用超低温保存的囊胚细胞进行核移植试验

对超低温冷冻保存囊胚细胞的方法、保护剂的选用以及核移植的效果进行了初步研究.利用超低温冷冻保存的囊胚细胞进行核移植是解决核移植中供体与受体时间配合的一种有效方法。     

中华鲟胚胎细胞的冷冻保存及其核移植

为了保存濒危鱼类中华鲟种质资源,对其囊胚细胞和原肠细胞进行了冷冻保存和核移植试验。用二甲亚砜(DMSO)、1,2-丙二醇(PG)、羟乙基淀粉(HES)3种抗冻剂,配制4种冷冻保护液:CP1(12%D)、CP2(10%P)、CP3(8%D 6%E)、CP4(7%P 6%E),冷冻细胞存活率分别为47.4%±4.7%、64.4%±3.6%、54.7%±4.7%、76.7%±5.7%,CP4保存效果最好,说明添加非渗透型抗冻剂羟乙基淀粉能提高冷冻保存细胞的存活率。比较了两种冷冻方法,发现细胞在-7℃平衡30min之后直接投入液氮的一步冷冻降温法是可行的。对不同发育时期的胚胎细胞冷冻存活率进行了比较,结果表明原肠细胞冷冻存活率(64.4%±11.8%)明显比囊胚细胞的(57.1%±11.2%)高(P<0.05)。用冷冻复苏后的囊胚细胞和原肠细胞作供体,以中华鲟未受精卵作受体进行核移植,各移植了469和392枚卵,分别获得了5尾和2尾克隆鱼,核移植成功率分别为1.1%和0.5%。表明可通过冷冻保存胚胎细胞结合核移植技术保存鱼类种质资源。     

三倍体方正银鲫(古)同二倍体红鲫(早)杂交胚胎的非整倍体发育

根据囊胚细胞和原肠胚细胞染色体数的观察，三倍体雄性方正银鲫Carassius auratus gihelio)和二倍体雌性红鲫(Carssius auratus red variety)杂交获得的胚胎，是杂合的非整倍体胚胎，因此胚胎发育畸形，中途死亡。胚胎染色体数从50142，变异幅度很宽，86％以上胚胎细胞染色体数分布在56-105范围内，其中以染色体数为76—86的胚胎细胞最常见，占34％。     

淡水鱼类细胞库的构建↑（*）

以几种淡水养殖鱼的组织和胚胎为材料，经12一24个月的继代培养，先后建立T鲢尾鳍细胞晕(简称SCF)、鳙吻端细胞系(简称BHS)、团头鲂尾鲔细胞系(简称WCF)、银鲫囊胚细胞系(简称CGB)、鲤胚胎细胞系(简称CE)和太鳞副泥鳅胚胎细胞系(简称LB)。上述细胞的最适培养温度是25—28℃，细     

三倍体方正银鲫(■)同二倍体红鲫(■)杂交胚胎的非整倍体发育

根据囊胚细胞和原肠胚细胞染色体数的观察,三倍体雄性方正银鲫 Carassius auratusgihelio)和二倍体雌性红鲫(Carssius auratus red variety)杂交获得的胚胎,是杂合的非整倍体胚胎,因此胚胎发育畸形,中途死亡。胚胎染色体数从50至142,变异幅度很宽,86％以上胚胎细胞染色体数分布在56—105范围内,其中以染色体数为76—86的胚胎细胞最常见,占34％。     

家鸡囊胚细胞微量DNA提取方法的探讨

为了提取微量的家鸡囊胚细胞DNA应用于种蛋孵化前的PCR性别鉴定,本实验应用Chelex-100法、常规试剂提取法、DNA试剂盒提取法进行微量囊胚细胞的DNA提取,并应用W染色体性别鉴定引物进行PCR鉴定。结果表明,3种方法均能提取适合于PCR的模板,其中以Chelex-100法提取的效果最好,最小细胞数为10个,其次为常规试剂提取法和DNA试剂盒提取法,最小细胞数分别为50个和1200个。本研究对微量家鸡囊胚细胞DNA提取方法进行了大量的摸索和改进,为家鸡种蛋孵化前性别鉴定技术研究奠定了一定的基础。     

猪细胞核移植研究进展

哺乳动物核移植研究,已取得了突破性进展,但由于猪细胞核核移植的难度较大,有关猪的报道较少。由于猪胚胎卵裂球脂滴太多,Nagashima等眼2演通过离心处理并用显微操作技术去除细胞内脂滴,再进行冷冻,解冻后将胚胎分成单个卵裂球作为核供体,重构胚的囊胚发育率高于正常胚胎细胞核移植。猪细胞核移植中的几个关键问题是:卵母细胞的体外成熟、受精和培养,移核胚重构后核、质相互作用和细胞同期同步化,受体母猪的处理。     

