低能离子射线诱变桑黄菌株SH009的初步研究

采用低能离子射线诱变原生质体选育桑黄菌株SH009,在确定诱变剂量效应曲线的基础上选择了1.5×1015 ions/cm2氮离子的诱变处理剂量.经过对诱变原生质体单个再生菌落的筛选,得到8株变异株,选取生长速度较快的5个菌株进行摇瓶培养,这5个菌株的菌丝体多糖和总黄酮产量均比出发菌株有所提高,其中P4的多糖和总黄酮产量分别比出发菌株提高了87.76%和73.24%.5个诱变菌株经平板传代5代以后的生长速度均保持稳定,无明显回复突变.结果表明,采用低能离子射线诱变桑黄菌株是一种有效的诱变育种方法.     

桑黄航天诱变菌株的筛选及黄酮提取工艺的优化

以桑黄菌株为试材,采用航天诱变的方法,通过多代分离、纯化得到109株诱变菌株。对诱变菌株编号后培养,通过宏观菌落观察、微观菌丝比较和拮抗试验,初步筛选出47株桑黄诱变菌株,比较诱变菌株与出发菌株H0母种生长速度,发现9株诱变菌株的速度显著大于出发菌株。采用液体发酵培养方法比较菌丝生物量,优化桑黄液体发酵菌丝黄酮的提取工艺后比较诱变菌株的黄酮产量,以期为桑黄航天诱变育种提供参考依据。结果表明：诱变菌株H68具有生长速度快、长势好、菌丝黄酮产量显著高于出发菌株的特点。经鉴定,H68属于桑黄孔菌属,GenBank登陆号MN153566.1,同源性99.85%,判定为出发菌株H0的航天诱变株。     

利用常压室温等离子体诱变技术选育高产黄酮的桑黄菌株

为提高桑黄(Phellinus baumii)黄酮生产能力,利用常压室温等离子体(atmospheric room temperature plasma,ARTP)技术诱变桑黄菌株SH1(出发菌株)的原生质体,经过筛选获得了3株高产胞内黄酮的优势菌株A67、A130、A157,与出发菌株相比,菌株A67、A130、A157液体发酵胞内总黄酮产量分别提高了86.7%、20.0%和60.0%。拮抗实验和RAPD分析显示3株优势菌株与出发菌株间存在遗传差异。TEAC(Trolox equivalent antioxidant capacity)和FRAP(ferric reducing antioxidant power)实验结果表明,A67菌丝体醇提物比出发菌株具有更好的体外抗氧化活性。本研究为桑黄属菌株的选育提供了高效可行的诱变方法,并为桑黄黄酮相关产品的开发和应用提供了优良的新菌株。     

药用真菌桑黄原生质体的制备和诱变

利用酶处理桑黄(Phellinus igniarius)菌丝体,分离到原生质体并对其进行紫外线诱变,确定诱变后的致死率,以利于桑黄原生质体诱变及融合的合理实施。菌龄为10 d的桑黄菌丝体在1.5%溶壁酶、100 r·min~(-1)、30℃条件下酶解3 h,获得原生质体;再分别经紫外线照射10 s、20 s、30 s、40 s、50 s、60 s、70 s、80 s、90s后;利用血球计数板对美兰染色后的活性原生质体计数,计算桑黄原生质体紫外诱变后的致死率。结果显示,原生质体致死率随着照射时间的延长而增大,在40 s~50 s诱变时间内,曲线的变化最为剧烈;诱变时间为45 s时,致死率达到73%;诱变时间达到90 s时,致死率为100%。该结果能够为桑黄原生质体诱变育种及融合育种的实施提供切实的理论依据。     

绣球菌的诱变育种和深层发酵工艺的初步研究

对绣球菌301、302进行紫外线诱变处理，以生长速度为指标进行初筛．再通过深层发酵进行复筛。综合分析菌丝体的生长量和胞内外多糖的产量．选出301—3、302—2为优选菌株。研究不同碳、氮源对诱变株301—3菌丝体生长和多糖产量的影响．认为淀粉、麦芽糖是较为合适的碳源：玉米粉和麸皮是较为合适的氮源。对碳氮源正变试验．确定最佳的培养基组成为：淀粉2．0％、麦芽糖0.4％、玉米粉0.6％、麸皮0.6％。     

