培养条件对银杏悬浮培养细胞黄酮合成影响研究

对12个不同品种的银杏树幼叶及其诱导的愈伤组织进行了银杏黄酮含量测定，发现其存在较大差异．梅核品种幼叶黄酮含量最高，为3．32％，大白果品种幼叶黄酮含量最低，为0.84％；梅核品种幼叶愈伤组织黄酮含量最高，达1．26％，岭南品种幼叶愈伤组织黄酮含量最低，为0.22％．选取生长旺盛、银杏黄酮含量高的愈伤组织在B5液体培养基中进行了银杏细胞悬浮培养，研究了多种条件对银杏细胞生长和银杏黄酮含量的影响．结果表明，在150mL培养瓶中装有50mL培养液，接种量为鲜质量30—40g/L，对培养细胞给予3000—40001x的光照、以蔗糖为碳源最有利于黄酮的合成，以葡萄糖为碳源则最有利于细胞生长．HPLC检测结果显示，银杏悬浮培养细胞中银杏黄酮含量可达细胞干质量的2．82％．     

植物生长调节剂对黄芪愈伤组织中次生代谢物质含量的影响

以膜荚黄芪幼叶为外植体,运用正交设计研究2,4-D、6-BA和NAA等3种植物生长调节剂组合对愈伤组织生产黄芪黄酮和黄芪皂苷的影响．结果表明对黄芪黄酮合成的影响顺序是：NAA〉6-BA〉2,4-D;对黄芪皂苷合成的影响顺序是：2,4-D〉6-BA〉NAA．生产黄芪黄酮和黄芪皂苷的最佳培养基分别为;MS＋2,4-D（0．5mg·L^-1）＋6-BA（1．0mg·L^-1）＋NAA（2．0mg·L^-1和MS＋2,4-D（2．0mg·L^-1）＋6-BA（2．0mg·L^-1）＋NAA（1．0mg·L^-1）．细胞伸长有利于愈伤组织中次生代谢物质的合成．     

观果凤梨的组织培养研究

以光滑风梨腋芽为外植体,研究观果凤梨组培快繁的适宜条件．结果表明：培养基MS＋6-BA1．0mg·L^-1＋NAA0．2mg·L^-1ρ（蔗糖）30g·L^-1有利于诱导出芽,可用于初代培养;MS＋6-BA2．0mg·L^-1＋NAA0．2mg·L^-1＋φ（CW）10％＋ρ（蔗糖）40g·L^-1有利于形成丛生芽,可用于增殖培养,月增殖系数可达5．3倍;1／2MS＋IBA0．5mg·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1ρ（蔗糖）40g·L^-1适宜诱导生根,生根率达96．7％;试管苗经晾苗4d后,移栽在椰糠与表土（V：V=1：1）的混合基质中,成活率高达95．0％．     

西红花球茎组织培养的研究

以球茎切块为外植体，MS为基本培养基，0．5mg·L^-1 6-BA和2mg·L^-1 2，4-D为激素，在（20±2）℃，黑暗环境下培养，可以获得98％的愈伤组织诱导率．愈伤转入MS＋5．0mg·L^-1 6-BA＋5．0mg·L^-1 NAA培养基中，可诱导丛生芽的产生，将丛生芽切成单个不定芽后转移到MS＋4．0mg·L^-1 6-BA＋0．5mg·L^-1 NAA的培养基中，光照条件下可诱导新生小球茎的产生．     

银杏茎段的组织培养及其植株再生

用银杏无菌苗带腋芽的茎段为外植体,在含不同激素的培养基上诱导愈伤组织,结果表明,以MS＋NAA 2．0mg.L^-1 6-BA 0.1mg.L^-1 LH2.0g.L^-1为最适宜培养基;在1／2MS＋6－BA 2．0mg.L^-1 NAA 0.2mg.L^-1 多效唑（15％可湿性粉剂）8．0mg.L^-1AC0.5gL^-1培养基上,由带腋芽的茎段分化芽,分化出的芽再在White 根多壮2（50％吲．奈粉剂）2．0mg.L^-1培养基上分化根,并形成试管苗,芽的分化率为53．1％,生根率为90．3％,试管苗移栽成活率为85％。     

