黄瓜离体器官再生体系的优化

优化通过器官直接再生方式的黄瓜离体再生体系,为遗传转化奠定基础。以‘长春密刺’黄瓜的子叶节为外植体,探讨在黄瓜再生过程中,适宜的无菌苗获得培养基、适宜的外植体类型、无菌苗的适宜苗态、不定芽诱导培养基和芽伸长培养基中适宜的激素组合与比例。结果表明,最适的无菌苗获得培养基为1/2MS+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂(pH=5.8);不同外植体的再生率为子叶节>下胚轴>子叶;子叶完全出壳但未展平的无菌苗比其他苗态的再生率高,子叶展平后,再生率迅速下降;当6-BA（6-苄基氨基嘌呤）和ABA（脱落酸）浓度一定时,最适的AgNO₃为2 mg/L;当AgNO₃浓度一定时,6-BA和ABA浓度的最佳组合为1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ABA;不定芽诱导的最适培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ABA+2 mg/L AgNO₃,出芽率为90%,每外植体出芽数为3.5;芽伸长培养基中加入0.10 mg/L 6-BA,能够促进再生芽的伸长。本研究成功优化了黄瓜的再生体系,得到了健壮的黄瓜成株。     

白果强丰番茄高效再生体系的建立

以番茄白果强丰的子叶和下胚轴为外植体,通过不同激素处理,诱导愈伤组织、不定芽及不定根的形成,以期建立白果强丰高效再生体系,为其遗传转化奠定良好的基础。结果表明,各处理对愈伤组织的诱导没有显著差别,出愈率均达到了93%以上。出芽率方面,以外植体为子叶的,以处理Ⅱ(MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.2mg/L)的出芽率最高,为93.33%;外植体为下胚轴的,以处理Ⅳ(MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L)出芽率最高,为80.00%。两者相比,子叶作为外植体的出芽率高。诱导不定芽生根时,两种处理生根率均为100%,但处理Ⅵ(MS+IAA0.5mg/L)不定根数多,根系较发达,为较优不定根诱导培养基。     

油桐下胚轴直接再生体系的建立

为了获得油桐的离体再生技术,本实验以油桐无菌苗下胚轴为外植体,采用MS培养基添加不同的植物生长调节剂,通过直接器官发生途径建立了简单的、可重复的油桐离体再生体系。结果表明:下胚轴直接诱导不定芽的最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA,诱导率高达45.37%,平均不定芽数为3.69;最适继代增殖培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA+1.0 mg/L GA3,增殖系数可达3.13;最佳生根培养基为1/2 MS+0.2 mg/L IBA,生根率高达97.78%。驯化后移栽到营养土:珍珠岩:蛭石=2:1:1的混合基质中,成活率达90%以上。     

芦笋品种NJ1192雄株高效再生体系的建立

通过对芦笋品种NJ1192雄株离体再生体系中的诱导愈组织伤、分化出芽、生根等过程进行研究,结果显示,以芦笋份绿色的嫩茎为外植体,最佳的愈伤诱导培养基是MS+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+0.8 mg/L 2,4-D,其愈伤组织诱导率可达95.6%;以MS+0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA作为诱芽培养基,诱芽率可达64.6%;将诱导出芽的材料在生根培养基上诱导生根,其中以MS+0.5 mg/L IBA+1.3 mg/L嘧啶醇的培养基生根率最高,达到74.5%。本研究获得了芦笋品种NJ1192雄株材料高效离体再生体系,为建立该品种的种苗组培生产以及遗传转化等基因工程平台的建立提供了较好的研究基础。     

黑农51子叶节和胚尖再生体系的建立及优化

为建立一个高效的大豆再生体系用于大豆的遗传转化,选用黑农51的子叶节和胚尖作为外植体,建立了黑农51的子叶节和胚尖再生体系,并研究了6-BA和IBA对大豆再生的影响。结果表明,黑农51子叶节最适芽诱导培养基为MSB5+1.0 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA,最适生根培养基为MSB5+1.0 mg/L IBA;胚尖最适芽诱导培养基为MSB5+0.4 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,最适生根培养基为MSB5+2.0 mg/L IBA。黑农51子叶节再生体系的出芽率、出芽数、芽伸长数和生根率四个指标均高于胚尖再生体系,更适合作为遗传转化的受体材料。     