蟹味菇原生质体高压电晕电场诱变的初步研究

以蟹味菇菌丝体为试验材料制备原生质体,并对其进行高压电晕电场诱变处理,以期从中筛选出优质突变菌株。结果显示,经4 kV诱变14 min、6 kV诱变5 min、6 kV诱变8 min、6 kV诱变10 min、8 kV 4 min诱变处理均可获得再生菌落,致死率在69.39%~95.92%,处理条件为4 kV 14min时致死率最低为69.39%。各处理组对比结果显示,高电压短时间处理组更易获得突变菌株,处理电压为6 kV时,处理时间越长菌丝生长速度越快。从再生菌株中筛选出9株单个菌株进行后续试验。结果显示,5号、9号再生菌株生长至2.5 cm所需天数最短为4 d,较对照组缩短了20%的时间,且5号经8 kV诱变4 min的菌株整个培养过程生长速度提高了13.83%。说明对蟹味菇原生质体进行电致诱变处理,可获得生长速度较出发菌株加快的正向突变菌株,为蟹味菇菌种选育提供参考。     

富硒香菇菌种原生质体诱变选育

以香菇SD03为出发菌株，制备原生质体，经紫外线诱变原生质体，筛选诱变株，最后得到一株具有稳定遗传性的富硒香菇菌株SD73，经摇瓶培养和栽培后，对子实体中的硒含量进行分析，其硒含量可达38．64μg／g。     

原生质体紫外诱变选育猴头菌新菌株的研究

对猴头菌原生质体进行了紫外诱变处理，从中筛选出诱变株HT65，其摇瓶液体发酵菌丝收率达到21．61g／L，明显高于原始菌株。经过6代斜面继代培养并进行摇瓶液体发酵实验证明所得诱变株为比原始菌株更优秀的稳定高菌丝收率的适宜液体发酵培养的生产菌株。     

金针菇原生质体紫外诱变选育

本研究在最适条件下制备金针菇Ｙ１９和Ｗ０８８菌株原生质体，紫外线照射１分钟进行诱变处理，再生后挑选生长好的菌株，酯酶同工酶电泳分析表明，筛选出的菌株出现出发株没有的新酶带，证明其遗传物质发生了变化，与出发菌株相比，变异菌株生长速度提高２３．１￣５２．３％，出菇时间提早１０￣１４天。     

采用常压室温等离子体诱变技术选育高产多糖黑木耳菌株

为选育高产多糖的黑木耳（Auricularia auricula）菌株，以黑威单片作为出发菌株，采用常压室温等离子体（atmospheric and room temperature plasma, ARTP）诱变原生质体，经过3轮迭代诱变，从菌丝生长速度较快的诱变菌株中筛选多糖产量较高的菌株，通过5代继代培养测定菌株的菌丝生长速度稳定性，采用拮抗实验观察菌株间的拮抗情况，通过简单重复序列区间（inter-simple sequence repeat, ISSR）分子标记分析菌株间的遗传差异。结果表明：与黑威单片相比，诱变菌株D3-56的菌丝生物量和多糖含量分别提高15.02%和48.40%，诱变菌株D3-60的菌丝生物量和多糖含量分别提高13.15%和60.83%，诱变菌株D3-56和D3-60的多糖产量分别提高70.69%和81.97%；诱变菌株D3-56和D3-60菌丝生长速度稳定，且与黑威单片存在遗传差异。     

秋水仙素诱变对桑黄菌丝生长及活性成分的影响

以1.0%纤维素酶和0.5%蜗牛酶不同处理时间的桑黄菌丝为试材,采用0.1%秋水仙素诱变桑黄菌丝研究其诱变下桑黄菌丝再生菌株的生长速率以及多糖、黄酮和三萜等活性成分含量变化,以期获得生长快且活性成分含量高的菌种,以期为桑黄菌株选育、种质资源创新和应用奠定基础。结果表明:秋水仙素诱变后桑黄菌丝再生菌株的生长速率以及多糖、黄酮和三萜等活性成分含量基本呈增加趋势。其中,与对照相比,诱变酶解桑黄菌丝20 min获得的再生菌株20-1生长速率最快,增加了366.67%;三萜和多糖含量最高的再生菌株为10-5,分别增加了1069.73%和281.85%;多酚含量最高的再生菌株为5-1,增加了530.56%;黄酮含量最高的再生菌株为30-1,增加了3771.43%。     

桑黄原生质体的制备与再生研究

为了了解不同桑黄分离的原生质体活力、产量和再生能力是否相同,采用酶解法处理桑黄菌株菌丝体获得原生质体。比较分析五种生长在不同树种上的桑黄菌丝的原生质体活力和产量、葡萄糖和p H对原生质体再生的影响,并对暴马丁香桑黄原生质体释放与再生过程进行显微摄影观察。结果显示:暴马丁香桑黄的活力与产量最高分别为81.82%和3.85×105个/m L。在p H 7、葡萄糖浓度为30 mg/m L时,暴马丁香桑黄原生质体再生率达最高,分别为23.67%和19.33%。初步摸索通过酶解法制备桑黄原生质体和原生质体释放与再生的过程。     

