烟草内生真菌分布特征研究

从烟草的根、茎、叶中共分离得到619株内生真菌,根据形态特征鉴定出12个属。其中链格孢属(Alternaria)和毛壳属(ChaetomiumKunze)为优势种群,分别占已分离菌株数的24.56%、18.74%。不同组织部位所分离得到的内生真菌在种群及数量上都存在差异:根中的优势属为镰孢属,占到了根中分离菌种数的28.32%;叶和茎中的优势属是链格孢属,分别占到叶和茎中分离菌种数的31.02%和28.88%;表明烟草内生真菌的分布具有一定的组织专一性。     

北京昌平区食用百合根及鳞茎腐烂的病原菌分离与鉴定

【目的】明确引起北京昌平区食用百合根及鳞茎腐烂的病原菌种类。【方法】采用PDA培养基对采集自田间的食用百合腐烂发病的根及鳞茎组织进行病原菌分离纯化,对真菌分离物进行孢子形态观测,结合ITS序列分析和致病性测定,对病原真菌进行鉴定。【结果】从发病组织上共分离纯化得到18株真菌分离物,经鉴定,其中尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)12株,角担菌属(Ceratobasidium spp.)真菌分离物6株,室内与田间致病性测定结果表明,尖孢镰刀菌(F.oxysporum)为引起百合根及鳞茎腐烂的致病菌。【结论】造成北京昌平地区食用百合根及鳞茎腐烂病的病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。     

银杏内生真菌的分离鉴定及种群分布

采用组织分离法,从9个不同地区银杏(Ginkgo biloba L.)的根、茎、叶组织中分离内生真菌,再利用形态学特征与菌株ITS rDNA序列分析相结合的方法鉴定分离菌株。结果表明:从根、茎、叶组织中共分离出78株内生真菌,分属10个属。其中,Alternaria,Fusarium,Colletotrichum,Phomopsis为优势菌群,分别占总菌株数的24.3%、20.5%、16.7%和14.1%;优势菌群在银杏各部位均有分布,无明显的组织特异性。银杏根、茎、叶中均存在特有内生真菌种类,不同采集地银杏中内生真菌的优势菌群不同。     

大花杓兰内生真菌多样性研究

对大花杓兰(Cypripedium macranthum Sw.)内生真菌类群组成及多样性进行了分析。结果表明,从大花杓兰植株中分离到内生真菌59株,利用ITS-r DNA序列分子鉴定法将大花杓兰内生真菌鉴定为18个分类单元,分布在7纲9目11科16属。北京大花杓兰内生真菌包括12个属,内生真菌的多样性指数H=1.39、D=0.96,优势菌群为毛壳菌属(Chaetomium)和茎点霉属(Phoma)真菌,分别占总菌株数的15.25%和8.47%;吉林大花杓兰样品内生真菌归于9个属,内生真菌的多样性指数H=1.31、D=0.93,以毛壳菌属(Chaetomium)为优势菌群,占总菌株数的23.73%。由此可见,北京大花杓兰中内生真菌多样性高于吉林大花杓兰。     

鱼腥草内生真菌多样性分析

为探索鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb)内生真菌类群组成及多样性,采用组织分离法对不同季节、不同部位的鱼腥草内生真菌进行分离,以形态学和分子生物学方法鉴定,通过分离频率、Shannon-Wiener多样性指数等分析鱼腥草内生真菌的多样性。结果表明,分离得到内生真菌3 822株,分属于19个属,其中交链孢属Alternaria和镰孢菌属Fusarium为优势菌群,分别达37.55%和18.50%;在夏季分离得到的内生真菌最多;根中分离得到的内生真菌Shannon-Wiener多样性指数(H′)最大,为2.06;不同季节中鱼腥草内生真菌春季和夏季的相似性最高,为0.74;不同组织中叶与花的相似性最高,为0.83。鱼腥草内生真菌具有多样性,不同季节和不同组织部位的鱼腥草内生真菌存在差异性。     

