茯苓菌丝体胞外多糖的脱蛋白方法研究

以蛋白质脱除率和多糖损失率为考察指标,研究比较了Sevag法、三氯乙酸法、酶法、酶-Sevag法对茯苓菌丝体胞外多糖脱蛋白效果的影响.结果表明:酶-Sevag法是较佳的脱除茯苓菌丝体胞外多糖中蛋白质的方法,酶用量1.5％,温度50℃,pH 6.5,脱蛋白2h,Sevag法脱蛋白3次,蛋白质脱除率为87.43％,多糖损失率为10.97％.     

茯苓多糖提取方法研究

利用正交实验优选茯苓中茯苓多糖的提取方法。以茯苓多糖为评价指标,采用正交实验法对茯苓多糖提取过程中的提取工艺进行优选。结果表明:提取方法、稀碱浓度、稀碱用量、茯苓粉碎的粒度、提取时间、提取次数对茯苓多糖的提取均有影响。最佳提取方法为超声法;最佳提取工艺条件为:氢氧化钠浓度为1 mol/L,氢氧化钠的用量为100倍,茯苓的粉碎粒度为40目,提取3次,每次1 h。     

羧甲基茯苓多糖（CMP）的制取及鉴定

茯苓[Poria cocos(Schw.)Wolf]菌核经稀碱提取,中和,羧甲基化,透析,Sevage法除去蛋白质,醇析和Sephadex G-20柱层纯化后得羧甲基茯苓多糖(Carboxymethylpachymaran,CMP)。对CMP进行理化鉴定,UV分析表明,CMP无核酸,蛋白质的特征吸收峰;IR分析表明,CMP有糖的特征吸收峰;纸层析表明,CMP仅山羧甲基葡萄糖组成;~(13)C-NMR分析表明,CMP是β-构型的葡聚糖,分子量(MWt)为3.8×10~4。     

羧甲基茯苓多糖诱导物的药用

茯苓 Poria cocos(Schw.) Wolf 具有利水渗湿、健脾宁心的功效。但是,β-茯苓聚糖占茯苓菌核的93％,却无抗肿瘤作用,如果把茯苓中的聚糖提取出来,使之转化成为羧甲基茯苓多糖(Carboxyme-thylpachymaran,CMP),就具有抗肿瘤作用。笔者1979年采用液相不振荡半合成工艺成功地制取了CMP,药理试验证明,CMP具有抗肿瘤、免疫调节、保肝降谷-丙转氨酶、减轻化放疗副反应的作用,毒理试验证明,CMP无不良毒副反应和无致畸无致突变结果。苏州医学院基因工程研究室的试验证明,CMP能诱导人白细胞产生α-干扰素(*~α-Interferon, α-IFN)、γ-干扰素(γ-Interferon, γ-IFN)、白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(Tumor mecrosis factor, TNF)和粒-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)等分子免疫物质。本文报道苏州医学院基因工程研究室应用笔者提供的CMP所诱导的细胞因子(分子免疫物质)的药用。     

茯苓木腐特点的研究

测定了茯苓在松木屑-麦麸基物上生长期间,基物失重及木质纤维素的降解和有关酶活性的变化规律。实验结果表明: 1.茯苓菌分解木屑的能力较强。培养100天时,呼吸作用消耗掉的有机质达38～39％,基物中纤维素降解了46.32％,半纤维素降解了58.41％,但木素降解量极低。由此可见,茯苓菌主要是利用植物体中的纤维素和半纤维素,是一种褐腐型木材腐朽菌。 2.茯苓降解松木屑具有一定的阶段性。0—45天期间呼吸消耗的基物有机质和纤维素,半纤维素的降解量较多,在基物中茯苓菌核类物质开始产生时(45天左右),纤维素和半纤维素降解速率明显下降,呼吸强度也明显降低。 3.茯苓在生长发育过程中能向基物中释放胞外CMC酶、FP酶、木聚糖酶和淀粉酶。初期酶活性较低,在菌丝体向胞外释放菌核类物质时,4种酶活性明显上升,直到培养100天酶活性仍处于高峰水平。     

关于茯苓多糖提取的研究

阐述温度、料液比、提取用时等对茯苓多糖提取的影响,经试验分析得到较优茯苓多糖提取工艺:提取温度90℃,提取时间为7.4 h,水料比为9.4倍。经过测算和试验验证,在此条件下,多糖得率为0.758%。     

