鸡源鲍氏志贺菌的RAPD分析

【目的】确定鸡源鲍氏志贺菌的进化地位。【方法】选用6条随机引物(P1~P6),采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对1株鸡源鲍氏志贺菌、2株鸡白痢沙门菌、2株鸡肠致病性大肠杆菌和2株痢疾志贺菌共7株菌的基因组DNA进行分析,同时对个别特殊序列进行克隆测序,并在此基础上分析了鸡源鲍氏志贺菌与其他15个相关菌株的进化关系。【结果】6条随机引物中有4条引物(P1,P2,P4和P6)能较好地在志贺菌、鸡白痢沙门氏菌和鸡致病性大肠杆菌3种菌中检测到多态性分子标记;这4条有效引物共扩增出了64个DNA片段,其中7个菌株共有的谱带有3条,多态性片段有61条,多态率达95.3%。引物P2可根据扩增图谱将志贺菌和大肠杆菌与沙门菌鉴别出来;用引物P6对上述7株细菌进行扩增,发现同种菌株间谱带特别相似,其中鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌扩增条带的相同率达66.7%,与鸡肠致病性大肠杆菌扩增条带的相同率达44.4%,而鸡白痢沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远,可用于3种细菌的鉴别。对扩增片段进行的测序及进化分析结果显示,鸡源鲍氏志贺菌与人源志贺菌的进化距离最近。【结论】鸡源鲍氏志贺菌可能是人源志贺菌的一个变异株或新的亚种。     

志贺氏菌RAPD鉴定方法的建立

[目的]为志贺氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供理论依据。[方法]利用5个随机引物对4种不同来源的志贺氏菌进行RAPD扩增,并对得到的扩增图谱进行聚类分析。[结果]5个随机引物中,引物S3、S5表现出较好的多态性。在引物S5的扩增图谱中,志贺氏菌属中各菌均有1条600 bp左右和1条1 000 bp左右的共同谱带,而利用该引物扩增其他属细菌,扩增谱带很少或没有。这说明引物S5对志贺氏菌属细菌是特异性的。根据引物5的聚类分析结果,可将8株志贺氏菌分成4个类群。除宋内氏志贺氏菌外,其他3种6株菌间的相似系数均为1.00,与传统的血清型分型结果完全一致。[结论]采用引物S5的RAPD反应可用于志贺氏菌的快速检测。     

河南省鸡志贺氏菌病和鸡白痢的血清流行病学调查

为了解腹泻病鸡群中鸡志贺氏菌病和鸡白痢的发生情况,利用鸡鲍氏型?鸡痢疾型志贺氏菌凝集抗原和鸡白痢鸡伤寒多价抗原对河南省6个县市52家鸡场的鸡血清进行血清抗体检测。结果显示:鸡鲍氏型、痢疾型志贺氏菌血清抗体阳性率分别为31.5%和14.6%,鸡白痢为3.2%。所有县市的鸡鲍氏型志贺氏菌血清抗体阳性,4/5的县市鸡痢疾型和鸡白痢血清抗体阳性;78.8%的鸡场为鲍氏型血清抗体阳性,61.2%的鸡场为痢疾型血清抗体阳性,24.4%鸡场为鸡白痢血清抗体阳性。不同鸡群中,鸡鲍氏型血清抗体阳性率为4.4%~85.7%,鸡痢疾型为0.0~60.0%,鸡白痢为0.0~30.0%。不同品种鸡中,罗曼鸡鲍氏型?痢疾型血清抗体阳性率都较高,其次为固始鸡。不同日龄中,22~28日龄鸡的血清抗体阳性率最高,鸡鲍氏型为68.8%,鸡痢疾型为27.1%,而鸡白痢仅为6.5%。混合感染中,鸡鲍氏型和痢疾型混合感染占待检血清总数的10.1%。     

