2-十三烷酮诱导棉铃虫(Helicoverpa armigera）细胞色素P450 CYP6B6时空表达规律的研究

植物次生物质2-十三烷酮能够诱导棉铃虫细胞色素P450 [WTBX]CYP6B[WTBZ]6基因的过量表达,以6龄棉铃虫（[WTBX]Helicoverpa armigera[WTBZ]）幼虫为对象,研究2-十三烷酮对棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6的诱导作用,并对其表达规律进行了初探。分别采用实时荧光定量PCR（qRT PCR）和免疫组化的方法,分析棉铃虫在终浓度为10 mg·g-1 的2-十三烷酮胁迫下,不同时间及不同组织部位[WTBX]CYP6B[WTBZ]6 基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达变化规律。qRT PCR结果显示：用添加了2-十三烷酮的人工饲料饲喂棉铃虫不同时间后,在头壳中[WTBX]CYP6B[WTBZ]6 mRNA的表达量一直低于对照组,到48 h时与对照组具有显著差异（[WTBX]t4=15.32,P[WTBZ]=0.000 1）;在脂肪体中随着时间的推移,表达量呈升高趋势,在36 h 已过量表达（[WTBX]t4=7.627,P[WTBZ]=0.001 6）;在24 h时体壁和中肠组织的表达量分别较对照组提高了2.06倍和7.16倍,之后表达量均呈现先降低后升高的趋势,且在48 h时达到最大。免疫组化结果显示：在棉铃虫幼虫组织中发现CYP6B6蛋白在体壁、脂肪体、中肠中均有表达,相比之下在体壁中表达量较高。该研究为深入了解棉铃虫P450 CYP6B6的表达调控机制及其参与杀虫剂抗性的研究奠定了基础。     

三种植物次生物质对B型烟粉虱羧酸酯酶活性及其对药剂敏感度的影响

采用人工饲料添加法,研究了不同浓度的槲皮素、2-十三烷酮和葫芦素B 3种植物次生物质对B型烟粉虱Bemisia tabaci羧酸酯酶(CarE)活性的影响,同时比较研究了用3种植物次生物质处理后敌敌畏、脱叶磷、灭多威、乐果和氧乐果5种药剂对CarE 的抑制中浓度(I50)的变化。结果表明: 0.01~1.0 mg/mL的槲皮素对B型烟粉虱成虫CarE活性均具有明显的诱导增加作用,最高为对照的4.32倍; 0.1和0.5 mg/mL的2-十三烷酮处理使CarE活性比对照分别下降了22%和58%; 0.75~30.0 mg/L的葫芦素B对烟粉虱CarE活性均表现为抑制作用;用1.0 mg/mL的槲皮素处理24 h后,敌敌畏和脱叶磷对烟粉虱CarE的I50值分别增加为对照的20.05和3.16倍; 3.75 mg/L 的葫芦素B处理后,敌敌畏和灭多威对CarE 的I50值分别增加为对照的25.94、2.45倍; 1.0 mg/mL的2-十三烷酮处理后敌敌畏、脱叶磷和乐果对CarE 的I50值分别降低了89%、83%和90%。     

转Bt基因抗虫棉GK19抗虫性大田调查

调查结果表明：（１）ＧＫ１９对３代棉铃虫抗性极强,生产上不需喷药可将棉铃虫控制在防治指标以下;（２）ＧＫ１９对４代棉铃虫也具强抗性,５代抗性则较３,４代减弱,虽然ＧＫ１９后期对棉铃虫抗性有所一降,但在棉铃虫大发生年份,仅需喷药防治２￣３次,可将棉铃虫控制在防治指标以下。     

