球孢白僵菌自然流行病与马尾松毛虫种群的相互关系

2006年4月下旬发现皖东明光县紫阳林场马尾松毛虫种群中暴发球孢白僵菌自然流行病。根据踏查确定了流行中心区,其僵虫密度远高于周围未流行区域;但中心区僵虫密度不同,最低不到1头／m^2,最高达39头／m^2,形成许多小型流行中心。据此断定,高密度的越冬马尾松毛虫种群呈聚集分布,有利于发病和流行中心的形成。根据僵虫虫龄结构,4～5龄幼虫占僵虫总数93．4％,3龄居中,6龄最少;根据僵虫分布部位,69．8％幼虫死于林冠下,30．2％死于树皮裂缝。由此推断,流行病始于越冬期,而流行高峰始于4月中旬之前。流行区松毛虫的体长和对照区无显著差异,但雌雄比远高于对照区,而产卵量则显著低于对照区。     

4种虫生真菌对朱红毛斑蛾幼虫的室内毒力测定

以朱红毛斑蛾幼虫为研究对象,研究1株自朱红毛斑蛾幼虫僵虫上分离得到的球孢白僵菌Beauveria bassiana PfBb,与3种常用虫生真菌(金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae Mafz01、卵孢白僵菌B. brongniartii 400和球孢白僵菌B.bassiana DSXJ-07)进行致病力比较,以期筛选出高效的虫生真菌用于朱红毛斑蛾的生物防治。采用浸虫法,测定4种虫生真菌不同浓度下朱红毛斑蛾幼虫的校正死亡率及僵虫率。室内毒力测定结果表明,金龟子绿僵菌Mafz01、卵孢白僵菌400、球孢白僵菌DSXJ-07和球孢白僵菌PfBb对朱红毛斑蛾幼虫的致死中浓度分别为3.1×10~8、1.1×10~8、1.9×10~7和2.8×10~5孢子/mL;1.0×10~9孢子/mL浓度处理下的僵虫率分别为52.5%±6.45%、52.5%±6.45%、73.75%±6.29%和97.50±2.89%,且球孢白僵菌PfBb处理后的朱红毛斑蛾幼虫僵虫率显著高于其他3种虫生真菌。4种虫生真菌对朱红毛斑蛾幼虫毒力大小依次为球孢白僵菌PfBb球孢白僵菌DSXJ-07卵孢白僵菌400金龟子绿僵菌Mafz01。推荐使用浓度大于1.0×10~7孢子/mL的球孢白僵菌PfBb防治朱红毛斑蛾幼虫。     

马尾松毛虫种群球孢白僵菌自然流行病流行菌株的异质性

2006年在皖东明光市紫阳林场,马尾松毛虫Dendrolimus punctatus种群中发生由球孢白僵菌Beauveria bassiana引起的流行病。本研究通过4对引物,对采自流行区的44株球孢白僵菌进行28S rDNAⅠ型内含子分析,以探讨流行菌株的遗传多样性及遗传类型。结果显示,存在8种不同内含子单倍型。各单倍型所占比例不同,其中BABA型占据优势地位,为79.55%;BCBC和BCBA型次之,皆为4.54%;而BAAA等5种单倍型仅各占2.27%。表明引起自然流行病的球孢白僵菌是一个异质性的群体。从生态适应性的角度出发,在球孢白僵菌种群中占据主导地位的BABA型菌株,今后可以作为明光地区生防菌株的重点筛选对象。     

利用荧光观测明确载球孢白僵菌松毛虫赤眼蜂对亚洲玉米螟的防控增效作用

载球孢白僵菌松毛虫赤眼蜂能够显著提高对亚洲玉米螟的防控效果，为了明确其对亚洲玉米螟卵期及幼虫期可持续防控的作用机理，采用松毛虫赤眼蜂吸附绿色荧光蛋白（GFP）标记的球孢白僵菌分生孢子，进行赤眼蜂载菌情况，以及亚洲玉米螟卵和幼虫的寄生、侵染过程观察。结果表明，赤眼蜂羽化后能够吸附柞蚕卵表面粘附的白僵菌分生孢子，并将其携带至亚洲玉米螟卵块表面，并吸附于未被赤眼蜂寄生的亚洲玉米螟卵孵化的幼虫体表，实现侵染并致死，幼虫带菌率达60.00%，网室内杀虫生物测定僵虫率达27.00%。本研究表明，载菌赤眼蜂在提高杀虫效率的同时实现害虫可持续防控，该方法为其他载菌天敌的应用提供了依据。     

