运动损伤修复中外泌体的功能与价值研究

外泌体是通过细胞旁分泌作用释放的具有磷脂双分子层膜结构的纳米级小囊泡体,其内含物中主要包括蛋白质、脂质、微小RNA(microRNA,miRNA)和mRNA等物质.外泌体能够通过特定信号分子的转移实现细胞间的信息交流,促进细胞生成和血管新生.外泌体对运动性心脏损伤、骨骼肌损伤和神经系统损伤的修复再生具有重要研究价值,已经成为运动人体科学领域最新的研究方向.文章就外泌体的研究背景,外泌体对运动型心脏损伤、骨骼肌损伤和神经系统损伤的修复再生功能进行综述,以期了解其损伤修复的机理机制,为运动损伤修复和延长运动寿命提供理论支持.     

外泌体形成及在免疫调节中的作用研究进展

外泌体(exosomes)是动物组织细胞形成并释放到外周血液和体液中的大小为40～150 nm的扁盘状细胞外囊泡.由于外泌体包裹了大量的核酸、蛋白质、脂肪等信息物质,其在细胞间信息传递中发挥了重要作用并调控动物一些重要的生理活动.对外泌体的研究一直备受关注,在医学和免疫学领域得到广泛应用. 2013年,James Rothman、Randy Schekman和Thomas Südof 3位科学家因发现了细胞内囊泡运输的调控机制获得了诺贝尔生理学或医学奖,之后国内外每年发表外泌体相关文章1 500余篇.本文综述了外泌体的形成与功能以及在免疫调节中的作用,以期为利用外泌体开发肿瘤早期诊断、免疫治疗和动物疾病控制的新途径、新方法提供参考.     

离子对深海适冷菌Pseudoalteromonas sp. SM9913胞外蛋白酶分泌的影响

以海水产酶发酵培养基为对照，研究了多种离子对P. sp. SM9913 胞外蛋白酶分泌的影响. 结果表明，淡水培养基添加NaCl浓度越高，胞外蛋白酶的酶活也越高. K+、Ca2+、磷酸盐的协同作用促进胞外蛋白酶的分泌. Mg2+能够明显抑制胞外蛋白酶的分泌. Fe3＋对胞外蛋白酶分泌影响不明显.Sr2+、F-、B-这3种离子单独作用时都能促进胞外蛋白酶的分泌；但是这3种离子协同作用劣于单独作用. 实验浓度下上述多种离子协同作用可明显促进胞外蛋白酶的分泌. 该研究为深海适冷菌P. sp. SM9913 的淡水化培养和进一步研究胞外蛋白酶的分泌机制奠定了基础.     

重组DNA技术在酿酒酵母遗传操作中的应用

在传统的食品和酿造工业中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）占有十分重要的地位。如今，这种简单的单细胞真核生物已成为遗传研究的一种模式。本文简要综述了重组DNA技术应用于酿酒酵母遗传操作的研究进展，并指出了重组DNA技术作为新的遗传操作的手段，其应用性明显优于经典的遗传操作方法.     

外泌体在肿瘤精准诊断与治疗中的研究进展

外泌体是一种细胞分泌的具有双层脂质膜结构的纳米级小囊泡,几乎所有类型的细胞均可分泌外泌体.外泌体携带核酸和蛋白质等多种具有生物活性的内容物,不但在细胞间信息交流和信号转导的过程中起着重要作用,而且参与了人体内各种病理生理过程.肿瘤来源的外泌体参与调控肿瘤的生长发展和侵袭转移等过程.外泌体在肿瘤的早期诊断、预后判断以及作为治疗工具方面的探索已经成为研究热点.对外泌体在肿瘤的发生发展、转移侵袭以及在肿瘤精准诊断与个体化治疗方面的进展作一综述.     

SIRPα工程化外泌体阻断CD47/SIRPα信号轴研究

目的 制备分离表达SIRPα受体的外泌体,探讨SIRPα外泌体的结构特性、细胞相容性、细胞内分布及对CD47/SIRPα信号轴的阻断作用.方法 通过差异超速离心法从稳定表达SIRPα的HEK293T细胞中分离外泌体;通过动态光散射法(DLS)和透射电子显微镜(TEM)技术分析外泌体的尺寸和形貌特征;Western blotting检测外泌体中SIRPα-GFP融合蛋白的表达;通过MTT法检测外泌体与NIH3T3细胞的相容性;应用荧光成像技术研究外泌体的肿瘤细胞内吞;通过肿瘤细胞与巨噬细胞共孵育实验研究外泌体阻断CD47/SIRPα信号轴带来的肿瘤吞噬效果.结果 利用差异超速离心法分离得到尺寸约80 nm的SIRPα外泌体,透射电子显微镜下呈现为尺寸均一的圆球形结构;免疫印迹证实了外泌体上SIRPα的表达;MTT法结果显示SIRPα外泌体具有良好的生物相容性;荧光成像结果显示SIRPα外泌体被B16F10细胞内吞后分散在细胞质中;共孵育实验表明SIRPα外泌体与CD47单抗均能促进骨髓来源巨噬细胞吞噬黑色素瘤细胞.结论 成功分离了表面表达SIRPα受体的外泌体;SIRPα外泌体具有良好的细胞相容性;SIRPα外泌体可以成功阻断CD47/SIRPα信号通路,激活了巨噬细胞对肿瘤的吞噬功能.     