棉铃虫脂肪酸结合蛋白的克隆与表达

为深入了解棉铃虫Helicoverpa armigera脂肪酸结合蛋白HaFABP1在参与细胞内脂肪酸代谢过程中的功能,基于酵母单杂交结果从幼虫中肠cDNA中扩增得到HaFABP1的开发阅读框,构建重组菌株BL21-pET28a-HaFABP1,进行融合蛋白His-HaFABP1的诱导和纯化,并利用实时荧光定量PCR检测棉铃虫不同时期和组织中HaFABP1的表达规律,最后检测2-十三烷酮处理下棉铃虫6龄幼虫中肠组织内HaFABP1的变化情况。结果显示,克隆获得的棉铃虫HaFABP1为405 bp,编码134个氨基酸,相对分子量和等电点分别为15.08 kD和5.54;在37℃下用0.5 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌株4 h后,得到约18.4 kD的可溶性蛋白His-HaFABP1,纯化后的融合蛋白条带单一且大小符合预期;HaFABP1在棉铃虫的脂肪体、中肠、体壁和头部中都有表达,在头部的表达量最低,在中肠中的表达量最高;HaFABP1在棉铃虫幼虫的每个发育时期都有表达,表达量总体呈现先降低后升高的趋势,4龄时最低而1龄时最高;10 mg/g 2-十三烷酮处理饲料饲喂棉铃虫6龄幼虫6 h和15 h后,中肠内HaFABP1的表达量与对照相比显著提高,且随着时间的延长逐渐增加。表明HaFABP1与棉铃虫的生长发育有关,并且有可能参与了昆虫的解毒过程。     

部分GK系列Bt棉对棉铃虫抗性的田间评价

１９９７～１９９８年在河北省廊坊市和１９９８年在河南省新乡市分别研究了转ＣｒｙＩＡ Ｂｔ抗虫基因棉花ＧＫ－２、ＧＫ－５和ＧＫ－１２对棉铃虫的抗性水平。研究结果表明,ＧＫ－２和ＧＫ－１２在整个生育对棉铃虫皆保持极高的抗性,在对照普通棉花品种棉铃虫高峰期百株幼虫２代４４～１３８头,３代１１３～１３８头和４代１４４头密度下,对棉铃虫的控制效果分别达８８．７１％～９５．４５％、９２．７５％～９７．６５％和     

棉铃虫多代连续取食转基因抗虫棉的抗性演变

1997－1999年,用含45％Bt CPT1双抗基因棉半人工饲料饲喂棉铃虫幼虫5．5天,连续16代汰选。结果：幼虫校正死亡率由79．18％下降到49．36％;其体长达取食45％泗棉3号半人工饲料幼虫平均体长,由第一代的0上升到第16代的23．32％;幼虫体长、体重增长速率由第一代负增长分别上升为55．29％和366．67％。表明棉铃虫幼虫经取食转基因抗虫棉连续16代,其中肠对抗虫棉已产生一定的亲和性及适宜性,进入早期抗性阶段。     

对抗虫棉在江苏沿海棉区的抗虫效果调查及其应用看法

自９０年代以来,棉铃虫连续在江苏大发生,影响了棉花生产持续稳定发展。为了减轻棉铃虫的为害,克服以化学防治为主要手段控制棉铃虫发生的局面,自１９９５年起,我们引进泗棉３号转基因抗虫棉（江苏沿海地区农科所）、ＲＨ－１（中国棉花研究所）两种转基因抗虫棉,以泗棉３号、中杂０２８和苏棉９号常规棉为对照,设常规棉和抗虫棉用药区和不用药区,用药区每年根据各代棉铃虫的发生量决定用药次数,一般二代用药１～２次、三代２～３次、四代３～４次,每个品种系统查卵,每代发生结束后调查残虫。室内以泗棉３号转基因抗虫棉和泗棉３…     

增效剂的增效作用与棉铃虫抗药性水平之间的关系研究

以不同抗药性水平的棉铃虫三龄幼虫试虫，分别测定增效磷（ＳＶ１），八氯二丙醚（Ｓ２）月桂氮Ｚｕｏ酮（ＤＣ），ＩＳ－９６１对久效磷（ｍｏｎｏｃｒｏｔｏｐｈｏｓ）灭多威（ｍｅｔｈｏｍｙｌ），氰戊菊酯（ｆｅｎｖａｌｅｒａｔｅ）的增效作用，结果表明：４种增效剂的增效作用，除与被测定药剂种类有关外，还与棉铃虫抗药性水平密切相关，其增效作用一般随抗性水平的提高而增加，但增加的幅度低于抗药性提高的幅度。     

防治棉铃虫农药“强力保棉威”研究

防治棉铃虫农药“强力保棉威”研究李学峰，张兴中（北京农业大学，１０００９４）（山东济宁化工实验厂）棉铃虫在我国棉区一年发生３－４代，在南方棉区发生５代，且具有多食性、繁殖力强、飞翔力较强、抗药性上升快和对温度适应范围广（最适温度为２５－２８℃，在１５...     