5种常用农药与生防菌球孢白僵菌的相容性研究

为研究农药与生防真菌球孢白僵菌Beauveria bassiana BBON01的相容性,测定了5种常见农药噻虫啉、四氯虫酰胺、双丙环虫酯、氯虫苯甲酰胺和咯菌腈对球孢白僵菌孢子萌发、菌丝生长及产孢量的影响。结果表明:亚致死浓度和次亚致死浓度的双丙环虫酯对孢子萌发无影响;致死浓度、亚致死浓度和次亚致死浓度的双丙环虫酯,次亚致死浓度的噻虫啉对菌丝生长无影响;致死浓度、亚致死浓度的双丙环虫酯,次亚致死浓度的噻虫啉和四氯虫酰胺对产孢量无影响;而上述药剂的其他试验浓度以及其他供试药剂的各试验浓度对球孢白僵菌的孢子萌发、菌丝生长及产孢量均具显著抑制作用。综合比较得出,供试药剂中与球孢白僵菌相容性最佳的是双丙环虫酯,在其致死浓度、亚致死浓度、次亚致死浓度下,孢子萌发率分别为91.67%、95.00%、96.33%,菌落直径分别为5.97、5.90、6.03 cm,产孢量分别为13.82×10⁷、13.74×10⁷、13.93×10⁷个孢子/m L。研究结果可为田间混用球孢白僵菌与农药防治病虫害提供参考。     

球孢白僵菌对亚洲玉米螟幼虫血细胞数量和包囊作用的影响

为明确亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis幼虫对球孢白僵菌Beauveria bassiana的细胞免疫作用,研究了注射不同剂量球孢白僵菌芽生孢子后亚洲玉米螟幼虫血细胞总数的时间动态变化和活体与离体条件下血细胞对芽生孢子的包囊作用。各处理组的血细胞总数均在注射后0.25 h达到一个低谷之后上升,注射剂量为102个/虫和103个/虫芽生孢子组血细胞总数在注射后24 h仍高于正常值,注射剂量为104个/虫和105个/虫芽生孢子组血细胞总数在注射后24 h低于正常值。在活体条件下亚洲玉米螟幼虫血细胞粘附在球孢白僵菌芽生孢子表面形成包囊;在离体条件下包囊形成的速度较慢,其致密程度不如活体状态。表明亚洲玉米螟幼虫对球孢白僵菌芽生孢子具有强烈的细胞防御能力。     

松毛虫赤眼蜂携带球孢白僵菌防治亚洲玉米螟技术研究与应用

高效的载菌技术是提高载菌赤眼蜂防治效果的重要基础。本研究对比了不同吸附助剂对松毛虫赤眼蜂羽化时间、羽化量、存活时间及载菌量影响，证明了不同助剂及吸附球孢白僵菌分生孢子后对赤眼蜂无不利影响。试验结果表明，0.1%（w/v）淀粉溶液作为吸附助剂可显著提高赤眼蜂的载菌量，达3.6×10⁴孢子/蜂以上，并应用该助剂建立了赤眼蜂高效携带白僵菌方法。从被害株数、蛀孔数、活虫数和僵虫数4个方面测定了载菌赤眼蜂田间防治玉米螟效果。结果表明，载菌赤眼蜂较单一使用赤眼蜂防治效果显著提高，被害株数、蛀孔数和活虫数均显著降低，分别降低了28.1%、22.8%和24.5%，并且载菌赤眼蜂处理组中僵虫数量显著高于单独使用赤眼蜂处理组，说明载菌赤眼蜂对玉米螟具有协同防控作用。利用该方法进行玉米螟田间防治，能够降低防治成本，提高防治效率，节约劳动力，具有巨大的应用和推广价值。     