刺芹侧耳下脚料水溶性细胞壁多糖碱提工艺优化及活性分析

采用碱提法提取刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)下脚料水溶性细胞壁多糖,以得率、多糖含量和β-葡聚糖含量为主要指标,对提取过程中的碱液浓度、料液比、提取温度和提取时间等因素进行考察,优化的提取工艺:1 mol/L的NaOH溶液为提取溶剂,料液比1∶20(g∶mL),提取温度30℃,提取时间4 h,在此条件下,所得水溶性细胞壁多糖组分得率6.25%,多糖含量74.56%,β-葡聚糖含量56.37%。高效凝胶尺寸排阻色谱-多角度激光光散射-示差折光检测仪联用法(HPSEC-MALLS-RI)分析结果显示,该组分主要含4个峰,其中峰1和峰2对应的组分相对分子质量分别为1.36×10~7和2.68×10~6,峰3和峰4对应的组分相对分子质量分别为3.15×10~5和9.82×10~3;体外免疫活性检测结果显示,该水溶性细胞壁多糖组分具有刺激巨噬细胞释放NO和促进小鼠脾淋巴细胞增殖的活性。     

羧甲基茯苓多糖的生理活性

茯苓〔Poria cocos(Schw)Wolf〕作为一种传统的中药而负有盛誉。随着现代科学的发展,国内外学者发现茯苓干品中β-聚糖占93％。但是,茯苓在沸水中提取率不过1％,而未经化学结构改造的茯苓聚糖没有抗肿瘤作用。为了使茯苓多糖体的生理活性增强,并使之溶于水,必须把结构改造后的茯苓多糖进行羧甲基化。笔者于1979年采用不振荡工艺成功地制取了羧甲基茯苓多糖,现将其多种生理活性,分述如下。羧甲基茯苓多糖的抗肿瘤作用     

哈茨木霉β-葡聚糖酶诱导、纯化及对黄瓜幼苗的促生防病作用

在实验室条件下分别以β-葡聚糖、麦麸和黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)细胞壁作为唯一碳源诱导哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum)Th-30发酵产生β-葡聚糖酶,采用硫酸铵盐析和琼脂糖凝胶色谱柱层析法对β-葡聚糖酶进行分离纯化,以津研4号黄瓜为试验材料,探究β-葡聚糖酶对黄瓜幼苗抗性生理指标、形态指标的影响及黄瓜常见土传病害的防控作用。结果表明：不同诱导条件下木霉Th-30发酵产β-葡聚糖酶活性差异显著,经β-葡聚糖诱导发酵的粗酶液酶活性最高,发酵72 h时达75.63 U·mL^-1;纯化的β-葡聚糖酶比活力为783.56 U·mg^-1,是粗酶液的45.32倍;5倍液和10倍液β-葡聚糖酶可显著提高黄瓜幼苗的根系活力、游离脯氨酸含量、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性以及根冠比和壮苗指数;β-葡聚糖酶10倍液处理对黄瓜立枯病、黄瓜枯萎病、黄瓜疫病、黄瓜猝倒病、黄瓜菌核病的防效为50.36%～80.63%。     

云芝多糖提取工艺的研究比较

对酶法、超声波法提取云芝子实体多糖进行了比较,试验结果表明,采取酶超声波联用提取云芝多糖的得率最高,达到4．98％,通过正交试验优化了提取条件：纤维素酶浓度1．5％,酶解温度为55℃,酶解时间20min,溶剂pH值为6．5,超声提取时间为20min,料液比1：25,提取温度65℃。     

农杆菌介导的几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转化辣椒研究

以苗龄7～10 d的辣椒组培苗为被侵染的外植体,通过农杆菌介导几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因,研究基因型、外植体类型、抗生素浓度对辣椒遗传转化的影响,以期获得抗真菌病的转基因辣椒植株.结果表明:不同基因型间、外植体类型、抗生素种类和浓度对辣椒的遗传转化影响存在较大差异.以几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对辣椒进行了遗传转化,获得了3株抗性植株.     

湿法超微粉碎提取石斛多糖的研究

以铁皮石斛为试材,采用湿法超微粉碎提取石斛多糖,通过单因素试验研究了磨齿磨隙、固液比、提取温度、提取时间对多糖得率的影响,在此基础上,采用正交实验对石斛多糖提取工艺进行了优化.结果表明:胶体磨齿磨隙30 μm、固液比1∶ 14 g/mL、提取温度70℃、提取时间31 min时,石斛多糖得率可达16.48％.表明湿式超微粉碎是一种有效的提取石斛多糖的方法.     

响应面优化微波法提取桑枝多糖的最佳工艺研究

以桑枝为试材,采用微波法,进行了微波功率、微波时间及固液比对多糖得率单因素影响试验;在此基础上,采用响应面法对各提取条件进行了优化,以期筛选桑枝多糖的最佳工艺条件.结果表明:最佳提取工艺为微波功率400 W、微波时间6min、固液比1∶20(g∶mL),桑枝多糖得率达到2.81％.表明微波提取法是一种适宜桑枝多糖提取的方法.     

