离体棉纤维与其框架结构（胚珠）发育关系的研究

用胚珠作外植体培养棉纤维时，胚珠为纤维的发育框架，选择合适发展状态和胚珠作外植体，以及在培养过程中该框架是否能被诱导至适应于纤维继续生长的发育程序中去，会在很大程度上影响纤维的质量，本研究已获得平均长度为田间的８２．１％和强度为７１．１％的离体纤维，对和种培养系统中的框架的研究证明，尚处于异养状态的胚珠在最佳增减基中，最易被诱导作出此种适应性调整，具体表出在：培养过程中胚的早期败育，使珠被成为框架     

棉花纤维起始期基因表达的cDNA-AFLP分析

摘要：利用cDNA-AFLP差异显示技术比较了棉花(Gossypium hirsutum L.)品系徐州142及其无纤维突变体的胚珠在纤维起始期（开花后0和4 d）的基因表达，结果表明，在总共显示的561条带中两种胚珠各有特异带83条。将正常有纤维胚珠的差异片段47个进行反向 Northern blot检验，32个在有纤维胚珠中特异表达。选取18个在有纤维胚珠中特异表达的片段进行序列分析，结果表明，8个分别与polyphosphoinositide结合蛋白、细胞色素氧化酶亚基Ⅱ、β-葡萄糖苷酶、蔗糖合成酶、Ca2+通道蛋白、水稻高渗反应蛋白osr40、类TSO1蛋白序列有相似性；4个与拟南芥(Arabidopsis thiliana )的假拟蛋白相似；另有6个找不到相似序列。     

温度对棉铃发育影响的研究进展

棉铃发育的优劣,决定了棉花产量和品质.温度是影响棉铃发育的重要因子之一.从现有的研究结果可以认为,温度不但影响棉花生长的前期阶段(苗期、蕾期),而且更直接地影响棉铃的膨大、胚珠的分化、纤维的伸长和纤维壁的加厚,从而影响了棉铃重量和纤维品质.     

时空调节生长激素提高棉纤维的产量和质量

棉花是生产纺织用纤维的重要农作物,随着人口增长对棉花需求的增加,传统的育种方法受到了品种和技术的限制.棉花纤维纯度是纤维质量的一个重要指标,用马克隆值来衡量,也是纤维成熟的一个参数,如果大于5.0说明粗纤维占得比例大,纺出的纱韧性低.棉花纤维是来源于胚珠表皮的一种高度拉长的细胞,这是棉属的一个特征.     

鸡胚精原干细胞定向诱导分化为脂肪细胞的研究

为研究体外定向诱导鸡胚精原干细胞（Spermatogonial stem cells, SSCs）向脂肪细胞分化的能力，取孵化16d的鸡胚睾丸，无菌获取SSCs，体外培养传代。采用不同诱导程序、不同组合的诱导剂（地塞米松、胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX））诱导SSCs向脂肪细胞分化。结果显示SSCs被诱导7～21d后，分化成脂肪细胞，其中诱导程序⑥的诱导分化效果较好，分化率为85%。诱导剂联合协同作用的诱导效果极显著地(P<0.01)高于单独作用的诱导效果。诱导的脂肪细胞经特异性的油红O染色为阳性，并高表达脂肪细胞标志基因PPARγ。表明鸡胚胎精原干细胞（SSCs）体外培养传代后仍具有多向分化潜能，在特异性化学物质的诱导下，可被定向诱导分化为脂肪细胞。     