人源志贺氏菌对雏鸡的人工感染试验

为了弄清人源志贺氏菌是否可以传播给鸡,从而为志贺氏菌在人-禽传播中的可能性提供科学依据,用不同剂量的鸡源鲍氏志贺氏菌、人源鲍氏志贺氏菌和人源福氏志贺氏菌通过腹腔注射人工感染雏鸡。结果发现,各试验组雏鸡均有不同程度的病变发生,甚至出现死亡病例,且从雏鸡体内分别回收到原接种的3株细菌。这说明了鸡源志贺氏菌的可能来源及有发生人鸡互传的可能性。     

四川部分稻瘟病菌的DNA指纹分析

应用rep PCR(repetitiveelement basedpolymerasechainreaction)分子指纹技术,对28个四川稻瘟病菌菌株进行了DNA指纹特征分析和相似百分率比较。结果表明,供试菌株基因组用Pot2-1和Pot2-2引物共扩增出26条DNA谱带,其中11条为多态性DNA带,各菌株分别扩增出10条左右不等的带谱;供试菌株传统的小种划分与DNA指纹特征的相似百分率比较没有明显的相关性。     

葡萄孢菌遗传多态性DNA分子指纹RAPD分析

选用13个随机引物对葡萄孢菌14个种的全基因组DNA进行随机多态性扩增.共扩增出152条分子量在200～2 000 bp的DNA片段,多态检测率为98.8%.利用UPGMA方法对扩增的DNA片段聚类分析,结果表明:受试菌种相似率为种内(90%)大于种间(80%),具有丰富的遗传多样性,一些形态学上难以区分的相似种利用DNA分子指纹可被区别,此方法可供分类鉴定疑难种提供依据.     

河南省部分地区鸡志贺氏菌病病原分离鉴定及药敏试验

为了对河南省部分地区鸡志贺氏菌病的病原进行分离鉴定和药物敏感性调查,对河南省6个地区的鸡腹泻病病料进行了细菌学检查,经细菌分离培养、形态染色镜检、生化试验和动物试验,共分离鉴定出12株鸡源志贺氏菌。血清学试验结果显示,分离菌株存在种和型的差异,其中8株为福氏志贺氏菌,3株为鲍氏多价志贺氏菌,1株为痢疾Ⅱ型志贺氏菌。动物试验结果表明,分离的12株鸡志贺氏菌均具有致病性,且毒力不同,其中,从三门峡分离的菌株有很强的毒力,发病率和死亡率均为100%。药敏试验结果显示,大多数鸡志贺氏菌对氨苄/舒巴坦和阿米卡星较为敏感,对其他药物具有严重的耐药性,且不同地区分离的鸡志贺氏菌对药物的敏感性不同。     

澳洲鸵鸟的随机扩增多态DNA研究

采用随机扩增多态性DNA标记技术对澳洲鸵鸟20个个体进行了遗传变异分析,从60个随机引物中筛选出17个多态性丰富的引物,并对其所有个体的总基因组DNA进行了PCR扩增,结果17条引物共产生103种扩增片段,其中共有片段13条,多态片段90条,平均每条引物的扩增带数为6．06,各引物多态性片段范围在2—9,多态频率在40％-100％。表明澳洲鸵鸟的遗传多样性较丰富。     