不同接种方式下球孢白僵菌对小菜蛾的致病力

本文比较了4种接种方式下球孢白僵菌Bb02菌株对小菜蛾2龄和3龄幼虫的致病力。当孢子悬浮液浓度为1×107个/mL时,球孢白僵菌对小菜蛾2龄幼虫校正死亡率为浸虫法73.79%,涂抹法68.28%,喷雾法51.72%和浸叶法33.79%;对3龄幼虫的校正死亡率为喷雾法57.93%,浸虫法57.24%,涂抹法55.86%和浸叶法28.28%,虽然浸虫法的校正死亡率稍低于喷雾法,但两者差异不显著。同时,2龄和3龄幼虫以浸虫法处理僵虫率最高,分别达31.25%和29.55%;致死速度最快,LT50分别为3.62 d和4.63 d。认为浸虫法最适于室内准确评价球孢白僵菌对小菜蛾的致病力。     

桃小食心虫高致病力白僵菌菌株筛选

对来源于不同地点或寄主的14株球孢白僵菌进行僵虫率、在虫体上菌丝生长时间、产孢时间及单虫产孢量测定,综合评价各菌株对桃小食心虫幼虫的致病力,选择较好的菌株进行毒力测定。结果表明：基于僵虫率、菌丝生长时间、产孢时间及单虫产孢量4个指标,筛选出 3 株具有较强致病力的优良菌株Bb7、Bb9和Bb14;在孢子浓度为1.0×107 孢子/mL时,对桃小食心虫幼虫的致死率分别为73.33%、77.78%和80.00%, LT50分别为8.45、7.49、8.42 d;LC50分别为1.76×105、3.03×106、2.10×105孢子/mL。     

西双版纳自然保护区白僵菌属虫生真菌多样性

为掌握西双版纳自然保护区内白僵菌属虫生真菌资源,为害虫生防真菌资源及生防制剂开发提供依据,本研究于2016年11月-2018年1月,对云南西双版纳自然保护区白僵菌属虫生真菌资源进行了系统调查,采用形态和分子测序技术进行白僵菌种类鉴定,并用物种多度、Shannon-Wiener指数H和Pielou均匀度指数对白僵菌属虫生真菌物种多样性和生境及海拔分布特征进行了研究。结果表明,在西双版纳自然保护区设置的60个样方中共采集白僵菌属虫生真菌侵染罹病虫体207头,经过分离培养和鉴定获得白僵菌属虫生真菌5种,分别为球孢白僵菌、布氏白僵菌、多形白僵菌、B.loeiensis和猫棒白僵菌,其中球孢白僵菌为优势种,相对多度为91.3%,其次为布氏白僵菌,其相对多度为6.3%,B.loeiensis相对多度为1.44%,多形白僵菌和猫棒白僵菌相对多度相同均为0.48%。从白僵菌属虫生真菌种类的生境分布特征来看,热带石灰岩山季雨林和热带季风常绿阔叶林白僵菌的种类、数量及寄主昆虫的多样性均高于热带丛生竹林和热带季雨林保护区。从白僵菌属虫生真菌种类的海拔分布特征来看,低海拔区白僵菌物种数和菌株数均明显高于高海拔和中海拔区,且低海拔区Shannon-Wiener指数均较高于中海拔和高海拔区,而均匀度从高到低依次是低海拔、高海拔和中海拔。     

球孢白僵菌与一些常用市售复合肥料的相容性

为了解5种常用市售复合肥料对球孢白僵菌孢子萌发的影响，调查混有不同浓度肥料的平板培养基上的菌落形成单位和摇瓶培养中的孢子发芽率。结果表明，在2种培养条件下“大洋生态有机肥”（F2）在高、中、低3种剂量下与对照的差异均不显著，“绿营高”（F3）仅在低剂量下与对照无显著差异，而其余剂量都极显著地抑制孢子萌发。其他3种肥料在3种剂量下对孢子萌发都有显著抑制作用。这表明只有F2及低剂量的F3可以与白僵菌分生孢子制剂混合使用。     