微量元素对生防木霉菌T23生长量及三种酶活性的影响

用常规试验方法研究7种微量元素Mn2 、Ca2 、Mg2 、Cu2 、Zn2 、Fe2 、Mo6 对木霉菌T23生长量以及β-1,3-葡聚糖酶、纤维素酶和几丁质酶的影响.结果表明:Mn2 、Ca2 、Mg2 、Cu2 、Zn2 、Fe2 对木霉菌T23菌丝生长和产孢量均有促进作用;Cu2 、Ca2 、Mn2 、Zn2 、Fe2 、Mo6 对木霉菌T23产生β-1,3-葡聚糖酶有激活作用,但Mg2 对其产生β-1,3-葡聚糖酶有明显的抑制作用;同时还发现Mg2 、Cu2 对木霉菌T23产纤维素酶有促进作用,其他微量元素对木霉菌T23产生纤维素酶有抑制作用;Zn2 对其产生几丁质酶均有明显的促进作用,Mln2 、Ca2 抑制其产生几丁质酶.由此可见,微量元素通过促进木霉菌T23的生长、产孢及提高β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶的活性,从而提高其生防效果.     

响应面优化酶法辅助提取边麻菇多糖工艺

为了优化酶法辅助提取边麻菇多糖工艺条件,通过单因素试验,研究液固比、酶解时间、pH值和酶复合剂用量对多糖得率的影响,并在此基础上采用响应面法优化提取条件。结果表明:液固比21,酶解时间62 min,pH值5,酶复合剂质量分数1.65%,3次重复验证试验平均多糖得率为(10.96±0.12)%;优化的酶法提取边麻菇多糖的工艺简便易行,可作为边麻菇多糖的提取工艺。     

响应面法优化超声提取地皮菜多糖工艺研究

以地皮菜为试材,在单因素试验的基础上,选择液料比、超声温度、超声功率、超声时间4个因素,利用Design-Expert 7.1.6软件Box-Benhnken中心组合试验和响应面分析法,研究了各自变量交互作用对地皮菜多糖得率的影响,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,研究了响应面法优化超声辅助提取地皮菜多糖工艺.结果表明:地皮菜多糖的最佳超声提取工艺是液料比31.50:1(mL/g)、超声温度90.00℃、超声功率526.50W、超声提取时间24.00 min.地皮菜多糖得率实测值为22.54％,与预测值22.73％相符良好.     

长白山产软枣猕猴桃茎叶多糖提取及抗氧化活性

以长白山产软枣猕猴桃茎、叶为原料,以茎叶多糖得率为指标,利用超声提取叶多糖微波提取茎多糖,通过单因素试验和响应面试验优化最佳提取方法,得到茎、叶多糖最优提取条件。结果表明:茎多糖提取工艺为微波时间40min、微波功率315W、液料比59mL·g~(-1),茎多糖得率为2.85%;叶多糖超声提取工艺为超声时间40min、液料比为40mL·g~(-1)、超声提取功率为900 W,在此条件下叶多糖得率为4.50%;提取得到的茎、叶多糖均具有清除DPPH自由基的能力,可以作为一种天然的抗氧化剂进一步开发利用。     

超高压提取鱼腥草多糖最佳工艺研究

为研究超高压提取鱼腥草多糖最佳工艺条件,在单因素试验基础上,采用L9 (34)正交实验设计对鱼腥草多糖超高压提取工艺进行了优化研究,以期考察料液比、超高压压力、加压时间对多糖得率的影响.结果表明:固液比1:20 g/mL、超高压压力320 MPa,超高压时间4.5 min条件下,多糖得率可达5.850％,该法是一种提取鱼腥草多糖的较好方法.     

高温高压水提取灵芝β-葡聚糖工艺优化

目的:优化高温高压水提取灵芝β-葡聚糖的工艺条件。方法:采用单因素试验筛选关键因素,正交试验探索最佳提取因素水平。结果:高温高压水提取灵芝β-葡聚糖的最佳工艺条件为料(g)液(mL)比1∶15,提取温度为135℃,时间为60 min,次数为3次,β-葡聚糖的提取率为3.824%,提取物中β-葡聚糖的质量分数为27.03%。结论:高温高压水提取灵芝β-葡聚糖的提取率和β-葡聚糖质量分数均高于热水浸提法、超声辅助提取法、微波辅助提取法和酶法辅助提取法,并且高温高压水提技术适用工业化生产。     

微波协同酶法提取玫瑰花渣多糖工艺优化

为有效解决玫瑰花渣多糖提取率过低的问题,本试验创新性地采用微波协同酶法提取玫瑰花渣多糖,通过单因素试验、正交试验优化提取工艺。结果表明,微波协同酶法提取玫瑰花渣多糖的最佳工艺为纤维素酶添加酶量4.2%,酶解温度50℃,酶解pH值4.4,微波功率650 W,微波处理时间4 min,料液比1:30,此时多糖得率为6.53%。其中酶解温度和微波功率是主要影响因素。与传统热水浸提法、微波法、超声法、酶法等提取方法比较,该方法提取条件温和,多糖得率较高。