鸡腹泻病原菌的分离鉴定及药敏试验研究

为了对来自河南省部分地区的腹泻病(死)鸡进行病原确诊及了解病原对药物的敏感性,恰当采集动物病料进行细菌常规分离鉴定和药敏试验。结果共鉴定出5株鸡白痢沙门氏菌和17株鸡源志贺氏菌。分离的志贺氏菌中,痢疾Ⅰ型5株,痢疾Ⅱ型3株,鲍氏多价1株,福氏多价1株,其余7株尚未定型。每株沙门氏菌和志贺氏菌对试验鸡的致病性不同,沙门氏菌发病率为40%～80%,死亡率为10%～20%;志贺氏菌发病率为30%～100%,死亡率为0～90%。药敏试验结果显示:5株鸡白痢沙门氏菌对阿莫西林、氨苄西林、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的耐药率均为80%(4/5),对罗红霉素、甲氧苄啶和四环素的耐药率高达100%(5/5);但对头孢唑啉、头孢曲松、阿奇霉素、庆大霉素、阿米卡星较为敏感,敏感率分别为80%(4/5)、80%(4/5)、80%(4/5)、100%(5/5)、100%(5/5)。多数志贺氏菌对四环素、甲氧苄啶、罗红霉素耐药,耐药率分别为82.35%(14/17)、88.24%(15/17)、100%(17/17);而对头孢唑啉、头孢曲松、阿米卡星较为敏感,敏感率分别为88.24%(15/17)、94.12%(16/17)、94.12%(16/17)。由此可见,在临床上可选取庆大霉素、头孢曲松和阿米卡星作为防治鸡腹泻病的首选药物。     

微量元素对生防木霉菌T23遗传变异的影响

首先对木霉菌T23在含有Mg、Cu、Zn、Fe、Mn、Mo、Ca共7种微量元素的组合培养基上经过7代继代诱导,然后运用DNA随机扩增多态性(RAPD)技术进行基因组DNA多态性分析.从70条引物中筛选出谱带清晰、重复性好的引物10条,共扩增出141条RAPD谱带,多态性谱带为107条,占扩增总谱带数的75.9%.DNA 片段大小范围500-3000bp,并利用NTSYSpc2.1软件对扩增结果进行统计和聚类.结果表明:生防木霉菌T23诱变后具有一定的遗传稳定性和遗传多态性,生防木霉菌T23经过上述微量元素长时间诱导能发生遗传变异.     

西瓜和甜瓜杂种一代种子纯度的RAPD鉴定

选用100条随机引物(S71-S190)对西瓜、甜瓜杂种一代和其父、母本的种子进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,探索西瓜和甜瓜杂交品种种子纯度鉴定的便捷途径.结果表明:在100条引物中筛选出4条有特征条带的引物,其中S92号引物能使甜籽一号、白兰蜜和黄河蜜6号与其母本有效区分开来;S162号、S181号引物能使甜籽一号与其母本区分开来;S175号引物能使白兰蜜与其母本区分开来;但未发现使T×14E与其母本区分开来的引物.     

WHBE兔遗传特异性的RAPD分析

应用随机扩增多态DNA技术(RAPD)对WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰兔进行了遗传分析.用10个随机引物对其基因组DNA进行PCR扩增.根据电泳结果选用其中8个引物扩增的条带进行遗传分析,共检测到107条扩增片段,其中多态性片段32条,占29.91%,反映了家兔品系间的遗传变异.多态性统计分析表明,WHBE免和日本大耳白兔的遗传相似度最高,为0.7948.其中4个引物既可扩增出3个品系共同的DNA条带,也可扩增出不同品系的特征条带,表明WHBE兔与日本大耳白兔和新西兰兔之间有遗传的相似性,也存在遗传差异.这些结果表明应用RAPD技术可以很好地检测家兔不同品系间以及同一品系不同个体间的亲缘关系.     

利用RAPD技术对满天星试管苗玻璃化发生原因的初步探讨

用200条随机引物对满天星试管正常苗和玻璃苗进行了RAPD分析研究,结果表明:200条随机引物中,有23条引物的扩增产物DNA片段表现出明显的多态性,其中每个引物对不同供试样品扩增出现的DNA谱带数少则5条,多达13条,分布在200～2 000 bp.不同引物扩增出的DNA片段谱带不同,差异较大,选出的23条引物对14个供试样品共扩增出206条DNA谱带,经聚类分析,14个供试样品可分为2类或4类,可直观准确地区分满天星试管正常苗和玻璃苗之间的差异.     