外源NO对棉胚珠离体培养色素积累和纤维发育的影响

为探究外源NO对棉花色素合成和纤维发育的影响,以棕色棉和白色棉花后2 d的胚珠为材料,利用NO供体硝普钠(SNP)处理棉纤维,测定纤维发育中的相关生理生化指标及与色素合成相关基因的表达量。结果表明,100μmol·L-1SNP处理促进了棕色棉胚珠鲜质量的增加和白色棉纤维的伸长;DMACA染色显示,原花青素(PAs)分布在棕色棉胚珠种皮和纤维中,而白色棉则仅在种皮中存在;外源NO促进了白色棉和棕色棉胚珠纤维中总黄酮和PAs的合成,但抑制了棕色棉纤维素的合成;色素合成关键酶基因(Gh CHS、Gh F3H、Gh DFR、Gh ANS、Gh ANR)在离体过程中整体呈下降趋势,但SNP处理上调了棕色棉中各基因的表达;外源NO促进了棕色棉胚珠纤维中Gh TT12的表达;外源NO在纤维发育早期(10 DAC、15 DAC)抑制了棕色棉胚珠纤维中Gh Exp1的表达,促进了白色棉胚珠纤维中Gh Exp1的表达。本研究结果为进一步揭示外源NO对棉花色素合成和纤维发育提供了参考。     

山羊骨髓MSCs体外向成骨细胞诱导和分化

以关中奶山羊骨髓间充质干细胞（MSCs）为对象，研究了体外诱导山羊MSCs向成骨细胞的分化。结果表明，山羊MSCs在地塞米松、β-磷酸甘油和抗坏血酸的作用下，从诱导的第4~5天开始，即可见有些MSCs体积逐渐增大，由梭形或多角形转变为立方形或卵圆形；随着诱导时间延长，立方形或卵圆形细胞不断增多，到第15天时，有较多的立方形细胞，且这种变化经历了从立方形向卵圆形转变的过程；第25天，可见卵圆形和方形细胞堆积，诱导分化率为90.2% ± 2.97%。说明其被诱导分化为成骨细胞表型，该类细胞呈茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色阳性。从而证明了山羊骨髓MSCs具有体外分化为成骨细胞的潜能，从而为利用该类细胞作为实验模型研究骨骼缺损修复等提供了科学依据。     

小鼠ES细胞神经分化的方法比较研究

采用类胚体法(EB)的EB分化4-／4 程序和单层分化法研究不同的实验方法对胚胎干细胞神经分化的影响。用4-／4 分化程序进行胚胎干细胞的神经分化时，饲养层细胞的存在对类胚体的形成无影响，在神经分化的13d，仍可观察到46C细胞的Sox1-GFP绿色荧光，此时的免疫染色结果显示，分化细胞中除了有Nestin阳性的神经干细胞及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性的神经胶质细胞外，以β-tubulin Ⅱ阳性神经元细胞最为多见，这些神经元呈现出多种形态；用单层分化法进行胚胎干细胞(ES)细胞的神经分化至13d时，分化形成的神经细胞种类与类胚体法相同，但神经元的细长纤维形成了复杂的网状结构，提示两种分化方法获得的神经元处于不同发育阶段。研究结果表明，两种分化方法均能为ES细胞提供从神经分化的起始到继续分化所需的环境，EB分化法适合于大量地获取分化的细胞，而单层分化法可直观地研究分化过程的细胞变化。     