球孢白僵菌对茶小绿叶蝉杀虫效果和应用技术

为解决当前茶叶农药残留超标问题,本研究以常用拟除虫菊酯类杀虫剂联苯菊酯为对照,在茶园测试了2年100亿孢子/毫升球孢白僵菌油悬浮剂在不同使用剂量下对茶小绿叶蝉的防治效果。结果表明,100亿孢子/毫升球孢白僵菌油悬浮剂对茶小绿叶蝉防效显著。药后1～3d防效较低,药后7d逐渐上升,药后14d达到最高,用100、120mL/667m2,2011年的防效与联苯菊酯相近,无显著差异;2012年的防效显著或极显著高于联苯菊酯;药后21d防效开始下降,但降幅不明显,仍然保持在87.72～90.30%,极显著高于联苯菊酯。     

小麦孢囊线虫病生防真菌08F04菌株的鉴定及防效测定

小麦禾谷孢囊线虫病已成为我国黄淮麦区的重要病害,目前生产上尚缺乏有效的防控方法。菌株08F04是作者从禾谷孢囊线虫孢囊上分离的1株寄生真菌。本研究通过形态学和分子生物学方法,将其鉴定为球孢白僵菌Beauveriabassiana（Bals．）Vuill。2011和2012年对该菌株进行了盆栽和田间防效试验,菌株08F04麦粒砂培养物6％（w／W）土壤处理的盆栽试验孢囊减退率分别达到65．03％和50．95％;田间试验中,菌剂08F0420g·m-2沟施处理土壤,2011年在许昌和荥阳的孢囊减退率分别为58．28％和32．13％,2012年分别达到58．49％和44．50％。结果表明,菌株08F04是防治小麦禾谷孢囊线虫病具有较大潜在开发价值的生防菌株。     

松墨天牛病原菌及其致病性研究

对华东地区松材线虫病疫区和松墨天牛主要发生的13个地区随机抽样调查,共获松墨天牛病原真菌9属12种,病原细菌2属2种。其中,我国首次报道的松墨天牛病原菌新种类有：金龟子绿僵菌小孢变种Metarhizium anisopliae var.anisopliae、粉拟青霉Paecilomyces farinosus、尖镰孢Fusarium oxysporum、蜡蚧轮枝霉Verticillum lecanii、青霉Penicillium spp.、黄曲霉Aspergillus flavus、曲霉Aspergillus spp.、木霉Trichoderma spp.和粘质沙雷氏菌Serratia marcescens。经致病性测定表明,球孢白僵菌、金龟子绿僵菌小孢变种、粉拟青霉对松墨天牛有较强的致病力,处理后16d的致死率分别为100%、100%和70%。     

白僵菌培养基继代培养对蛋白酶（cdep1）、几丁质酶（chit1）基因表达的影响

[目的]对球孢白僵菌D6-2和L1-1菌株进行室内培养基继代培养,比较其不同世代之间毒力及毒力相关基因表达之间的差异.[方法]对目的菌株进行室内生物测定,用LT50和LT90作为毒力评价标准来检测不同世代之间毒力的变化情况.为了明确继代培养对球孢白僵菌毒力相关酶基因表达情况的影响,以18S rDNA基因为内参,利用半定量RT-PCR对蛋白酶cdep1基因和几丁质酶chit1基因的表达情况进行检测.[结果]在107孢子/mL供试浓度下,随着世代的更替,两个供试菌株F2代相比于F1代,其LT50和LT90降低,说明其对玉米螟的毒力有所增强.而两个供试菌株F2～F5代对玉米螟的毒力呈下降趋势.在内参基因稳定表达的情况下,两个供试菌株L1-1和D62的cdep1基因和chit1基因在F1和F2代表达稳定,随着继代次数的增多,供试菌株两个基因的表达量均呈下降趋势,这与对亚洲玉米螟毒力测试的结果呈正相关性.[结论]F2代毒力和毒力酶基因表达最强,F1代与F2代基本相似或略低于F2代,F2～F5代毒力和毒力酶基因表达依次减弱.     