Study on Classification and Genetic Diversity of Kentucky Bluegrasses by Using RAPD Markers

A total of 69 random primers were screened by using random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers to analyze the genetic bands of 32 Kentucky bluegrass cultivars. A total of 197 bands were amplified ...     

中国马铃薯部分品种资源遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD方法分析120份中国马铃薯品种资源,获得了22条引物的扩增谱带,22条引物扩增出274条带,多态性条带为215条,多态性比率为78.5%。不同引物扩增的条带数在6～21之间,每条引物平均扩增出12.5条带,扩增条带数最多的是S126,多态性比率最高引物为S66。120份材料之间的遗传距离为0.04～0.81,平均值为0.38。聚类分析将120份材料分为五类。除Ns78-11-1以外,所有的新型栽培种资源与普通栽培种划分在不同的类中,有亲缘关系的材料大多聚在一类,品种的分类没有明显的地域特征,各育种单位育成的品种相互交织聚在一起。     

广西甘蔗鞭黑粉菌遗传多样性分析

【目的】分析广西甘蔗主产区甘蔗鞭黑粉菌遗传多样性水平,为研究病菌毒力变化及甘蔗病害综合治理提供新思路。【方法】从广西各甘蔗主要产区采集甘蔗鞭黑粉菌样品,提取其中70份单倍体菌株基因组DNA,使用优化的随机扩增多态性DNA标记(RAPD)反应体系和经筛选获得的RAPD引物进行PCR扩增,电泳谱带使用NTSYS 2.1进行聚类分析,并构建系统发育进化树。【结果】使用筛选出的10个RAPD引物进行扩增,获得77条条带,每个引物扩增得到的条带数为4~11条,大小为150~3000 bp,包含6个多态性位点,群体多态位点百分率为7.79%。70个甘蔗鞭黑粉菌的相似系数为0.96~1.00,在0.96的遗传系数上菌株可分为两大类,其中类群1聚集了来自横县校椅镇的两个菌株,其余68个菌株分布在类群Ⅱ中。【结论】广西甘蔗鞭黑粉菌遗传分化度较低,片段多态性和菌株地理来源、寄主和交配型无显著相关性。     

RAPD Anlysis of Different Leaf Colour in Euphorbia pulcherrima

Random amplified polymorphic DNA （RAPD） was used to study the diversity of seven E. pulcherrima with different color leaves. Aight 10 bp primers selected from 30 arbitrary primers were applied for amplifying the Euphorbia pulcherrima DNA. Total 62 bands were produced, among which 22 bands （35.48%） were polymorphic. The average numbers of polymorphic DNA bands amplified by each primer were 7.8. Cluster analysis results showed that the genetic background of seven E. pulcherrima was relatively narrow and they had the higher similarity coefficient, which indicated that these seven strains had a near relationship, and that RAPD marking technology may be the effective means for E. pulcherrima classification.     

芥菜遗传多样性的RAPD分析

随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）是一种新的分子标记技术,利用ＲＡＰＤ标记对芥菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｏｓｓａ）１６个变种的遗传多样性进行了分析,从６０个１０ｂｐ随机引５物中筛选出２７个有效的,这２７个有效引物共扩增出３３６条ＤＮＡ带,其中２７５条为多态性带,占总数的８１．８５％,平均每个引物扩增出的ＤＮＡ带数为１２．４４,不同引物扩增出各自不同的ＤＮＡ指纹图谱,大部分图谱均有特征或特     

白灵侧耳菌株间的RAPD分析

采用CTAB法提取白灵侧耳菌丝基因组DNA,利用RAPD技术分析13个白灵侧耳菌株间的亲缘关系。结果表明,从80个随机引物筛选出11个引物,共扩增出66条带,其中多态条带50条,多态性程度为75.76%。D=0.46时,聚类分析结果可以将供试材料分为2个类群,即子实体形态为小漏斗型、柄较长的菌株聚为一类,子实体形态为手掌或马蹄型、柄很短的菌株聚为一类。揭示了白灵侧耳菌株间的亲缘关系。