番茄子叶和下胚轴离体再生体系建立

以番茄无菌苗子叶和下胚轴为外植体,研究其在MS附加不同浓度6－BA和NAA的培养基上的分化情况。结果表明：在不同培养基上,番茄子叶和下胚轴均能诱导出淡绿色的愈伤组织和分化形成不定芽,但在不同的培养基上,番茄子叶和下胚轴的出愈率和不定芽诱导存在明显差别。诱导番茄愈伤组织形成和芽分化的最佳培养基分别为：MS+6-BA 2 mg/L+IAA 0.2 mg/L和MS+6-BA 2 mg/L+IAA 0.02 mg/L,番茄不定芽生根培养基为：MS+IAA0.2 mg/L。     

草原龙胆‘阿琳娜’高效再生体系的建立

草原龙胆(Eustoma grandiflorum)花色典雅、花型丰富,是全球最受欢迎的切花之一。本研究以草原龙胆‘阿琳娜’叶片为外植体,研究了6-BA、NAA、GA₃和IBA不同组合对其出芽、壮苗、增殖、生根的影响。结果表明:最佳不定芽诱导培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L,不定芽诱导率达90.0%,平均出芽数为4.52个;MS培养基可实现壮苗;最佳增殖培养基为MS+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.2 mg/L+GA₃0.3 mg/L,增殖系数为6.41;培养基1/2MS+IBA 0.5 mg/L有利于生根。初步建立了草原龙胆‘阿琳娜’高效再生体系,为草原龙胆优良品种快速繁殖及基因工程研究提供了依据。     

欧报春上下胚轴再生体系的建立

以欧报春(Primula vularis)种子上下胚轴为外植体,通过外植体的消毒、丛生芽诱导和增殖、生根、炼苗和移栽等技术的研究,筛选出各阶段的最佳培养基配方,从而建立欧报春的再生体系。结果表明:欧报春种子上胚轴能诱导出不定芽,但下胚轴不能。欧报春上胚轴不定芽诱导最佳培养基为MS+NAA 0.4 mg/L+6-BA 0.6 mg/L,诱导率达21.67%;丛生芽增殖的最佳培养基为MS+NAA 0.6 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,诱导率达62.96%;生根最佳培养基为MS培养基,诱导率达95.59%;最佳移栽基质为草炭:珍珠岩=3:1(体积比)的混合基质,移栽成活率可达96.67%。     

马铃薯品种Favorita再生体系的优化

以马铃薯品种Favorita脱毒试管苗的叶片与茎段为外植体,在愈伤诱导培养基上培养不同时间,然后转入到添加了不同浓度6-BA与ZTR组合的芽诱导培养基上,观察其对马铃薯愈伤组织诱导及芽分化的影响。结果表明:茎段与叶片在愈伤培养基(MS+1 mg/L IAA+0.2 mg/L GA3+0.5 mg/L 6-BA)上分别培养2 d、4 d、6 d后,再转入添加不同浓度6-BA和ZTR的芽诱培养基上,均可以100%产生愈伤组织;50 d后调查,诱导2 d的叶片组织转入添加1 mg/L IAA、0.2 mg/L GA3、2 mg/L 6-BA和1 mg/L ZTR的MS诱导培养基,再生率100%,诱导6 d的叶片组织转入添加1 mg/L IAA、0.2 mg/L GA3、0.5 mg/L 6-BA和2 mg/L ZTR,分化率100%;诱导2 d的茎段组织转入添加1 mg/L IAA、0.2 mg/L GA3、3 mg/L 6-BA和1 mg/L ZTR,分化率50%。     

驱蚊香草快繁体系的建立及工厂化育苗主要影响因素研究

以驱蚊香草的幼嫩叶片作外植体,在含不同激素的不同培养基上进行丛生芽的诱导、芽的继代增殖、芽生根与移栽研究,以快速获得再生植株。结果表明,丛生芽诱导培养基以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L较好,诱导率为96%;增殖培养基以MS（B5）+6-BA0.5mg/L +NAA0.1mg/L较好,增殖系数达8倍以上,且增殖芽生长好;壮苗培养基为MS（B5）+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L为好;生根培养基以1/2MS+NAA0.1 mg/L和MS+IBA0.2 mg/L为最佳,生根率达100%,幼苗生长势旺。影响工厂化育苗的主要因素有激素浓度、继代次数和移栽管理     