牛肌肉卫星细胞向胰岛素分泌细胞的诱导转分化研究

肌肉卫星细胞是源自中胚层的肌源干细胞,具有增殖分化融合成肌管并形成肌细胞的能力.在体内条件下,肌肉卫星细胞不可能跨胚层分化为内胚层来源的胰腺细胞.本研究从牛(Bos taurus)胎儿肌肉中分离培养得到肌肉卫星细胞,并在体外条件下将其诱导成胰岛素分泌细胞.在诱导过程中,分析了与胰腺发育相关的胰十二指肠同源基因盒1基因(pancreatic and duodenal homeobox 1,PDX1)、神经原素3基因(neurogenin 3,NGN3)、淀粉酶基因(Amylase)和胰岛素基因(Insulin,INS)的动态表达情况.结果表明,PDX1作为决定胰腺分化发育和胰岛功能的主要调节基因,在诱导分化的第2天能够检测到其mRNA的表达,在第3天表达量达到了最大,第4天以后维持在较低水平.NGN3是内分泌细胞形成非常重要的转录因子,是能够将胰岛素分泌到胞外的关键基因,其mRNA在分化诱导的第3天开始表达,第4天达到最高水平,之后逐渐下降.Amylase是胰腺发育中细胞外分泌相关的基因,Amylase mRNA在第6天才开始表达,8d后达到最高.INS mRNA表达量在11～12 d最高,酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)发现,诱导形成的胰腺细胞能够正常分泌胰岛素,培养液中胰岛素的浓度在诱导的11～12 d达到最高值.向培养液中添加葡萄糖后,可使细胞的胰岛素分泌量显著提高,说明诱导得到的细胞类似于成体胰岛的功能,其胰岛素分泌受外界葡萄糖浓度的调节.上述结果表明,肌肉卫星细胞可以被诱导转分化为胰岛素分泌细胞,并对培养环境中的葡萄糖刺激做出应答反应.本研究结果为进一步的研究和临床应用提供基础资料.     

甘蔗愈伤组织和胚性细胞团的诱导与分化因素的研究

甘蔗愈伤组织和胚性细胞团的形成与分化,主要受以下因素的影响: 材料生理状态对愈伤组织或胚性细胞团形成的数质有明显差异。夏秋两季取材培养的愈伤组织质量好,诱导频率高;同一季节取材因叶龄和部位不同,诱导频率也有很大差异,以蔗尾梢生长点以上0～5厘米,-1～-4叶龄的外植体要比10厘米以上的同叶龄材料高3倍以上,诱导频率可高达100％。试验表明在N_6和MS培养基上形成的愈伤组织生长较好,色泽鲜艳,不易衰老,增殖速度快,分化频率高;在附加有2,4—D的各种培养基上,都能诱导甘蔗嫩叶产生愈伤组织,在0.5～3毫克/升可诱范围内,愈伤组织的诱导频率,随2,4—D浓度增加而提高,但继代能力表现为负相关的下降趋势,超过4毫克/升时尤其明显。在2～3毫克/升的高浓度2,4—D培养基上形成的愈伤组织质量好,色泽鲜黄,形态结构松散呈颗粒状,生长旺盛,增殖很快,在继代过程中容易产生具有胚性结构的细胞团,这些细胞团的继代和分化能力都较强。而外形结构紧密是淡灰色半透明状的愈伤组织,其继代和分化能力都较差。不同激素配比对愈伤组织或细胞团的分化频率和根芽生长是否协调有明显影响,试验表明以K1毫克/升:NAA0.5毫克/升:IBA0.5毫克/升的配比较为理想,细胞团增殖快,形成的绿苗多,分化频率高达90％以上,而且根芽分化比差小,生长较协调。愈伤组织或细胞团的年龄与分化有明显相关性,其分化频率随年龄增长而降低,并随着继代时间愈长,分化能力也渐趋下降以至不能分化。     

棉花抗盐生理研究进展

不同盐分类型胁迫均在棉花器官、组织、细胞、细胞器以及分子水平上造成伤害,影响了细胞内部生理生化过程,引起萌发出苗困难、生长受抑制、棉铃发育及纤维形成受阻.但棉花抗盐生理系统可通过自身及外部调节得到改善,从而在一定范围内提高其抗盐能力.     