鱼类基质金属蛋白酶研究进展

基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)是一类高度保守的生物活性依赖于金属离子的内切酶家族,是参与降解细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)的重要蛋白酶,MMP几乎能降解细胞外基质的所有成分.研究发现,MMPs参与鱼类胶原蛋白的降解,是导致鱼类死后肌肉软化的重要原因.综述了基质金属蛋白酶的分类、结构、调节机制以及它们对鱼类肌肉胶原蛋白的作用.     

品种和发芽条件对高粱芽的蛋白质水解活性的影响

麦芽的蛋白酶在酿造上,尤其在发酵期间对酵母生长所必需的营养物质——游离氨基酸的形成十分重要,麦芽中蛋白质水解活性受许多内外因素,如品种、麦粒质量和发芽条件的影响.最近,本实验室建立了高粱芽的蛋白酶和羧肽酶活性的测量方法,这些检测方法包括应用新的酶提取剂,3.33mM二硫苏糖醇加0.6M碘化锂,并使用底物高粱醇溶谷蛋白.本文就品种和发芽条件对高粱芽的蛋白酶和羧肽酶活性的影响作一报导.     

间充质干细胞来源外泌体修复创伤性脊髓损伤

创伤性脊髓损伤能够引起严重的神经功能障碍,是一种严重影响生活质量的疾病,但是尚无有效的治疗方法.现有研究中发现间充质干细胞来源的外泌体具有和母细胞相似的生理作用,将外泌体应用于脊髓损伤的治疗中表现出令人满意的疗效,而且移植外泌体后尚未发现在移植干细胞中出现的致瘤等副作用,因此外泌体将会是脊髓损伤治疗中一个很有前景的策略.现将间充质干细胞来源外泌体在治疗创伤性脊髓损伤中的研究进展进行综述,分析目前存在的问题和未来的研究方向.     

一株海洋微生物产蛋白酶抗肿瘤活性的初步探讨

研究寄生于沙蚕消化道的嗜麦芽寡养单胞菌D2株外泌胞外蛋白酶(D2蛋白酶)的抗肿瘤活性。选用鼠乳癌细胞EMT6作为靶细胞,经0.2～2000mg/L的D2蛋白酶作用不同时间,采用MTT法对体外培养靶细胞进行细胞增殖抑制率检测,并与阳性对照组(紫杉醇组)和正常细胞对照组(人胚肺细胞组)比较。MTT检测结果显示,D2蛋白酶对鼠乳癌细胞EMT6增殖有抑制作用,且呈现浓度及时间效应关系。检测结果证明D2蛋白酶具有一定的抗肿瘤活性。     

酶法提取海洋下杂鱼液化蛋白质的研究

用海南岛低值下杂鱼酶法降解提取液化蛋白工艺进行了初步探讨．结果表明，利用本岛热带作物中提取的蛋白酶可直接用于海产品的加工．此液化蛋白质溶解性能好，品质优良，氨基酸品种齐全、含量高，可直接应用于食品及医药工业．     

我国水产食品安全与质量控制研究现状和发展趋势

旨在揭示我国水产食品安全和质量控制等研究的发展规律,通过分析近几年国内外文献报导,聚焦水产食品安全与质量控制科研方面的发展,得知国内大部分研究工作聚集在质量检测和控制技术,其余的分布于追溯体系、预警机制和风险评估.目前,我国的水产食品安全性已经达到可控状态,质量检测与控制技术等已获得很大进步.但与国外先进的技术和管理制度相比较,我国仍存有一些问题,在下一步的工作中,需要借鉴国际上的先进经验,结合我国社会与科技状况,进一步推动和完善我国水产食品质量安全保障技术.     

产分泌蛋白酶酵母菌株的筛选

用含有脱脂奶粉平板上点种培养的方法,从分属９３个属,４９２个种的２１２９０个酵母菌株中进行筛选,发现有分属２７个属,８７个种的１６５个酵母菌株可产一不同程度的分泌蛋白酶,并对其中３株产酶较高的菌株进行培养基对产酶量的研究。     

热带假丝酵母的二元酸分泌现象及其动力学

在热带假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）发酵生产十三碳二元酸体系中,细胞内有二元酸和烷烃的积累,其酸分泌相对于胞内烷烃的转化是快过程。为了解释细胞的生物转化和分泌现象,并为对进一步生产过程的优化作理论准备,该文以静息细胞为实验对象,利用磷酸盐缓冲溶液的ｐＨ 变化精确计算酸分泌量,研究了胞内二元酸的分泌和烷烃转化过程的动力学,基于酸分泌机理,提出了产酸化学结构模型。模型对二元酸分泌量的模拟值与试验值吻合得较好,相对误差小于５％ 。     