宽缨酮对棉铃虫的拒食活性及生长发育的影响

为评价宽缨酮（EN）对棉铃虫的生物活性, 采用浸渍叶碟法和饲料混毒法, 以印楝素为对照, 检测宽缨酮对棉铃虫的拒食及抑制生长发育活性。结果表明, 宽缨酮和印楝素的拒食中浓度分别为12.04 μg/mL和21.62 μg/mL, 宽缨酮的拒食活性优于印楝素。以含10 μg/g宽缨酮的饲料饲喂棉铃虫幼虫, 在第10~12天幼虫体重相比对照分别下降87.90%、88.04%和80.74%, 并推迟5 d化蛹, 蛹重降低。化蛹率、羽化率和卵的孵化率分别比对照下降了26.00、37.39和14.98百分点, 蛹和成虫的畸形率分别是对照的2.89倍和3.33倍。综上所述, 宽缨酮对棉铃虫具有明显拒食和抑制生长发育活性, 具有开发成为新型植物源杀虫剂的潜力。     

棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶的活性分布和发育期变化及植物次生物质的诱导作用

对棉铃虫 Helicoverpa armigera (Hübner)谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）发育期活性进 行了跟踪测定。从卵期开始，GSTs活性呈上升趋势，6龄幼虫达到最高，然后逐渐下降，但化蛹初期仍维持较高水平；用培养基混药法研究发现，芸香苷和2-十三烷酮诱导种群5龄时 活性即达到峰值。6龄幼虫脂肪体GSTs活性最高，中肠次之，头部和表皮最低。用1-氯-2, 4-二硝基苯（CDNB）作底物时，中肠GSTs的 Km值最小。5龄幼虫中肠匀浆液中，GSTs活性90%以上集中在细胞液层，在微粒体、线粒体和细胞碎片层的分布均不超过5%；芸香苷诱 导种群3龄幼虫微粒体层GSTs活性分布明显比对照种群减少，而上清液层则比对照种群 有所增高。     

Influence of three diets on susceptibility of selected insecticides and activities of detoxification esterases of Helicoverpa assulta (Lepidoptera: Noctuidae)

The oriental tobacco worm, Helicoverpa assulta Guenée, is one of the most destructive pests of tobacco and peppers in China. We determined the susceptibility of H. assulta reared on an artificial diet, chili pepper and tobacco to four insecticides (fenvalerate, phoxim, methomyl, indoxacarb) under laboratory conditions associated with the activities of acetylcholinesterase (AChE), carboxylesterase (CarE) and glutathione S-transferase (GST) in its larvae. H. assulta larvae that were fed with chili pepper were more susceptible to fenvalerate, indoxacarb, and phoxim than those that were fed with tobacco and the artificial diet, but not to methomyl. The larvae that were fed with chili pepper were 3.65-, 2.49-, 1.92- and 2.44-fold more susceptible to fenvalerate, phoxim, methomyl, and indoxacarb than those fed with tobacco, respectively. The AChE activities of H. assulta larvae that were fed with chili pepper and tobacco were 2.12 and 1.07 μmol mg⁻¹ 15 min⁻¹, respectively, almost 2-fold difference. The CarE activity of H. assulta larvae that were fed with chili pepper, tobacco and the artificial diet was 4.12, 7.40 and 7.12 μmol mg⁻¹ 30 min⁻¹, respectively. Similarly, the GST activities of H. assulta larvae that were fed with chili pepper, tobacco and the artificial diet was 52.02, 79.37 and 80.02 μmol mg⁻¹ min⁻¹, respectively. H. assulta larvae that were fed with chili pepper were more resistance to the tested insecticides. The low activities of AChE and the high activities of CarE and GST lead to H. assulta become more susceptible to the tested insecticides.     

取食转Bt基因水稻褐飞虱对杀虫剂的敏感性及其代谢酶的活性

测定比较了褐飞虱Nilaparvata lugens在转cry1Ab基因水稻KMD1和KMD2及其对照秀水11上取食不同世代的室内种群和田间种群对5种杀虫剂的敏感水平及其体内解毒酶(酯酶和谷胱甘肽S-转移酶)、靶标酶(乙酰胆碱酯酶)和保护酶(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶)的活性,以及体内Cry1Ab蛋白的含量.结果表明,5种杀虫剂对分别持续取食KMD1和KMD2的褐飞虱室内种群和田间种群LD50值与取食对照的无显著差异.在KMD1和KMD2上取食1代和9代的褐飞虱室内种群以及田间种群体内解毒酶、靶标酶和保护酶等活性与取食对照的差异不显著.取食KMD的褐飞虱不同种群体内的Cry1Ab蛋白含量相对稳定,其中以取食KMD2的较高.上述结果表明,转cry1Ab基因水稻KMD1和KMD2对褐飞虱的杀虫剂敏感性和代谢酶活性无显著影响.     

