甘肃省南瓜及西葫芦小西葫芦黄花叶病毒病鉴定

利用双抗夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA)的方法对甘肃出入境南瓜、西葫芦种子及采自河西地区显症病株叶片进行检测,在种子及病叶组织中均检测到ZYMV病毒,其中南瓜种子带毒批次占12.5%,西葫芦种子带毒批次占11.8%。根据已报道的小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus)基因组核苷酸序列,设计引物扩增其外壳蛋白(CP)基因,以ELISA阳性种子或病叶组织总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,对预期大小的扩增产物进行测序,结果表明扩增获得的核苷酸序列与世界各地的ZYMV分离物CP基因具有高度一致性,综合ELISA检测和RT-PCR的结果,确定南瓜、西葫芦种子可携带ZYMV,且ZYMV是侵染甘肃瓜类作物的重要病毒种类。     

大豆黄化普通花叶病毒的检测及鉴定

随着国际邮寄业务的迅速发展,外来有害生物随邮寄物入侵我国的风险与日剧增。2012年在韩国旅客携带的大豆种子中首次检出南方菜豆花叶病毒属新种大豆黄化普通花叶病毒(Soybean yellow common mosaic virus,SYCMV)后,近日在隔离种植的日本邮寄大豆种子中,通过多种方法再次检出该病毒。本文将详细分析DAS-ELISA,RT-PCR及序列测定分析的过程,以期为种子病毒的检测提供新的思路。     

进口甜瓜种子中的南瓜花叶病毒的分离鉴定

本实验将美国进口甜瓜种子及用该种子在内蒙制种田繁殖的甜瓜种子播种后出现典型症状的病苗，进行生物接种和蚜传实验。该病毒只侵染葫芦科寄主，不蚜传。经电镜和免疫电镜观察，血清学检测和病毒外壳蛋白分子量测定，表明病毒粒体形态和外壳蛋白亚基诺带与南瓜叶病毒基本一致，血清学反应结果为阳性，实验证明两种甜瓜种子均带有种传的南瓜花叶病毒，种子带病毒率为１％～３．２％。     

荷兰进口百合中检出百合无症病毒

本文采用DAS-ELISA、RT-PCR方法从隔离试种的进口荷兰百合中检出百合无症病毒,并通过对RT-PCR产物进行序列分析验证,确认进口的百合携带有百合无症病毒(LSV).     

利用RT-PCR方法检测甜瓜种子中南瓜花叶病毒

通过设计特异性引物SQCPF/SQCPR,扩增南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)CP基因的保守序列,进行RT-PCR,对扩增得到的特异性片段进行序列测定,测序结果显示扩增产物序列与GenBank中登录的SqMV外壳蛋白基因存在87%～96%的一致性;建立了适用于检测甜瓜种子中南瓜花叶病毒的RT-PCR结合ELISA方法,通过在酶联板的反应孔中直接进行反转录合成cDNA,能扩增到预期大小的DNA条带,且检测灵敏度高于DAS-ELISA方法10倍以上。用建立的RT-PCR结合ELISA方法检测进境甜瓜种子携带的SqMV,在42份样品中检出4份阳性样品。     

由美国进境生菜种子上番茄斑萎病毒的检测鉴定

采用DAS-ELISA检测方法,从美国进境的生菜种子中筛选出携带有番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的疑似阳性样品,通过建立的RT-PCR方法对酶联免疫吸附测定阳性样品进行复核鉴定,并进一步测序。测序结果与GenBank中已有的番茄斑萎病毒分离物KT160282、AY744474、GU369726、KP330470的序列同源性达到96%。结果表明,TSWV可通过种子携带入境。     

北京地区花生病毒病防治研究

应用无毒花生种子防治黄瓜花叶病毒(CMV)和花生轻斑驳病毒(PMMV)效果显著,在与大田毒源花生隔离500米条件下基本控制住两种病毒病发生。覆膜栽培有减轻两种病毒病特别是CMV引起的黄花叶病毒病的效果。在病区大面积隔离繁殖无CMV病毒种子获得成功,应用无CMV病毒种子和覆膜栽培示范获得显著防病效果。34个花生栽培品种和资源材料田间抗性鉴定,未发现有抗性品种和材料。     

棚室番茄防病壮苗增产法

1 药剂浸种法 番茄种子表面可以携带病毒,为预防病毒病需用药剂进行种子浸种消毒.具体做法是:先用温水浸种 6 h,再用 200倍高锰酸钾液浸种 1 h,或用 200倍福尔马林液浸种 1 h,也可用 10%磷酸三钠液浸种 20 min.浸后用清水冲洗种子,可杀死种子表面病毒.     