天然雌核发育普安鲫(A型)细胞遗传学和血清电泳的初步研究

本文对贵州省普安县青山一带天然水体中的普安鲫(A型)作了细胞遗传学观察和血清电泳分析,发现它是天然雌核发育的鲫鱼,既不同于普通野鲫,也与已知的天然雌核发育方正银鲫和滇池高背鲫不是同一来源。     

镉对鲫外周血单个核细胞凋亡的诱导

以Cd2 浓度1.25mg·kg-1腹腔注射染鲫,以富含T、B、NK细胞及单核细胞的鲫外周血单个核细胞(PBMC)为效应细胞,用亚显微形态分析、单细胞凝胶电泳(SCGE)、DNA凝胶电泳和流式细胞术(FCM)等方法进行Cd2 诱导鲫PBMC凋亡的研究。电镜显示染镉细胞的染色质边聚、中聚并向胞浆突出和断裂,胞浆内细胞器结构不清晰并见许多大小不等的空泡;对照细胞的核呈马蹄形,染色质分布均匀,胞浆内细胞器结构清晰可辨。SCGE显示染镉细胞呈现DNA边聚化的彗星小头及DNA片段移动形成的彗星尾,对照细胞的核骨架边缘清晰;染镉处理14、17和21d的细胞凋亡率分别为19.4%、16.4%和5.6%,明显高于对照组(1.1%)(P<0.05)。DNA凝胶电泳显示染镉细胞出现180～220bp整数倍的DNA梯状带,14和17d的梯状带较21d明显;对照细胞的DNA为一条带。FCM显示染镉细胞的亚二倍体峰清晰可见,对照细胞的亚二倍体峰几乎看不见;染镉处理14、17和21d的亚二倍体峰细胞量分别为17.5%、23.6%和8.2%,明显高于对照组(1.4%)(P<0.05)。因此,体内染镉可诱导鲫PBMC凋亡并在14～17d达到峰值,21d时则可能由于DNA的损伤修复而得以缓解,由此推测镉诱导鲫PBMC凋亡是其致细胞病变死亡的重要表现形式之一,低浓度镉致鲫免疫系统损伤,极有可能通过直接诱导免疫细胞凋亡而实现。     

黄芪多糖和当归多糖对维氏气单胞菌诱导鲫细胞凋亡的影响

为研究黄芪多糖(APS)和当归多糖(ASP)对维氏气单胞菌诱导鲫细胞凋亡的影响,实验设阴性对照组、阳性对照组,黄芪多糖组和当归多糖组,通过对鲫用维氏气单胞菌攻毒处理,用流式细胞仪测定血细胞的凋亡比例和细胞周期变化,并用荧光显微镜和透射电镜观察凋亡细胞的形态。结果显示,维氏气单胞菌攻毒后阳性对照组鲫血细胞的细胞凋亡率均极显著高于多糖组和阴性对照组;多糖组能显著降低鲫的细胞凋亡率且黄芪多糖组效果更显著;攻毒后鲫肝细胞和肾脏淋巴细胞出现染色质凝集、细胞核固缩边集和细胞空泡化及凋亡小体;同阴性对照组相比;维氏气单胞菌攻毒可以引起鲫血细胞周期中S/G2+M期细胞比例极显著下降,sub-G1极显著升高,抑制细胞分裂诱发凋亡;多糖组则G0/G1期细胞极显著降低,S/G2+M期细胞极显著升高,sub-G1极显著降低,促进细胞分裂抑制凋亡。黄芪多糖和当归多糖添加量在1%时能抑制维氏气单胞菌攻毒引起的细胞凋亡。     

鱼类细胞的旋转管培养法

用圆柱形细胞培养瓶,对草鱼吻端组织ZC—7901细胞适应旋转培养条件进行了研究,测定了细胞接种浓度、旋转速度及细胞生长速度等有关参数。试验表明ZC—7901细胞能适应于旋转培养,适应后的细胞对草鱼出血病病毒仍具有敏感性。     

