嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖的分离提取

分别采用超声波法、溶菌酶法、三氯乙酸法对嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖进行分离提取.结果表明超声波法的最优组合为超声功率400 W,超声时间30 min,水浴温度40℃,肽聚糖得率10.2%;溶菌酶法的最优组合为溶菌酶添加量4 mg/mL,水浴温度55%,作用时间5 h,pH 7,肽聚糖得率10.0%;三氯乙酸法肽聚糖得率15.8%.通过多重比较,最终确定采用三氯乙酸法提取嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖.     

超声波破碎法提取多食鞘氨醇杆菌中17β-雌二醇降解酶的优化及酶学性质

采用超声波破碎多食鞘氨醇杆菌细胞壁的方法提取雌二醇降解酶,通过单因素条件研究确定各因素对超声波破碎影响的高低,依据Box-Benhnken设计原则对破碎条件进行响应面回归模型分析(RSA)。研究得到最佳条件为:菌体浓度188 mg/mL,破碎功率400 W,总破碎时间29 min(超声3 s,间隔5 s),认为破碎功率对超声波破碎的影响最大。预测破碎后得到的粗酶液总酶活力为1.484 U,实际测得的粗酶液酶活力为1.477 U。根据试验结果认为:采用超声波破碎方法可以较好地提取氨肽酶,运用响应面分析法优化超声波破碎条件是可行的。     

纳豆芽孢杆菌对健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液粘附的研究

[目的]研究纳豆芽孢杆菌在对健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液粘附中的作用。[方法]应用5 mol/L LiCl提取纳豆芽孢杆菌表面蛋白,利用蛋白印迹法鉴定在纳豆芽孢杆菌表面蛋白中分子量及参与粘附的特异蛋白。[结果]对提取的纳豆芽孢杆菌表面蛋白进行SDS-PAGE后,发现仅出现一条明显的主要蛋白条带,分子量为29.58 kDa。经蛋白印迹分析,该蛋白质参与了健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液的粘附过程;纳豆芽孢杆菌全菌蛋白在健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液中有一个相同的粘附受体,蛋白分子量为13.91 kDa;健康个体还有一个粘附受体,分子量是29.86 kDa。[结论]纳豆芽孢杆菌的表面蛋白在对牙鲆肠粘液的粘附过程中起着重要作用。     

两歧双歧杆菌完整肽聚糖的质量评价

利用复合酶法提取两歧双歧杆菌细胞壁中的完整肽聚糖(Whole Peptidoglycan,WPG),并对所提取的WPG纯度进行测定。分别制备葡萄糖和蛋白质标准曲线,对总糖含量和蛋白质含量进行测定。总糖含量和蛋白质含量分别为34.36%和47.15%,说明制备出的肽聚糖纯度较高。     

贝莱斯芽孢杆菌总RNA提取的Trizol改良法

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)是在农业、环境和发酵工业等领域具有重要应用潜力的细菌。但芽孢杆菌属细菌具有较厚的细胞壁且分泌蛋白多,常规方法难以抽提到高质量的总RNA。因此,建立和优化简便有效的贝莱斯芽孢杆菌总RNA提取方法,将为B.velezensis基因表达和功能研究提供重要的技术支撑。通过优化传统Trizol法,对菌体培养条件、菌体洗涤次数、液氮冷冻处理和溶菌酶裂解菌体方法进行改良,建立了一种简便有效的B.velezensis总RNA提取方法。     

纳豆芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶基因的克隆、表达及酶活性测定

纳豆芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶(GDH)是纳豆发酵产氨的关键酶.本文以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板,根据枯草芽孢杆菌的GDH编码基因(RocG)序列设计引物,进行PCR扩增,再经pMD19-T质粒TA克隆,获得了全长为1275 bp、与RocG基因同源性为98%的纳豆芽孢杆菌GDH的编码基因.构建原核表达载体pET28a-GDH,转化至E.coli BL21(DE3)进行体外诱导表达.表达的包涵体在超声破菌、变性、纯化和复性后,经SDS-PAGE分析得到了47 kDa的特异条带.纳豆芽孢杆菌GDH同时具有NAD+和NADP+依赖活性,酶活分别为6.7723 U·mg-1蛋白和9.4205 U·mg-1蛋白.     

溶菌酶种类及其在食品中的应用

溶菌酶广泛分布于动物、植物和微生物中,具有抗菌消炎、抗病毒、增强免疫力、促进双歧杆菌增殖等作用。溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖,使细胞壁变得松弛,细胞溶解死亡。溶菌酶在食品工业中有广泛的应用。     

微生物发酵法生产纳豆工艺条件的优化研究

采用微生物发酵法生产纳豆,并对纳豆的生产工艺条件进行优化研究.将从纳豆中提取出的纳豆芽孢杆菌接到蒸煮大豆中,对影响纳豆品质的发酵温度、发酵时间和后熟时间等因素进行考察,通过单因素与正交试验,确定了最优工艺条件:发酵温度35℃、发酵时间24h、后熟时间为24h.此时,水分、蛋白质及粘多糖含量分别为61.8%,19.34%...     