胎猪胰腺干细胞的分离与鉴定

从胎猪胰腺分离得到一株细胞，该细胞经免疫组化检测表达PDX-1，GLUT-2，PCNA，Glucagon，somatostatin，polypeptide，弱表达nestin，目前细胞已传至58代。其在体外的生长行为有类似间充质干细胞样生长形态，经诱导后可分化为具有三维立体结构的类胰岛细胞团。成团后细胞强表达insulin、ck-19等标志，放免测定显示诱导成团后细胞胰岛素分泌量增加，显著高于未诱导细胞（P<0.05）。说明胰腺内存在着多潜能干细胞，本方法分离到胎猪胰腺干细胞，经诱导分化可形成有功能的胰岛样细胞团并释放胰岛素,有望为进一步研究异种胰腺干细胞移植治疗糖尿病提供材料。     

诱导模式对真菌激发子的影响

选择抗（耐）黄萎病的豫8号和感黄萎病的豫棉6两个棉花（Gossypium hirsutum L.)品种作为细胞系，选择高毒的V44和低毒的V64两种大丽轮枝菌9Verticillium dahlium Kle.b)为黄萎病原菌。设计不同毒力的病原菌分别直接诱导不同抗性的棉花细胞，不同毒力的病原菌和不同抗性的棉花细胞互相诱导的几种互作模式。发现棉花过氧化物酶（POD），超氧化物歧化酶（SOD）和多酚氧化酶（PPO）的比活经病原菌激发子直接诱导后有不同程度的提高；经交互诱导3种酶比活有进一步的变化，豫棉6号细胞交互诱导后3种酶的比活有了进一步的升高，而豫棉8号细胞交互诱导后3种酶的比活基本保持不变，并探讨了这些变化与棉花抗病性之间的关系。     

胎猪胰腺干细胞体外诱导分化为胰岛素分泌细胞及其移植治疗裸鼠糖尿病的研究

缺乏供体细胞制约着胰岛替代疗法在Ⅰ型糖尿病治疗过程中的应用。本研究对实验室分离保存的胎猪胰腺干细胞(fetal porcine pancreatic stem cells,FPPSCs),体外诱导分化为胰岛素分泌细胞以及移植治疗裸鼠糖尿病的能力进行了深入研究,以探讨该细胞株作为异种供体细胞的潜力。研究结果表明,该细胞体外增殖活力旺盛,其形态及表面抗原表达特征与间充质干细胞极其相似,除表达胰腺干细胞相关标志外,FPPSCs还表达一些胚胎干细胞的相关标志。采用无血清诱导方案诱导2周后,FPPSCs形成DTZ染色阳性的胰岛样细胞团(islet-like cell cluster,ICC),该细胞团表达胰岛素、Glut-2等胰岛素分泌细胞功能相关的蛋白。RT-PCR结果显示,诱导后,胰腺干细胞相关标志表达减弱,而成熟胰岛素分泌细胞相关标志表达增强。葡萄糖刺激实验结果显示,诱导后,FPPSCs合成、分泌胰岛素和C-肽的能力显著增强(P<0.05)。将诱导2周后的细胞移植到糖尿病裸鼠腹腔内,可缓解其高血糖状况。结果提示,FPPSCs具有间充质干细胞的特性,体外能够诱导分化为胰岛素分泌细胞,并具有改善糖尿病裸鼠高血糖症状的...     

四环素调控基因(TetO)诱导重编程的猪体细胞系建立

建立含有TetO-FUW-OSKM和FUW-M2rtTA的第二代猪(Sus scrofa domesticus)成纤维细胞,使其在添加强力霉素(doxycycline,DOX)而无需再次感染病毒的条件下可以重编程。将慢病毒(Lentiviral)质粒四环素调控基因(TetO)-FUW-OSKM和FUW-M2rtTA同时感染猪胎儿成纤维细胞(porcine embryonic fibroblasts,PEF),在添加DOX的培养条件下,形成诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)。随后,将iPSCs通过形成拟胚体(embryoid body,EB)再分化为成纤维样细胞,即TetO-PEF细胞。TetO-PEF携带TetO-FUW-OSKM和FUW-M2rtTA两个载体,且外源四因子拷贝数一致,在+DOX条件下调控四因子表达,直接驱动细胞重编程。本研究建立了TetO-PEF细胞系,为优化猪iPSCs培养条件提供了新的细胞资源。     