缺氧胁迫小细胞团法选育高产黄酮苷悬浮细胞系

以银杏优良品种的种苗诱导愈伤组织,考察了B5,sH,MS,White4种培养基对银杏愈伤组织生长性状和黄酮苷合成能力的影响,采用缺氧胁迫小细胞团法从愈伤组织中筛选高产黄酮苷的细胞系,并对细胞系在悬浮培养时的条件进行了优化.结果表明TZG-1培养周期18d,生长指数为4.12,黄酮苷含量为1.25％,比愈伤组织提高了257.1％;Ms培养基有利于形成质地松软的愈伤组织,当培养基中NH4+与NO3-的浓度比为20.3/39.4或10.3/29.1,蔗糖质量浓度为30g/L或40g/L,pH值为5.6～6.0时,有利于细胞生长和黄酮苷合成.     

银杏叶片愈伤组织培养及光暗条件对黄酮含量的影响

以银杏嫩叶为外植体,在添加不同种类和浓度激素的MS培养基上进行愈伤组织诱导研究,同时分析光暗条件对愈伤组织生长和黄酮含量的影响。愈伤组织生长后,用分光光度比色法分析测定银杏愈伤组织黄酮含量。实验结果:在光照条件下,添加激素6-BA1.0mg/L和NAA2.0 mg/L的MS培养基中,诱导形成的愈伤组织生长最好,黄酮含量较高。     

土人参愈伤组织诱导及植株快繁体系建立

以MS为基本培养基,附加不同浓度的NAA、6-BA,研究不同激素水平对茎段、叶片、果实愈伤组织诱导的影响。结果表明叶片、茎段的愈伤组织诱导效果最好,出愈率可达100％。愈伤组织在适宜培养基上能快速增殖。带腋芽茎段在培养过程中可产生丛生芽,经继代培养可大量增殖。小苗在无激素MS培养基中容易生根,健壮小苗经驯化后移栽,成活率可达90％。建立了土人参的快繁体系。愈伤组织诱导培养基：MS＋NAA 1．0mg·L^-1＋6-BA 1．0—2．0mg·L^-1;增殖培养基：MS＋6-BA 0．5mg·L^-1＋NAA 0．5mg·L^-1;丛生芽继代增殖培养基：MS＋6-BA 1．0mg·L^-1＋IAA 0．1mg·L^-1。     

人参快繁条件的优化

以人参种子在无菌条件下培养出来的无菌苗的幼嫩叶片以及不同器官、人参成体的块茎及叶作为外植体,接种到附加着不同浓度的NAA、KT、IAA、6-BA以及它们分别组合的MS固体培养基上;总结出外植体在同样的诱导条件下有很大的差异,且不同的培养基对外植体的影响不同。结果表明,MS＋NAA0.1mg·L^-1＋KT0.5mg·L^-1是诱导愈伤组织的最好的培养基;最理想的诱导丛生芽的培养基为MS＋6-BA1.5 mg·L^-1＋NAA0.5mg·L^-1;最佳诱导不定芽生根的培养基为MS＋KT0.5mg·L^-1＋IAA0.3mg·L^-1＋6-BA0.2mg·L^-1＋活性炭3g;移栽、扦插的试管苗在炉灰渣中生长得最旺盛,所以最理想的基质是炉灰渣。     

银杏细胞悬浮培养及其黄酮类物质生产

探讨了银杏细胞悬浮培养过程中诸多因子对细胞生长率和黄酮类化合物含量的影响，结果表明：液体培养基以N6＋NAA（1.6-1.8) BA0.5为最好；最适接种量为2.5g-3.0g／瓶（鲜重），最适pH值为6.0-6.5，附加MES效果更好；碳源以40％葡萄糖进行细胞培养的30％蔗糖进行黄酮生产较好；细胞生长和生产黄酮的激素、碳源等培养条件不同，激素类以NAA（1.6-1.8) BA0.5进行细胞培养、以GA0.5 KT1.0进行黄酮生产最佳，附加黄酮前体物PLA可提高黄酮产量，放线菌素－D不适合黄酮类药用物质生产。