黄龙病罹病柑橘叶片内生细菌和内生真菌群落结构多样性分析

【目的】比较健康、罹病柑橘叶片在温室条件下内生菌群落结构差异,以及同一植株不同罹病程度叶片的内生菌群落结构差异,分析黄龙病侵染相关的内生细菌和内生真菌种群动态变化,为柑橘黄龙病菌的共培养和病原学研究提供依据。【方法】通过引物对OI1/OI2c对植株染黄龙病的状态进行检验,以健康和不同罹病程度(无症绿色、斑驳黄化、均匀黄化)的柑橘叶片为样本,通过对细菌16S rRNA和真菌rDNA-ITS序列的高通量测序,将得到的内生细菌和内生真菌的数据进行聚类和多样性分析。【结果】4组样品分别通过聚类获得13个门类、22个纲、57个目、101个科、208个属的细菌,以及2个门类、12个纲、24个目、43个科、43个属的真菌。黄龙病菌的相对丰度随着叶片罹病程度的加深而增加。健康组和罹病组共有的细菌优势菌属为甲基细胞菌属、1174-901-12属。Sphingomonas属为健康组的优势菌属。AlphaI cluster属和Hymenobacter属的相对丰度随黄龙病的入侵增加。健康组和罹病组共有的真菌优势菌属为横断孢属,Zasmidium属和Trichomerium属只为罹病组的次优势菌属。Zymoseptoria属的相对丰度与黄龙病菌呈正相关。【结论】黄龙病菌的侵入改变了植株内生细菌和内生真菌的群落结构和多样性,健康组和罹病组的内生细菌、内生真菌群落结构多样性存在明显差异,其优势及次优势菌属及其相对丰度也有存在差异。高通量测序对植物样本的直接检测能有效避开前人使用传统检测的短板,获得包括难培养、低丰度菌群在内更完整的内生菌群落结构,为更系统分析与黄龙病菌入侵生长相关内生菌和寻找其潜在伴生菌的研究提供依据。     

北沙参内生真菌多样性研究

对北沙参内生真菌类群组成及多样性进行分析。结果表明,从北沙参植株中分离到内生真菌137株,利用ITS-r DNA序列分子鉴定法将北沙参生真菌鉴定为21个分类单元,分布在6纲8目11科21属。河北安国北沙参内生真菌归于10个属,内生真菌的多样性指数H=1.08、D=0.90,优势菌群为链格孢属(Alternaria)真菌,占总菌株数的29.93%;山东烟台北沙参内生真菌归于17个属,内生真菌的多样性指数H=1.31、D=0.94,以刺盘孢属(Colletotrichum)和链格孢属(Alternaria)真菌为优势菌群,分别占总菌株数的19.71%和13.87%,两地北沙参内生真菌种类的相似性系数Cs=0.57。由此可见,两地北沙参内生真菌组成具有一定的相似性,山东烟台北沙参内生真菌多样性高于河北安国北沙参。     

信阳野生枸杞枝栖内生真菌多样性研究

为了解枸杞(Lycium chinense Mill.)枝栖内生真菌菌群多样性及分布规律,通过采样、分离、培养与鉴定,对信阳野生枸杞内生真菌的群落结构及生态分布特点进行了研究。结果显示,内生真菌广泛分布于枸杞健康枝内,定殖率达56.8%。共分离得到真菌717株,产孢真菌归于12个属,大多数属半知菌,少数属子囊菌,其中,拟茎点霉属(Phomopsis)、链格孢属(Alternaria)、镰刀菌属(Fusarium)和刺盘孢属(Colletotrichum)真菌为枸杞枝栖优势真菌,漆斑菌属(Myrothecium)、枝孢属(Cladosporuum)、长蠕孢属(Helminthosporium)、拟茎点霉属(Phomopsis)、壳梭孢属(Fusicoccum)、毛壳菌属(Chaetomium)、木霉属(Trichoderma)为枸杞属(Lycium)植物内生真菌新记录。枸杞生境是影响其枝栖内生真菌多样性的重要因素。     

道地药材怀牛膝根部内生真菌的种群探讨

为探讨道地药材怀牛膝（Achyranthes bidentata Blume）内生真菌的菌群组成及侵染情况。通过组织块分离法,选取野生怀牛膝根部作为分离对象,进行内生真菌分离,并采用形态学和分子生物学两种方法对分离得到的真菌进行鉴定。从怀牛膝根部中共分离纯化获得101 株内生真菌,根据形态学和分子生物学特征,它们属于 6 目 9科 10属;根部内生真菌侵染率高达80%。根部分离得到13种。怀牛膝根部内生真菌表现出丰富的种属多样性。在怀牛膝根部分离的内生真菌中,优势菌属是镰孢属和Moesziomyces。     