蕙兰胚珠发育及主要发育事件分布

为深入研究蕙兰生殖特性,揭示其种子萌发率低的原因,利用石蜡切片技术对蕙兰的胚珠发育以及主要发育事件分布等生殖生物学特征进行深入研究。结果表明,蕙兰的胚囊发育模式属于稀有的双孢子类型,其胚珠发育在个体间具有极大的不同步性。大孢子发育主要发生在授粉后40~45 d。授粉后40 d,约有22.33%的孢原细胞分化形成大孢子母细胞,经过第1次减数分裂,大孢子母细胞分化成为二分体,其中,合点端二分体进一步发育并液泡化,形成功能大孢子。授粉后45~55 d,大孢子发生过程结束,胚珠内开始进行胚囊分化。功能大孢子首先发育成为单核胚囊,经历第2次减数分裂后,单核胚囊分裂成为二核胚囊,之后进一步发育分化形成四核胚囊和八核胚囊。45 d时,单核胚囊、二核胚囊和四核胚囊所占比例分别为27.33%,30.67%和9.33%。55 d后,约有32.33%的胚囊发育成为成熟胚囊,这也是单个发育事件出现的最高比例。授粉后60 d,绝大多数胚珠完成胚囊发育。蕙兰胚珠发育的高度不同步性可能会导致后期胚胎细胞具有不同成熟度,这为后期胚胎发育研究以及确定种子采收时间提供了重要参考。     

木薯植株的解剖学研究

本文描述了木薯的根、茎、叶、花药和子房的解剖特点。由不定根发育形成的肉质块根,周皮上有皮孔;幼茎五棱形,在五个棱处的原形成层分化出强大的初生维管组织—木质部和韧皮部,而两棱之间部分,原形成层仅分化出初生韧皮部而无初生木质部。待维管形成层的发生和活动,产生次生维管组织,茎逐渐变圆;叶脉维管束鞘细胞含大量叶绿体;倒生胚珠具特殊构造;各部器官均有乳汁管。     

杜仲成熟干胚乳愈伤组织的诱导和植株再生

杜仲成熟干种子经ＧＡ３溶液浸泡后，去掉种胚，切取胚根端胚乳接种在愈伤组织诱导培养基上，５－７ｄ后多数胚乳顶端局部膨大，将膨大部分切下转入成分相同的新鲜培养基上，４０－５０ｄ后形成白色柔软的初生愈伤组织。初生愈伤组织经改造后变为绿色致密具分化能力的愈伤组织，转入分化培养基后出现器官分化，唯正常茎芽分化频率很低，且十分细弱，只有经壮苗培养后才能诱导生根。     

紫花苜蓿组织培养体系的建立

通过外植体类型、生长素和细胞分裂素浓度等因素对紫花苜蓿愈伤组织诱导、分化影响的试验,建立了高效的紫花苜蓿组织培养体系,即以真叶为外植体,在MS+0.2mg/L2,4-D+0.01mg/LNAA+0.2mg/LKT培养基上进行愈伤组织的诱导,诱导率可达到100%,愈伤组织继代2～3次,然后在MS培养基上分化,分化率可达90%。分化苗转入1/2MS培养基进行生根,形成完整的组培苗。愈伤组织诱导的正交试验表明,2,4-D浓度是影响苜蓿愈伤组织诱导率的主要因素,其次是外植体类型、NAA浓度、6-BA浓度和KT浓度;对苜蓿愈伤褐化率影响较大的因素是外植体类型,其次是KT、2,4-D、6-BA、NAA浓度。外植体类型对愈伤组织诱导率和褐化率的影响均达到极显著水平(P0.01);生长素(2,4-D、NAA)对苜蓿愈伤组织的诱导作用大于细胞分裂素(6-BA、KT)。分化试验表明,紫花苜蓿愈伤组织分化的主要决定因素是愈伤诱导培养基的激素配比。