生防木霉菌株Tr10诱变改良

利用亚硝酸盐和紫外线复合诱变对生防木霉菌Tr10进行了改良。采用平板对峙法、摇瓶液体发酵法、发酵产物平板活性测定法研究了突变株的生长速度、拮抗作用、代谢产物的抑茵活性和突变株的遗传稳定性。研究结果表明.适宜诱变条件是0.01mol／L亚硝酸溶液诱变20min，然后在距20W紫外灯20cm处照射3min；遗传稳定突变株NUV147和NUV218生长速度分别是出发菌株的2倍和2.1倍，产孢量显著增加，突变株对病原菌的拮抗作用增强，拮抗机制没有变化。     

原生质体紫外线诱变选育无孢高产平菇的研究

本研究对无孢平菇菌株P22原生质体进行紫外线诱变处理,经拮抗试验,孢子印检测,扫描电镜和出菇试验,筛选出一株中低温型、高产、菇形好的无孢平菇突变菌株4-10。品比结果显示,4-10新菌株两年平均生物效率达112％,较出发菌株P22增产19.8％,较对照菌株P51增产22.7％。研究结果表明,原生质体紫外线诱变是一种快速简便且有效的育种方法。     

深层发酵灰树花菌株的诱变筛选

以灰树花Ｇｒ９８０１为出发菌株，采用紫外线连续诱变、分离纯化、驯等方法，以斜面生长速度和液全摇瓶发酵产多糖总量为监测指标，筛选出一株遗传上相对稳定的适应液体培养的灰树花菌株－ＧｒＵｖ０４，该菌株在综合ＰＤＡ培养基上生长速度快，菌体丰满纯白。经驯化后在液体培养基中发酵生长力强，生物量达１．９７％，发酵多糖总量达２１６ｍｇ／１００ｍＬ，分别较出发菌株提高１２９．１％和７５．６％。     

猴头菇菌株比较试验

以引进和自有保藏的猴头菇菌株共8株，在江苏地区进行品比试验。通过进行猴头菇菌株的菌丝在固体培养基上生长速度、菌丝液体发酵生物量以及出菇产量和农艺性状的比较．筛选到一株产量较高性状较好的猴头菇品种（中国农科院保藏号CAHHFT一7010），为进行适合本地栽培的猴头菇新菌株诱变选育提供了出发菌株。     

N＋注入诱变技术在杏鲍菇新菌株选育中的应用

利用N＋注入杏鲍菇菌块,筛选高产新菌株。对N＋注入后的杏鲍菇菌块进行培养,测量菌丝生长速度和菌丝生物量,通过出菇试验进行产量比较。结果表明N＋注入时间的长短对菌丝生长速度、菌丝生物量、子实体产量的影响存在很大差异,筛选出1株高产菌株,产量比对照提高了17．43％。获得的诱变高产菌株,可为杏鲍菇的工厂化栽培提供技术支撑。     

灰树花多糖高产菌株诱变选育研究

采用原生质体紫外诱变法选育灰树花多糖高产新菌株,经过大量的诱变筛选试验,获得一株灰树花新菌株,其液体摇甁发酵试验菌丝体生物量和胞内多糖产量分别达到1.15 g/100 m L和0.78 g/L,在同样条件下比出发菌株提高了40.2%和37.5%,且遗传性状稳定,有望作为优良菌种应用于液体深层发酵法制备灰树花多糖的工业化生产中。     

滲透压稳定剂对桑黄菌原生质体分离与再生的影响

用6种无机盐和有机糖醇作渗透压稳定剂，研究桑黄菌原生质体的分离与再生情况。结果表明，用不同的酶解渗透压稳定剂，桑黄菌原生质体的分离产量差异很大，体积形态也有差异。酶解和培养基渗透压稳定剂对桑黄菌原生质体的再生有显著影响，甘露醇为培养基渗透压稳定剂时再生率较高。     

低能N~+离子注入诱变选育云芝高产抗病菌株的研究

应用低能N+离子注入筛选所得高产抗病融合云芝菌株原生质体进行诱变,以获得一株产量更高,抗病性更强,适用于栽培的诱变菌株。试验确定了低能N+离子注入的适宜参数:注入剂量为9×1014ions/cm2,注入能量20 KeV,靶室真空度10-3Pa,以5 s脉冲式注入,间隔时间为15 s。离子注入后,筛选酯酶同工酶酶谱存在显著差异和拮抗实验呈阳性的突变菌株,分别以液体发酵生物量及固体栽培子实体转化率、对病菌平均抗性水平为初筛和复筛标准,经遗传稳定性实验验证,筛选到了一株云芝高产抗病菌株,其子实体产量较对照菌株提高了10.3%,抗病水平提高了5%。结果表明:低能N+离子束注入是一种较为理想的云芝诱变育种手段。