纳豆固体发酵和液体发酵条件的研究

[目的]确定纳豆固体发酵和液体发酵的最佳条件。[方法]以纳豆芽孢杆菌BN-4菌株为试材,研究纳豆固体发酵中大豆破碎程度、发酵时间和接种量等因素对纳豆芽孢杆菌的生长和酶活的影响,探讨液体发酵中细胞浓度、蛋白质浓度和酶活变化,确定纳豆固体发酵和液体发酵的最佳条件。[结果]纳豆固体发酵最佳条件为：大豆破碎2瓣、接种量8%、发酵时间24 h,纳豆激酶活力最高为976IU/g。在纳豆激酶液体发酵中,发酵最佳时间48 h时,纳豆激酶的蛋白浓度为178 mg/L,纳豆激酶酶活力为174 IU/g;纳豆杆菌活菌浓度、蛋白质浓度和纳豆激酶酶活之间具有很好的相关性,可以通过测定活细胞浓度来监控发酵进程。[结论]为纳豆的生产和纳豆激酶的纯化提供参考。     

褐飞虱类酵母共生菌菌体蛋白质提取方法的比较

为了筛选出适合褐飞虱Nilaparvata lugens类酵母共生菌蛋白质提取的细胞破碎方法,选择超声波破碎法、反复冻融法和液氮研磨法等3种细胞破碎方法提取共生菌吡虫啉敏感菌株和抗性菌株蛋白质。结果表明:菌体显微形态观察发现,使用超声波破碎法和液氮研磨法处理类酵母共生菌的细胞破碎效果均优于反复冻融法,处理后菌体分布均匀,破碎彻底;72 h是提取菌体蛋白质的最佳培养时间。定量分析表明:用超声波破碎法提取蛋白质质量浓度最高,液氮研磨法次之,反复冻融法提取蛋白质质量浓度的效果最差,各方法所提蛋白质质量浓度差异显著(P0.05)。培养72 h后,超声波破碎法、液氮研磨法和反复冻融法提取的蛋白质质量浓度分别为2.82 g·L-1,2.62g·L-1和2.12 g·L-1(敏感菌株)及2.64 g·L-1,2.53 g·L-1和2.05 g·L-1(抗性菌株)。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分析发现:超声波破碎法获得的蛋白质不仅得率高,且条带清晰,丰度好。液氮研磨法虽得率高,但蛋白质部分降解,条带不清晰;而反复冻融法获得的蛋白质得率最低。超声波破碎法更适合于褐飞虱类酵母共生菌的蛋白质提取,该研究为后续蛋白质的双向电泳实验和分离差异蛋白质提供技术支撑。     

纳豆芽孢杆菌的分离鉴定及纳豆激酶高产菌株的筛选

分别从北京、大连和日本三个产地的纳豆食品中分离纯化得到了9个具有纳豆芽孢杆菌典型菌落特征的芽孢杆菌单菌落,与模式菌株纳豆芽孢杆菌N1株分别从菌落形态、个体形态和生理生化试验三方面进行对比鉴定,结果表明,其中5株芽孢杆菌为纳豆芽孢杆菌。将这5株纳豆芽孢杆菌分别在酪素平板上划线初选,得到了298株具有蛋白酶活力的菌株,从中筛选出活性最高的5株命名为:NB、NC、ND、NE和NF,测定各株发酵液的纳豆激酶酶活力,结果表明NB、NC和ND3株具有较高纳豆激酶活性,酶活力分别达到了1041.37、1125.13和1804.64IU·mL-1。     

竹屑提取物的抑菌活性及其水解研究

以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌为供试菌种,研究了不同提取温度、时间对竹屑提取物抑菌效果的影响,考察了不同水解条件下还原糖的得率,初步分析了还原糖的种类。结果表明,以95%乙醇为提取剂,在温度为50℃下加热回流提取2.5 h得到的竹屑提取物的抑菌效果最好,总黄酮得率也最高(0.86%),说明总黄酮可能是竹屑提取物中主要的抑菌活性成分;竹屑提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为0.062 5、0.031 3、0.125 0 g/mL;在115℃下用4.5%稀硫酸水解1.5 h,总还原糖得率最高(66.57%);色谱分析表明,竹屑水解后的主要还原糖有阿拉伯糖、果糖、葡萄糖。     

纳豆芽孢杆菌脲酶酶学性质的研究

为了研究不同的碳源、氮源和不同的培养条件对纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)脲酶产量的影响,以及不同温度、pH和几种金属离子对脲酶活性的影响,采用了滴定法(国标法,标准号GB/T 1356787-1997)和Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定不同碳源、氮源和不同培养条件培养的纳豆芽孢杆菌(CGMCC No.2801)脲酶总活性和浓度,以及不同温度、pH和金属离子条件下的脲酶活性。结果表明,当以谷氨酸为氮源、蔗糖为碳源、pH7、37℃条件下培养12h时脲酶的浓度最高,为57.2μg/mL。脲酶催化反应的最适条件为35℃、pH 7。实验选用的5种金属离子对脲酶活性均有抑制作用,抑制强度为Cu2+Zn2+Fe2+Mg2+Mn2+,最大抑制率为36.4%。这些结果为纳豆芽孢杆菌脲酶的进一步研究及低产氨纳豆芽孢杆菌的构建奠定了基础。     

