌株在葡萄糖浓度为0.5%的MRS液体培养基中进行发酵试验,并对发酵苜蓿粉的性能进行检测,从中筛选出优良乳酸菌。通过生理生化试验和16S r RNA序列分析对筛选优良乳酸菌进行鉴定。发现其中ZZU A95、ZZU A101、ZZU A104和ZZU A105菌株的抑菌活性较强、产酸速率较快,能于24 h内将培养基p H值降至4.0以下。筛选出的优良乳酸菌ZZU A95在低可溶性糖条件下发酵产酸性能较好,被鉴定为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)。研究表明,菌株ZZU A95在低可溶性糖含量的牧草青贮中具有潜在的应用价值。     

1株关岭黄牛瘤胃源发酵乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

为了分离具有优良益生特性的牛源乳酸菌，探究其用于畜牧微生态制剂研发的潜力，试验采集健康关岭黄牛瘤胃液，接种于MRS肉汤培养基富集后分离乳酸菌，使用含0.3%胆盐的无菌PBS初步筛选耐胆盐乳酸菌，通过革兰氏染色镜检和16S rRNA测序进行鉴定，并对分离菌的生长特性、产酸能力、耐受特性、药物敏感性、抑菌特性及细胞黏附性进行分析。结果表明：经筛选分离得到1株菌，命名为NCO,经革兰氏染色、镜检和16S rRNA测序鉴定为发酵乳杆菌；该菌具有良好的生长和产酸能力，培养4 h后进入对数生长期，16 h后达到稳定期，培养28 h的菌液pH值为4.43;对低pH值、胆盐、胃液和肠液环境具有耐受能力；该分离菌对万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素耐药；其培养上清液对金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门氏菌具有极强的抑制作用；该分离菌对Caco-2细胞的黏附数量为43.5 cfu/个，具有一定黏附性。说明分离菌NCO具有优良的生物学特性，有潜力作为优良微生态制剂的候选菌株。