油茶内生真菌多样性与抑菌性研究

为弄清油茶内生真菌的种类、分布特点及应用潜能,采集湖北省5个地区不同季节的油茶样品,分离其内生真菌并进行多样性分析和抑菌性分析。结果表明,共分离得到内生真菌1 612株,经形态学鉴定可归于24属,未产孢的菌株暂归为无孢菌群(66株)。青霉属(Pencillium)、链格孢属(Alternaria)、刺盘孢属(Colletotrichum)为优势类群,分别占总菌株数的21.09%、19.11%、14.70%。多样性分析结果显示,对于不同地区而言,黄冈地区油茶内生真菌的Shannon-Wiener指数(H')最高,为2.44;就不同组织部位来看,茎中内生真菌的Shannon-Wiener指数(H')最高,为2.52;就不同季节而言,秋季油茶内生真菌的Shannon-Wiener指数(H')最高,为2.58。总体而言,油茶中内生真菌的菌群较为稳定,地区间及组织部位间样品内生真菌组成有一定的相似性。抑菌性结果显示,在挑选的24株内生真菌中,有17株内生真菌的发酵提取物具有抑菌活性,其中3株表现出较好的抑菌效果,分别属于青霉属、链格孢属、叶点霉属(Phyllosticta),这说明油茶内生真菌的抑菌性较强,值得进一步研究。     

小蓬竹植物内生真菌多样性

以喀斯特地区特有濒危物种小蓬竹(Drepanostachyum luodianense Keng f.)为研究对象,采用组织块分离法分离内生真菌,结合形态学特征与分子生物学鉴定的方法对分离到的菌株进行鉴定。研究其内生真菌的多样性,研究结果表明:从180个供试组织块中分离得到105株内生真菌,可划分为19个属,31种(含2个可能的新种),相似度为95%~100%。在属的分类水平上,以节菱孢霉属(Arthrinium)、镰刀菌属(Fusarium)、木霉属(Trichoderma)、炭角菌属(Xylaria)为优势菌属,分别占菌株总数量的12.38%和9.52%、6.67%、6.67%。小蓬竹内生真菌Shannon-Wiener多样性指数(H)为2.800,Simpson指数(D)为0.932,均匀度指数(E)为0.604,且在不同组织部位中小蓬竹内生真菌多样性也存在一定差异。Jaccard指数与Sorenson指数变化趋势一致,均为根茎的相似性最低,茎叶的相似性最高,而根和叶的居于两者之间。     

海桐内生真菌菌群结构及多样性

【目的】为了解海桐内生真菌资源组成及其生态分布特征。【方法】采用组织分离和形态分类的方法对海桐内生真菌进行分离和鉴定。【结果】海桐内生真菌菌群由子囊菌(78.55%)、接合菌(1.21%)及无孢菌群(20.21%)构成,分属于5纲,12目,17科,23属。在纲的水平上,以座囊菌纲(Dothideomycetes)的相对多度为最高,占38.04%;在目的水平上,以格孢腔菌目(Pleosporales)的相对多度为最高,占29.95%;在科的水平上,以格孢菌科(Pleosporaceae)的相对多度为最高,占16.19%;在属的水平上,以交链孢属(Alternaria)的相对多度为最高,占16.19%。内生真菌在果实中分布的菌群和菌株为最高,分别占58.33%和42.51%;在根中分布的菌群和菌株为最少。叶片和果实之间的内生真菌菌群组成的相似度最高(Cs=0.571),以根与果实之间的相似度为最低(Cs=0.381)。除根和叶片、根和果实之间在内生真菌菌群组成上存在显著差异之外(P0.05),在根与枝条、枝条和叶片、枝条和果实、叶片和果实之间无明显差异(P0.05)。【结论】海桐内生真菌资源组成丰富,且内生真菌在海桐不同组织中的分布存在一定差异。     