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)X93胞外产物对病原弧菌抑制效果的研究

采用平板扩散法对从健康大黄鱼肠道中分离筛选到的对病原弧菌有抑制作用的短小芽孢杆菌(Bacillus pumi-lus)X93胞外产物(Extracellular products,ECP)作用的环境影响因子进行了研究。结果显示,菌株X93胞外产物的抑菌活性强弱随着培养时间的不同而不同,胞外产物对pH条件有一定的耐受性,对热敏感,不耐高温,过高的NaCl能使其抑菌活性降低,蛋白酶K和不同浓度的FeCl3均对其抑菌活性产生影响,其胞外产物发挥最大抑菌作用的最适培养时间、温度、pH、盐度分别为48 h、28℃、pH 7和0.5%。     

TRPC channel activation by extracellular thioredoxin

Mammalian homologues of Drosophila melanogaster transient receptor potential (TRP) are a large family of multimeric cation channels that act, or putatively act, as sensors of one or more chemical factor. Major research objectives are the identification of endogenous activators and the determination of cellular and tissue functions of these channels. Here we show the activation of TRPC5 (canonical TRP 5) homomultimeric and TRPC5-TRPC1 heteromultimeric channels by extracellular reduced thioredoxin, which acts by breaking a disulphide bridge in the predicted extracellular loop adjacent to the ion-selectivity filter of TRPC5. Thioredoxin is an endogenous redox protein with established intracellular functions, but it is also secreted and its extracellular targets are largely unknown. Particularly high extracellular concentrations of thioredoxin are apparent in rheumatoid arthritis, an inflammatory joint disease that disables millions of people worldwide. We show that TRPC5 and TRPC1 are expressed in secretory fibroblast-like synoviocytes from patients with rheumatoid arthritis, that endogenous TRPC5-TRPC1 channels of the cells are activated by reduced thioredoxin, and that blockade of the channels enhances secretory activity and prevents the suppression of secretion by thioredoxin. The data indicate the presence of a previously unrecognized ion-channel activation mechanism that couples extracellular thioredoxin to cell function.     

Inhibition of histamine secretion from mast cells

Histamine secretion from mast cells may be inhibited by elevated intracellular levels of cyclic AMP and by several anti-allergic drugs. These compounds are claimed to act directly on the calcium-gating mechanism activated by the anaphylactic reaction, preventing influx of Ca2+ from the external environment and so blocking exocytosis. To examine this hypothesis further, we have compared here the histamine secretion induced by immunoglobulin E-directed ligands in the presence and absence of added calcium and by the ionophore A23187. Exocytosis evoked by these former agents was originally considered to be almost totally dependent on extracellular calcium but recent studies have shown otherwise. In the absence of added cation, the agents act by mobilizing membrane-bound or intracellular stores of calcium. We show that here that a variety of anti-allergic drugs are potent inhibitors in the conditions used, suggesting that alternative explanations for their action must be sought.     

Bacterial growth blocked by a synthetic peptide based on the structure of a human proteinase inhibitor

Cysteine proteinases are important not only in the intracellular catabolism of peptides and proteins and in the processing of prohormones and proenzymes, but also in the penetration of normal human tissue by malignant cells and possibly microorganisms, including viruses. Cystatin C is a human cysteine proteinase inhibitor present in extracellular fluids. We have synthesized peptide derivatives mimicking the proposed proteinase-binding centre of cystatin C and find that they irreversibly inhibit cysteine proteinases. Several bacteria produce proteinases, so we tested a tripeptide derivative (Z-LVG-CHN2) for in vitro anti-bacterial activity against a large number of bacterial strains belonging to thirteen different species. It was found to inhibit specifically the growth of all strains of group A streptococci. The susceptibility of these human pathogens to the peptide was compared with that to well-established anti-streptococcal antibiotics such as tetracycline and bacitracin. Moreover, the peptide was active in vivo against group A streptococci: mice injected with lethal doses of these bacteria were cured by a single injection of Z-LVG-CHN2. The cysteine proteinase produced by group A streptococci was isolated and found to be inhibited by Z-LVG-CHN2; moreover, excess proteinase relieved the growth inhibition caused by the peptide derivative, suggesting that the antibacterial activity of Z-LVG-CHN2 is due to inhibition of this cysteine proteinase. This strategy of blocking proteinases with peptide derivatives that mimic naturally occurring inhibitors could be useful in the construction of new agents against other microorganisms, including viruses.     

维生素和植物生长调节剂对正红菇HG416生长的影响

通过应用酯酶同工酶分析方法。探讨了不同维生素和植物生长调节剂对正红菇HG416生长的影响。结果表明：浓度为100mg/L的VE不论对提高菌株胞内酯酶活性,还是对增加菌株胞外可溶性蛋白的分泌量,效果教师最佳的;几种植物生长调节剂影响正红菇菌丝生长的实验结果显示,4mg/L的吲哚丁酸能最大限度的促进菌丝的生长、胞内酯酶活性及其胞外可溶性蛋白的分泌量。