牙鲆鳃细胞与中国对虾淋巴细胞杂交细胞的体外培养

利用ＰＣＧ介导的细胞融合方法，将已成系的牙鲆鳃细胞与中国对虾淋马细胞进行细胞杂交，对所获得的杂交细胞用ＭＥＭ：ＭＰＳ（１：１）混合培养液进行体外培养，培养５天后发现，杂交细胞长成了单层，传代培养后仍可继续生长和分裂，通过逐渐提高混合培养液中ＭＰＳ的所占比例所筛选出的杂交细胞，目前已传１２代，生长和分裂势头仍然十分旺盛，通过接种对虾杆现毒发现，１０天后杂交细胞出现了明显的病变特征（细胞收缩变团圆，脱落，死亡），至１４天细胞使几乎完全脱臂死亡，取病变细胞的培养上清０.3mL再加入到一瓶已长成单层的杂交细胞中，结果５天后杂交细胞也出出了明显的病变特和下，而未接种病毒的对照组杂交细胞生长正常，可禄步认为我们所得到的杂交细胞确为对虾（杆状）病毒的靶细胞。     

成年似鲇高原鳅外周血细胞及血细胞发生的观察

通过对成年似鲇高原鳅(Triplophysa siluroides)外周血细胞涂片及中肾、肝脏和脾脏组织的印片进行瑞氏(Wright’s)、过碘酸雪夫氏(PAS)和苏丹黑B(SBB)染色,观察各类血细胞形态、大小、分布及细胞化学特征。结果表明:似鲇高原鳅血细胞可分为红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞,各类血细胞的发生(除血栓细胞)均可分为原始、幼稚和成熟三个阶段。外周血中红细胞比例最多,为97.56%,白细胞中血栓细胞数量最多占52.86%,居白细胞的首位;三种粒细胞中嗜中性粒细胞数量最多占30.25%。粒细胞的主要发生场所在中肾占45.18%,红细胞的主要发生场所在脾脏,占71.62%,肝脏中未见原始血细胞。在中肾中同时可见嗜酸性、嗜碱性和嗜中性三种粒细胞的发生。各阶段的白细胞PAS染色均显示阳性,但只有各阶段的粒细胞SBB染色显示阳性。     

Cryopreservation of trout primordial germ cells

A method for cryopreserving trout primordial germ cells (PGCs) was established. Trout PGCs were successfully cryopreserved with high survival by freezing with medium containing 1.8 M ethylene glycol. Transplantation experiment revealed that frozen/thawed PGCs colonized and proliferated in the recipients' gonads.     

鲤鱼尾鳍细胞的体外培养及其生长状态的研究

采用组织块培养法，对鲤鱼尾鳍组织进行培养，在28℃温度下，用添加20％胎牛血清的M199培养基进行培养，在此过程中，对培养的细胞进行观察及研究，描述了细胞形态及其它相关细胞生物学特征。     

粗唇鮠外周血细胞的显微结构

应用常规血涂片Giemsa和Wright染液联合染色,利用NikonDXM1200数码显微摄影系统进行观察,可见到粗唇鮠血液的红细胞、未成熟红细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、血栓细胞等。在观察的基础上对各类型外周血细胞显微结构进行描述并展开讨论。     

供体细胞的不同处理及重组胚化学激活对体细胞克隆胚胎发育的影响综述

哺乳动物体细胞克隆经过几年的发展,已取得了很大进展。已有多种细胞被采用并得到了克隆后代。但动物克隆效率仍然很低,供体细胞的选择和重组胚激活是动物克隆中的重要步骤。供体细胞的细胞周期、细胞类型、冷冻处理和化学激活等方面都可能影响动物克隆的效率。     

硬骨鱼肥大细胞的研究进展

有关肥大细胞，在某些啮齿动物及人类中研究已比较深入，但在鱼类及其他低等脊椎动物中研究较少。硬骨鱼(teleostean fish)肥大细胞(MC)，常被称为嗜酸性颗粒细胞(EGC)，或肥大细胞／嗜酸性颗粒细胞(MC／EGC)，本文对有关研究进展作一综述并对硬骨鱼肥大细胞的发生、组织化学性质、细胞颗粒介质及其在鱼类健康与疾病中可能的功能意义等进行讨论，旨为深入研究鱼类重大疫病的发生机理提供基础依据。     

长鳍裸颊鲷外周血细胞的显微结构

报道了长鳍裸颊鲷(Lethrinus erythropterus)外周血细胞的显微结构。血涂片经过WRIGHT氏染色,在Olympus BX51显微镜下观察,可鉴别出红细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、血栓细胞和单核细胞等7种类型的血细胞。红细胞数量最多,多为椭圆形,具有圆核;在白细胞中,数量多少依次是血栓细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞,嗜碱性粒细胞在外周血液中很罕见。血栓细胞体积最小,嗜中性粒细胞最大。淋巴细胞包括小淋巴细胞、中淋巴细胞和大淋巴细胞3种。