多重PCR检测籽用西葫芦种子带毒及热处理脱毒效果分析

为了明确籽用西葫芦种子携带病毒的情况,以籽用西葫芦种子为材料,采用多重PCR技术检测种子带毒率。同时为了筛选出有效脱除病毒的方法,通过相对定量法分析了不同温度湿热和干热处理对种子携带病毒的钝化效果。结果表明,从7个籽用西葫芦品种种子幼苗中均可检测到CMV、ZYMV及WMV,其检出率分别为67.1%、50.0%和72.3%,多个病毒的复合检出率为66%。不同品种种子幼苗的病毒检出率有明显差异,其中‘粒丰9号’种子幼苗的病毒检出率最低,为60%,而‘京丰9号’,‘瑞丰9号’,‘绿丰9号’及‘金葫360’的病毒检出率均为100%。8种处理均能不同程度降低籽用西葫芦种子幼苗的带毒率,其中干热60、70、75℃,湿热75℃处理同时脱除WMV、CMV和ZYMV的效果最好。     

进境植物繁殖材料生长期隔离检疫监管工作初探

进境植物繁殖材料的病毒类、细菌类、真菌类病害的检验常需依据种苗生长期的发病症状加以诊断,部分口岸现场难以检出的其它有害生物在种苗生长期也较易发现.因此,对易于携带、传播危险性有害生物的进境植物繁殖材料实行生长期隔离检疫制度具有重要意义.本文将对在新形势下如何实行、完善进境植物繁殖材料的生长期隔离检疫监管制度和方法,进行初步的探讨.     

哈密瓜种子带毒率检测及带毒种子的热处理效果研究

 南瓜花叶病毒(SqMV)和西瓜花叶病毒二号(WMV-2)是严重侵染新疆哈密瓜的2种主要病毒。作者采用免疫电镜法(SSEM)和酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定了哈密瓜病瓜种子的带毒率,并对带毒种子进行了热处理,结果简报如下。     

葫芦种子传黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测*

从感染黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV）的葫芦植株上收取种子,通过苗期症状观察法、双抗体夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）、免疫捕获反转录PCR（IC-RT-PCR）法测定葫芦种子的带毒情况,并用生物学接种方法测定葫芦种子携带病毒的侵染活性。苗期症状观察法结果表明,199株幼苗有2株表现花叶斑驳症状,种子传毒率为1.01%;而利用DAS-ELISA和IC-RT-PCR法随机检测30粒葫芦病株种子,CGMMV检出率为100%。种子各部位携带的CGMMV接种葫芦表现典型的花叶斑驳症状,表明葫芦种子携带的CGMMV具有侵染活性。DAS-ELISA检测葫芦种子CGMMV的灵敏度为1/5120种子研磨液。     

约旦学者发现番茄褐色皱纹果病毒有效处理方法

《European Journal of Plant Pathology》 2020年10月31日刊文报道,约旦科学家研究了3种消毒处理方法对感染番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus, To BRFV)的番茄种子的处理效果。研究结果表明:用2%盐酸(HCl)处理30 min或10%磷酸三钠(TSP)处理3 h,处理后的种子经血清学、分子生物学、生物学检测,病毒灭活率均达到100%,可有效杀灭种子中携带的番茄褐色皱纹果病毒.     

实时荧光RT-PCR技术检测南瓜花叶病毒

南瓜花叶病毒Squash mosaic virus(SqMV)属ssRNA的豇豆花叶病毒属Comovirus.病毒颗粒为球形,主要危害葫芦科植物,可通过种子、汁液和昆虫介体传播.在黄瓜、甜瓜、西葫芦、哈密瓜等葫芦科植物上能引起较为严重的系统侵染症状,严重危害葫芦科植物的生长发育.     

侵染中国陕西南瓜的中国南瓜曲叶病毒的鉴定和全基因组分析

为明确南瓜叶片上卷、黄化的症状是否由病毒侵染引起,本研究采用小RNA深度测序对采集自陕西地区的南瓜叶片样品进行了鉴定。结果显示,侵染南瓜样品的病毒可能是中国南瓜曲叶病毒(squash leaf curl China virus, SLCCNV)。经PCR扩增并且克隆测序获得了病毒的DNA-A和DNA-B组分的全基因组序列。序列比对发现,所克隆的DNA-A组分与SLCCNV海南分离物(SLCCNV-Hn61)DNA-A的一致性最高,为99.1%;DNA-B组分与SLCCNV-Hn61和三亚分离物SLCCNV-SY的DNA-B组分一致性最高,为96.8%。系统进化树分析发现所克隆的DNA-A和DNA-B组分分别与SLCCNV-Hn61和SLCCNV-SY的亲缘关系最近。以上研究结果表明侵染陕西南瓜叶片的病毒是SLCCNV的分离物。这是首次报道SLCCNV在陕西地区的危害,研究结果为当地经济作物南瓜的病害防控提供参考。     