细胞破碎法提取草珊瑚总黄酮的工艺优化

采用单因素试验与L9(34)正交试验研究了超声波细胞破碎法提取草珊瑚总黄酮的最佳工艺条件,并与传统草珊瑚总黄酮提取方法进行对比。结果表明:超声波细胞破碎法提取草珊瑚总黄酮最佳工艺条件为乙醇40%、液料比1∶10(g∶mL)、提取功率450 W、提取时间40min,提取率达8.32%。与传统方法相比,超声波细胞破碎法提取草珊瑚总黄酮工艺简便、效率高,耗能小,得率比传统方法好,具有很好的应用前景。     

超声波法提取川楝黄酮的试验研究

以川楝子为原料,采用超声波法提取其中的黄酮类化合物,通过正交实验研究其最佳的提取工艺。研究结果表明,超声波法提取川楝子黄酮的最佳工艺为乙醇浓度50%、液料比1:40、超声波提取时间40min、温度80℃,黄酮得率为0.561%,明显高于相同条件下传统水浴提取法的得率0.294%,和在相同乙醇浓度、料液比、提取温度条件下微波法的得率0.278%,研究结果为川楝子的综合开发利用提供了理论依据。     

常见几种芽孢杆菌产淀粉酶的比较

探索地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌产生淀粉酶的能力,以筛选和研制动物微生态制剂和饲料添加剂的使用菌种。将各菌种接于淀粉酶试验培养基,培养后滴加稀碘溶液,观察透明圈,判定产酶能力。结果:地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌都能产生淀粉酶,以蜡样芽孢杆菌产生的淀粉酶较多,认为4种常见芽孢杆菌产淀粉酶能力依次为:蜡样芽孢杆菌>纳豆芽孢杆菌>枯草芽孢杆菌>地衣芽孢杆菌。     

纳豆芽孢杆菌剂对AA鸡生产性能和十二指肠消化酶的影响

研究报道了纳豆芽孢杆菌对AA鸡生长性能和十二指肠消化酶的影响。结果表明，纳豆芽孢杆菌剂能提高AA鸡生长性能，当添加量为200mg/kg时，平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)达到最大，分别比对照提高2．47g和5．11g。纳豆芽孢杆菌剂能提高十二指肠消化酶(总蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)的活力52．2％～89．2％。纳豆芽孢杆菌剂添加量对存活率影响不大。纳豆芽孢杆菌剂的最佳添加量为200mg/kg。     

苦楝果实提取物对几种芽孢杆菌的抑菌活性

将采摘的苦楝果实烘干、粉碎后,以甲醇为溶剂,用超声波法提取后,配成不同浓度的苦楝果实提取液,测定其对巨大芽孢杆菌、短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌4种芽孢杆菌的抑菌圈直径和抑菌百分率。结果表明:苦楝果实提取液浓度越高,其抑菌作用越强。苦楝果实提取液对枯草芽孢杆菌的抑菌活性最大,对短芽孢杆菌的次之,对巨大芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的抑菌活性最小。     

高产蛋白酶纳豆芽孢杆菌的分离筛选与鉴定

以北京、大连和日本3个产地的纳豆产品为试验材料,从中筛选可用于畜禽生产的纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)蛋向酶高产菌株.先通过酪蛋白平板初筛得到9株芽孢杆菌,再以N1型纳豆芽孢杆菌为模式菌株,对初筛得到的菌株进行菌落和菌体形态观察、生理生化鉴定,确定有5个菌株为纳豆芽孢杆菌.测定5个菌株48 h发酵液中蛋白酶活性,结果表明:菌株NB1为蛋白酶高产菌株,发酵液中蛋白酶活性为19.41 U·mL-1,产蛋白酶特性在6代内可保持稳定.     

蒺藜总黄酮和总皂苷提取工艺的优化

以中药蒺藜的总黄酮和总皂苷含量为筛选指标,分别对索氏提取法、微波辅助提取法、超声波提取法设计正交试验,比较3种方法对蒺藜有效成分的提取效率.每种提取方法均分别得到总黄酮、总皂苷的优化方案以及兼顾两者含量的整合方案,最后进行得率比较,优选最佳提取工艺.结果发现微波法对总皂苷的提取得率最高,对总黄酮的提取效率也达到了最高得率的76.3%,单次提取即可同时达到2种物质的最优化,是可以同时兼顾2种物质提取率的较好方法.其最佳提取条件为70%乙醇,液料比为30,静置20 min后提取50 min.该方法简便、提取效率高,可用于蒺藜原料的质量监测与控制.