华木莲叶中内生真菌的群落结构

为了解我国特有珍稀植物华木莲叶片的内生真菌菌群结构特征,以华木莲叶片为材料,采用组织分离法分离华木莲的内生真菌。结果表明,PDA改良培养基(PDA培养基内加20 g/L华木莲叶汁液、30 mg/L链霉素)的分离效果最好。从华木莲的叶中共分离得到87株内生真菌,经显微形态鉴定,鉴定菌株74株,为4目5科10属,分别为青霉属、木霉属、曲霉属、小孢霉属、交链孢属、枝孢属、长蠕孢属、镰孢霉属、拟茎点霉属、丝核菌属,结果显示叶中内生真菌菌群多样性较丰富,优势属为无性丝孢类菌群中青霉属、木霉属、交链孢属和无性腔孢类拟茎点霉属;分离率分别为17.2%、12.6%、10.4%和11.5%,对开发和利用植物内生真菌及丰富真菌的物种具有重要意义。     

万寿菊种子带菌检测及种子消毒处理研究

采用PDA平板分离培养检验法对5个品种的万寿菊种子表面进行带菌检测,并测定5种杀菌剂和2种温汤浸种方法对种子的消毒处理效果.结果表明,万寿菊种子表面带菌率在6.0%~85.0%之间,携带真菌的优势菌群主要是链格孢属真菌(Alternariaspp.),其分离频率最高达60.16%;其次为镰刀菌属(Fusariumspp.),分离频率为20.76%;青霉属(Penicilliumspp.)分离频率为8.76%,黑根霉属(Rhizopusspp.)分离频率为3.08%、曲霉属(Aspergillusspp.)分离频率为2.08%,毛霉属(Mucorspp.)分离频率为1.40%,同时还分离到细菌,分离频率为6.92%,同一品种各菌群分离频率差异显著;用0.1%AgNO3和55℃温汤浸种可以杀死种子表面所有真菌,50℃温汤浸种和50%扑海因WP750倍液的消毒效果也明显高于其它处理,是较理想的种子消毒方法.     

芦苇内生真菌的多样性分析

采用稀释平板法对芦苇(Phragmites australis)根、茎、叶组织的内生真菌进行了分离纯化及形态学鉴定。共分离纯化得到内生真菌194株,分属于木霉属(Trichoderma)、曲霉属(Aspergillus)、链格孢属(Alternaria)、青霉属(Penicillium)、毛霉属(Mucor)、镰孢菌属(Fusarium)和拟青霉属(Paecilomyces)等7个属;其中镰孢属、青霉属和链格孢属为优势菌属,分别占总菌株数的46.39%、26.29%和10.31%。芦苇不同器官中均有内生真菌存在,根中92株、茎中84株、叶中18株;根的优势属为镰孢菌属和链格孢属,叶的为青霉属、茎的为镰孢菌属;根、茎、叶内生真菌多样性指数分别为2.178、1.272和1.019;物种多样性和丰富度指数,从大到小依次是根茎叶,均匀度指数是叶茎根。     

道地药材怀牛膝根部内生真菌的种群研究

为探讨道地药材怀牛膝内生真菌的菌群组成及侵染情况,选取野生怀牛膝根部作为分离对象,通过组织块分离法进行内生真菌分离,并采用形态学和分子生物学2种方法对分离得到的真菌进行鉴定。结果表明:从怀牛膝根部中共分离纯化获得101株内生真菌,根据形态学和分子生物学鉴定,它们属于6目9科10属13种;怀牛膝根部内生真菌侵染率高达80%,多样性指数为1.17,怀牛膝根部内生真菌表现出丰富的种属多样性。在怀牛膝根部分离的内生真菌中,优势菌属是镰孢属和Moesziomyces。     