马铃薯不同品种块茎再生体系的建立和优化

为建立最佳的马铃薯块茎再生体系,本研究分别以‘夏坡蒂’、‘费乌瑞它’以及‘克新1号’的试管薯和大田薯为试验材料,采用控制变量法对马铃薯块茎再生体系进行筛选,以获得其培养基最佳激素浓度配比,并对不同来源马铃薯块茎不定芽分化率进行对比。结果表明,‘夏坡蒂’、‘费乌瑞它’和‘克新1号’愈伤组织的最佳诱导培养基组合分别为MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L GA3+1 mg/L ZT、MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L GA3+2 mg/L ZT和MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+2 mg/L ZT。‘夏坡蒂’与‘费乌瑞它’的不定芽最佳分化培养基组合为MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+2 mg/L ZT;‘克新1号’的最佳分化培养基组合为MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L GA3+2 mg/L ZT。试管薯的块茎不定芽分化率显著高于大田薯。     

激素对橡胶树次生体细胞胚成熟培养的影响

为提高橡胶树循环培养的次生体细胞胚再生植株频率,建立完善的橡胶树高频次生体细胞胚再生体系,以长期离体培养的未成熟次生体细胞胚为材料,研究了不同激素（ABA、NAA、GA3、6-BA, KT）及浓度对次生体细胞胚成熟的影响。结果表明,0.05 mg/L NAA促进次生体细胞胚成熟的效果较为明显,平均获得了27.33个成熟胚状体。ABA最佳处理浓度为1.0 mg/L,平均获得24.33个成熟胚状体,升高或降低ABA的浓度均会导致成熟体细胞胚数的降低或生根体细胞胚数的增加。GA3处理浓度较低时(0.2~0.4 mg/L),次生体细胞胚未能进一步发育成熟,成熟体细胞胚的数量为0个, GA3最佳处理浓度为1.0mg/L。高浓度的6-BA和KT皆不利于次生体细胞胚的成熟,以0.5 mg/L 6-BA和1.0 mg/L KT组合效果最佳。     

花生胚轴的离体诱导与植株再生

选择不同基因型的花生品种为外植体供体,以初步建立适应河南花生品种的高效再生体系。以5天苗龄的花生无菌胚轴为外植体,将供试的4个花生品种分别接种于4种丛生芽诱导培养基上：MS+6-BA5mg/L+NAA1mg/L,MS+TDZ0.6mg/L+NAA0.4mg/L,MS+TDZ1mg/L+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L,MS+TDZ1mg/L+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L。在25℃±1℃、2000lx、16h/d光照条件下培养约30天左右,上胚轴和下胚轴均分化出愈伤组织和丛生芽点。结果发现,上胚轴的丛生芽诱导率远高于下胚轴,最高达到67%,平均每个外植体产生4.5个丛生芽,最高的可分化出30多个;上胚轴在培养基MS+6-BA5mg/L+NAA1mg/L和MS+TDZ1mg/L+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L的丛生芽分化较好,该研究为花生组织的离体培养和外植体遗传转化提供有效途径。     

碗莲组培快繁技术初探

以碗莲‘案头春’茎尖为实验材料,对诱导培养基成份、培养基状态、最佳取材时期以及增殖培养基筛选等方面进行了研究。结果表明：最佳取材季节为10~12月份;碗莲茎尖分化最适宜培养基为MS + 1.0 mg/L 6-BA +0.25 mg/L NAA +1.0 mg/LGA3;适宜的增殖培养基为MS +2.0 mg/L 6-BA +0.25 mg/L NAA;固液培养状态：上层为5mm厚的MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.25 mg/L NAA + 1.0 mg/L GA3液态培养基,下层为1cm厚的MS + 1.0 mg/L 6-BA +0.25 mg/L NAA + 1.0 mg/L GA3固态培养基,更有利于芽诱导;培养过程中污染的芽苗用75%酒精1min、0.1%HgCl210min灭菌效果最好。     

卷丹百合脱毒快繁技术研究

对卷丹百合脱毒苗组培快繁技术体系进行研究。以带LSV病毒的卷丹百合珠芽为材料,通过36℃高温预处理10天,剥取0.2mm大小的茎尖在MS＋2.5mg/L6-BA＋1.5mg/LGA＋0.5mg/LNAA＋0.1g/L活性炭＋0.6%琼脂＋3%白糖的培养基中进行芽诱导培养,经过一次继代培养后,用RT-PCR检测LSV病毒,脱毒率达100%。将脱毒百合苗在MS＋2.0mg/L6-BA＋2.0mg/L2,4-D＋0.1mg/LNAA培养基中诱导愈伤组织及丛生芽,诱导率达100%;在1/2MS＋2.5mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA培养基中进行分化、增殖培养,增殖倍数达到4.31;采用MS＋1.2mg/LNAA＋0.5g/L活性炭培养基进行生根培养,产生的根系多而粗壮,移栽时最易成活。     