槲皮素对棉铃虫体内一些解毒酶系和靶标酶的诱导作用

用培养基混药法研究了槲皮素对棉铃虫羧酸酯酶、谷胱甘肽转移酶的诱导作用和对乙酰胆碱酯酶敏感度的影响。槲皮素诱导种群对甲基对硫磷的敏感度明显降低 ,对灭多威和溴氰菊酯的敏感度没有明显变化。诱导种群羧酸酯酶的活性提高 2～ 3倍 ,谷胱甘肽转移酶活性提高近 15倍 ,而乙酰胆碱酯酶对对氧磷的敏感度却提高了 3.5倍。说明槲皮素诱导种群对甲基对硫磷的敏感度降低是由于解毒酶系和乙酰胆碱酯酶综合作用的结果。     

寄主植物对棉铃虫生理代谢的影响

作者研究了取食不同寄主植物的棉铃虫(Heliothis armigera Hübner)在生长发育和生理代谢上的变化。结果表明:(1)取食不同寄主植物的幼虫发育天数差异较大,其顺序是:棉铃(14天)=人工饲料(14天)<扁豆(16天)<番茄(19天)<青椒(23天);(2)所有供试害虫均含有17种游离氨基酸,谷氨酸、甘氨酸和精氨酸是主要组成成份,第3龄期的差异比较显著;(3)多功能氧化酶和羧酸酯酶的活力随幼虫发育逐渐减小。3龄时期幼虫的活力较高于其他时期,取食青椒的棉铃虫酶活力高于其他4种植物。上述结果说明,幼虫第3龄期可能是解毒的关键时期,代谢过程是多酶系的复合反应,酶活力的变化与棉铃虫的生长发育不成正比,多功能氧化酶是重要的解毒酶,羧酸酯酶作为水解酶起到一定的辅助作用。     

一种监测棉铃虫对Bt杀虫晶体蛋白抗性的技术

研究了以诊断试剂盒监测棉铃虫对苏云金杆菌(Bt)杀虫晶体蛋白(ICP)抗性的技术。将1日龄幼虫在含诊断剂量的饲料中(每毫升饲料含Bt ICP0.01mg)取食7天,以生长至3龄以上的个体作为抗性个体的判断指标;筛选出人工饲料中防腐剂剂量的最佳值为每350毫升饲料中含丙酸2.5ml。经对多个棉铃虫不同抗性种群的验证试验,证明诊断试剂盒检测抗性个体频率较为精确且应用简便。     

Development of an artificial diet for mass rearing of the spiny bollworm,Earias insulana

An artificial diet for rearing the spiny bollworm,Earias insulana (Boisd.), was developed in experiments with three successive generations. The present recommended diet is based on kidney beans, alfalfa meal, whole powdered milk and yeast; methyl-P-hydroxy benzoate, chloramphenicol and formaldehyde were included as preservatives. The effect of the diets on the insect quality is discussed.     

亚洲玉米螟和黏虫幼虫取食Cry1F蛋白后的中肠组织病理变化

为了明确Cry1F杀虫蛋白对亚洲玉米螟和黏虫两种重要玉米害虫的作用机制，本文通过透射电镜观察了亚洲玉米螟和黏虫4龄幼虫取食含Cry1F蛋白人工饲料后的中肠组织病理变化，并与其取食含Cry1Ab蛋白人工饲料后的组织病理变化进行了比较。亚洲玉米螟和黏虫4龄幼虫取食Cry1F蛋白48 h后中肠杯状细胞发生了明显的病变，主要表现为：细胞微绒毛肿胀、脱落；细胞核变形，质膜和核膜界限不清晰；染色质发生固缩、贴近核膜；线粒体拉伸变形数量减少，严重的发生空泡化；内质网肿胀与断裂、数量减少，与取食含Cry1Ab蛋白人工饲料相比，玉米螟和黏虫中肠组织发生的病变程度相似。本研究可为Cry1F作为转基因玉米重要的杀虫蛋白在未来亚洲玉米螟和黏虫防治中更好地发挥作用提供理论依据。