单管多重RT-PCR同时检测大豆种子中三种检疫性植物病毒

我国大豆年进口量持续增长,快速、准确地检测进境大豆种子中可能携带的病原物是防止检疫性有害生物入境传播和扩散的有效手段。菜豆荚斑驳病毒(BPMV)、烟草环斑病毒(TRSV)和番茄环斑病毒(ToRSV)均是被大豆种子携带的检疫性有害生物。本研究建立了在单一PCR管中同时检测这3种检疫性植物病毒及大豆内源基因Bd-30K的多重RT-PCR方法。研究结果表明,所建立的多重RT-PCR方法具有较好的特异性和灵敏度,检测含BPMV、TRSV和ToRSV RNA的最低浓度分别为0.45、0.0093和0.004ng/μL,从大豆种子中同时检测3种病毒的最低RNA浓度为0.58ng/μL。     

苹果锈果类病毒在八棱海棠种子中的分布及氢氧化钠脱毒效果分析

为明确苹果锈果类病毒在八棱海棠果实和种子中的分布特征、种传率以及药剂脱除效果,以带毒母株上的八棱海棠果实和种子为试材,运用RT-PCR技术分析了八棱海棠果实不同部位锈果类病毒的带毒率、实生后代的带毒情况以及氢氧化钠脱除病毒的效果。结果表明,八棱海棠果皮、果肉、种子以及种胚均不同程度携带苹果锈果类病毒,其带毒率分别为96.0%、96.0%、52.0%和4.0%;该病毒可经种子传递给后代,种传率为12.1%;经2%氢氧化钠溶液浸种10、15、20 min,种子的病毒检出率均为0,但后代实生苗的带毒率分别为2.5%、1.3%和0。表明苹果锈果类病毒可侵染种子不同部位并经种子传递给后代,氢氧化钠浸种是脱除该病毒的有效方法。     

国际航行船舶食品舱香辛料中携带杂草种子分析及对策

通过对国际航行船舶食品舱香辛料中携带的杂草种子进行调查,明确了常见香辛料的种类和不同种类香辛料中携带杂草种子的差异,进而分析影响杂草种子截获的因素和造成杂草种子传播的途径,并提出相应对策,以期为口岸检疫监管工作提供参考。     

浅谈生长期监管在进境种苗病毒病检疫中的重要性

种苗作为活的植物，其携带传播危险性有害生物特别是种苗传病毒病害的风险性远远大于其他植物及植物产品。鉴于种苗传病毒病害的特殊性，现场检疫不一定能全面反映种苗带毒情况，检疫法规中规定，对于进境种苗要求必须隔离种植检疫一定的时间，未发现危险性有害生物方可放...     

安徽省太和县中国南瓜曲叶病毒自然侵染南瓜的检测分析

中国南瓜曲叶病毒(squash leaf curl China virus, SLCCNV)是一种植物单链DNA病毒, 属于双生病毒科Geminiviridae菜豆金色花叶病毒属Begomovirus?在自然条件下该病毒可以侵染多种葫芦科作物, 如南瓜?甜瓜等?该病毒由烟粉虱进行持久性传播, 是影响瓜类产量和品质的重要病害?2021年4月-5月, 安徽省太和县温室大棚中的南瓜叶片出现斑驳?皱缩?卷曲以及植株矮化等现象, 我们采集了具有典型病毒病症状的南瓜病叶样品以及烟粉虱虫体进行RT-PCR鉴定, 结合测序结果鉴定危害南瓜的病毒为SLCCNV?为了进一步明确安徽太和地区SLCCNV的系统进化特征, 我们测定了SLCCNV的外壳蛋白基因(coat protein, CP)序列并进行系统发育分析, 结果表明安徽太和县所检测到的SLCCNV分离物与中国广东和海南地区的分离物亲缘关系较近, 并且与越南?菲律宾?柬埔寨?泰国等一些国家的分离物处于同一个大分支, 存在较小的地域差异性, 而与印度和孟加拉国地区的分离物亲缘关系相对较远, 处于不同的大分支?本研究是安徽省SLCCNV侵染南瓜的首次报道, 期望为该病害的预警和防控提供理论依据?