兰州百合枯萎病病原菌的分离鉴定与致病性测定

【目的】为了明确引起兰州百合枯萎病的病原菌,对兰州百合枯萎病鳞茎及病田土壤进行研究.【方法】采用组织分离及土壤稀释法进行病原菌分离,回接试验测定致病性,病原菌的培养性状、分生孢子的大小等形态特征鉴定菌种.【结果】从病株鳞茎上分离得F1、F2、F3、F4共4种镰刀菌,分离频率依次为25%、15%、5%、5%,从土壤中分离出1株镰刀菌F5.经过致病性分析,鳞片刺伤后接种,鳞片发病率达100%,病情指数(DI)分别为85.42、80.83、75.83、64.58、82.08;鳞片无刺伤接种,鳞片发病率分别为85.71%、47.62%、42.86%、19.05%、57.14%,病情指数分别为(DI)分别为53.57、22.62、21.43、9.52、25.00.鉴定结果为F1:尖孢镰刀菌(Fusarium.oxysporum)、F2:茄病镰刀菌(Fusarium.solani)、F3:三线镰刀菌(Fusarium.tricinctum)、F4:烟草镰刀菌(Fusarium.tabacinum)、F5:禾谷镰刀菌(Fusarium.graminearum).【结论】尖孢镰刀菌、茄类镰刀菌和禾谷镰刀菌的致病能力较强,为兰州百合枯萎病的主要致病菌.     

哈尔滨市室内空气真菌多样性

采用曝皿法,选用孟加拉红培养基(RBC)对东北林业大学的办公室、教室和食堂内空气真菌进行取样调查.经过7个月的研究分析,共得到6 040个真菌菌落,又进一步分离、纯化后得63个真菌菌株,经鉴定得到 20属或群、57种不同真菌(包括无孢菌群3种真菌).室内空气真菌的优势菌属依次为枝孢属(Cladosporium)占总菌落数的27.21%、曲霉属(Aspergillus)占总菌落数的19.7%、青霉属(Penicillium)占总菌落数的14.86%、链格孢(Alternaria)占总菌落数的8.57%、无孢菌群占总菌落数的7.02%)、附球菌属 (Epicoccum)占总菌落数的4.74%、木霉属(Trichoderma)占总菌落数的4.61%.不同采样时间对室内外空气真菌的种类没有影响,仅对菌落的数量有一定的影响,总菌落数从早至晚也逐渐增加,但差异不大.不同采样地点空气真菌的种类差异不大,但菌落数量有较大差异,菌落数量依次为食堂＞办公室＞教室.     

广东化橘红内生真菌多样性分析

通过组织分离方法对广东省化州市橘红种植园内所采的化橘红（Exocarpium citri Grandis）果、枝、叶组织内的内生真菌多样性进行研究,并采用形态与分子生物学相结合的方法鉴定菌株. 结果显示,从化橘红果、枝、叶600个组织块中,共分离得到404株内生真菌. 依据形态鉴定及ITS序列分子鉴定,初步鉴定379株内生真菌,并将其分为16个分类单元,经鉴定归于镰刀菌属(Fusarium)、炭疽菌属(Colletotrichum)、色二孢菌属(Lasiodiplodia)、间座壳属(Diaporthe)、光黑壳属(Preussia)、稻黑孢菌属(Nigrospora)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、弯孢属(Curvularia)、隔孢伏革属(Peniophora)、叶点霉属(Phyllosticta)、枝孢属(Cladosporium)、球腔菌属(Mycosphaerella)、假尾孢属(Pseudocercospora)、附球菌属(Epicoccum)、拟层孔菌（Fomitopsis）和毛霉属Mucor）,其中炭疽菌属与间座壳属是化橘红的优势菌株,其相对频率分别为44.6% 和34.2%,远远高于其他类群. 内生真菌在枝组织中的分离率为91%. 研究结果表明化橘红内生真菌分布具有一定的组织特异性,为进一步从化橘红内生真菌中筛选活性中药成分提供了新思路.     

采用植物组织培养消毒技术分离河口地区香蕉内生真菌的初步研究

对河口地区主栽的不同品种香蕉分3条线路进行样本采集,对采集到的香蕉组织进行内生真菌分离、鉴定,共分离到9属494株内生真菌。鉴定结果表明,刺盘孢属(Colletotrichun sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、青霉属(Penicillin sp.)为优势菌群。这3种优势菌群在东部路线、中部路线、西部路线的分离频率分别为78.37%、79.55%、76.54%;在巴西蕉,威廉斯,红研一号、红研二号中的分离频率分别为84.19%、77.32%、79.60%、71.48%。表明香蕉植株组织内内生真菌具有多样性,为进一步研究提供基础数据。