拮抗内生细菌Bacillus mojavensisZA1在马铃薯根内及根际的定殖动态及其对土壤微生物的影响

利用GFP标记和平板分离法研究了拮抗内生细菌Bacillus mojavensisZA1在马铃薯根内及根际的定殖动态及其对土著微生物的影响。结果表明,标记菌株ZA1-gfp在土壤中定殖数量为3.7×10⁴~7.3×10⁴cfu/g;马铃薯根际为3.0×10³~1.5×10⁵cfu/g,根内为49~630cfu/g;马铃薯的根部横切面、根毛和根表皮等部位均观察到发绿色荧光的菌株ZA1-gfp菌体或聚集菌落。利用灌根法施入生防菌后,土壤中细菌、放射菌数量显著增加(P<0.05),土壤真菌数量在中期下降;土壤中细菌、真菌和放线菌的数量分别在相对稳定范围内(数据之间差异不显著)消长。该结果说明菌株ZA1-gfp能够在马铃薯根内及根际定殖且不影响土壤中土著微生物的群落稳定性。     

黔西北典型喀斯特小流域综合治理的生态效益研究

对黔西北毕节石桥小流域不同等级石漠化土地综合治理过程的生态效益进行监测研究,结果表明:不同石漠化土地类型在生态治理过程中,地表植被覆盖度逐渐提高,由2006年的23.5%提高到2009年的64.47%;改善了小气候,各等级石漠化平均光照强度都有所下降,空气湿度提高;改善了土壤理化性质,增加了土壤孔隙度,减小了土壤紧实度,土壤结构改良,土壤中全氮含量逐渐上升;水土流失得到有效控制,土壤侵蚀深度总体呈下降趋势,由2006年的平均值0.864mm下降到2009年的平均值0.72mm。这一结果揭示了喀斯特石漠化地区在没有人为干扰破坏生态环境条件下,生态恢复系统能力较强,随时间延长保水和保土能力逐步增强。     

Characteristics of alginate pellets formulated with Trichoderma and Gliocladium and their effect on the proliferation of the fungi in soil

Pelletized formulations of wheat bran or kaolin clay in an alginate gel containing conidia, chlamydospores, or fermentor biomass (FB) of several isolates of the biocontrol fungi Trichoderma spp. and Gliocladium virens were prepared. The ability of fungal propagules within the pellets to proliferate in soil was determined. Higher population densities were obtained when alginate pellets added to soil contained chlamydospores rather than condia, and bran rather than kaolin as the bulking agent. The active ingredient in pellets prepared from FB was approximately 5% biomass by weight and contained many chlamydospores. Colony-forming units (cfu) ranged from 10⁶'to 10¹⁰/g of soil after soil amendment with FB pellets of 12 Trichoderma and G. virens isolates. Population densities were high during the first 3 weeks of incubation and declined only gradually during 9 weeks. Propagules in FB pellets were more viable at 5° than at 25°C. Viability at 25°C remained high (> 70%) after 1 week, but declined to less than 10% after 24 weeks. Despite reduction in propagule viability in stored pellets, numbers of cfu formed after adding these pellets to soil were comparable with those formed from freshly prepared pellets.     

EFFECT OF CULTIVATION ON THE NUMBERS OF VIABLE WEED SEEDS IN SOIL

Summary. In a 6-year experiment with a naturally occurring population of viable weed seeds, the numbers in the top 9 in. of soil decreased exponentially from year to year in the absence of further seeding. The rates of loss were equivalent to 22% per year in undisturbed soil, 30% per year on plots dug twice a year (March and September) and 36% per year on those dug four times a year (March, June, September, December). Seed numbers of individual species also decreased exponentially, although not all at the same rates.
On the dug plots, the numbers of seedlings that emerged each year decreased exponentially once the regimes had become established. The proportions of the viable seeds which gave rise to seedlings in the course of a year were 7 % on plots dug twice and 9 % on those dug four times a year; although there was some variation, these proportions remained much the same from year to year. On undisturbed soil the number of seedlings that emerged declined rapidly, and in the 4th year represented no more than 03% of the viable seeds still present in the top 9 in. of soil.