颐和园古桑树的组织培养与快速繁殖

以北京颐和园古桑树为外植体进行组织培养,取桑树当年新生嫩茎切段为外植体进行,其中不定芽启动培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+PVP 0.2 g/L;将无菌苗接到最适分化培养基MS+ 6-BA 0.8 mg/L +NAA 0.1 mg/L +PVP 0.2 g/L上,组培苗分化率高;不定根最适诱导培养基为：1/2MS+NAA 0.5 mg/L +PVP 0.2 g/L,生根率达100%。组培苗移栽成活率达95%。     

花椒组织培养与快速繁殖技术研究

以花椒(ZanthoxyLum bungeanumMaxim.)嫩茎段为外植体进行离体培养,获得了再生植株,并建立起快速繁植无性系。分化的最适培养基为MS 1.0 mg/L 6_BA 0.5 mg/L NAA 2.0 mg/L GA,其增殖系数为3.10;继代增殖最适培养基也为MS 1.0 mg/L 6_BA 0.5 mg/L NAA 2.0 mg/L GA,每代每梢平均增殖数量为2~4个不等;生根最适培养基为1/2 MS 0.1 mg/L IBA 0.2 mg/L IAA,10 d后每株可长出2~4条根。并进行了移栽方面的研究,为大规模快速繁殖青椒提供了一条有效的途径。     

鞑靼忍冬和疏花蔷薇组培快繁体系的建立研究

以西天山野果林中的重要伴生种鞑靼忍冬和疏花蔷薇带芽茎段为外植体,研究不同培养基及激素配比对芽分化、增殖及再生的影响。结果表明:腋芽诱导的最适宜培养基为MS培养基,鞑靼忍冬和疏花蔷薇诱导率分别可达99.12%和100%;适合鞑靼忍冬腋芽增殖的培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+GA 31.0 mg·L-1,增殖系数可达5.37;而疏花蔷薇腋芽增殖的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+GA 31.0 mg·L-1,增殖系数高达3.0;适合鞑靼忍冬组培苗生根的最佳培养基为1/2 MS+NAA 1.5 mg·L-1+6-BA 0.05 mg·L-1+活性炭1.0 g·L-1,生根率为100%;而疏花蔷薇组培苗生根最佳的培养基为1/2 MS+NAA 1.5 mg·L-1+6-BA 0.1 mg·L-1+活性炭1.0 g·L-1,生根率为66.67%。移栽到单独的珍珠岩基质中的鞑靼忍冬和疏花蔷薇组培苗成活率最高,成活率分别达90.00%和75.00%。     

小麦幼胚愈伤组织诱导影响因素的研究

小麦幼胚愈伤组织是目前小麦遗传转化中最常用的转化受体系统。以小麦幼胚为外植体,对愈伤组织诱导中的不同基因型、基本培养基、激素、碳源进行了研究。结果表明,不同基因型材料、不同基本培养基的幼胚愈伤组织诱导存在明显差异,其中西农1376和小偃22两个基因型小麦的组培特性较好,MS培养基适于作为小麦幼胚愈伤组织诱导的基本培养基。在MSD培养基中加入1.0mg/LABA或0.2mg/L6-BA能明显改善愈伤组织的生长状态,并以ABA的效果更为显著。将MSD培养基中的蔗糖浓度从30g/L降为15g/L,同时加入15g/L山梨醇,可显著提高愈伤组织的质量。选择适宜的基因型和合理的培养基构成是改良小麦幼胚愈伤组织诱导效果的关键。     

栎叶绣球‘雪花’再生体系的建立

为获得大量栎叶绣球的无菌苗,本研究以栎叶绣球‘雪花’(Hydrangea quercifolia’Snow Flake’)的叶片为试验材料,通过不同浓度的激素组合处理。结果表明,最适宜的愈伤组织诱导培养基为:MS+1.5 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA,出愈率约为80.7%;最适宜的不定芽分化培养基为:MS+2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA,诱导率约为90.3%;最佳的增殖培养基为:MS+2.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA,增殖率约为5.2;最佳的壮苗培养基为:MS+0.5 mg/L 6-BA+0.15/0.2 mg/L IBA,幼苗平均高度约为4.57 cm;最佳的生根培养基为:1/2 MS+0.4 mg/L IBA,平均生根率约为88.3%,平均根长约为6.5 cm。本研究初步建立了栎叶绣球‘雪花’的再生体系,为其扩大繁殖和之后的遗传转化研究提供了帮助。