固定化葡萄糖异构酶的研究——Ⅰ萄葡糖异构酶固定化方法的比较

萄葡糖异构酶亦称木糖异构酶(E.C.5.3.1.5),它能将醛糖转化为相应的酮糖.因此将葡萄糖异构酶固定化后连续地使葡萄糖转变为果糖,对提高产品质量、降低酶的成本就具有较大的优越性.由于它在生产上不受地区和季节的限制,原料来源丰富,生产设备简单,故在六十年代末以来,受到人们的广泛重视.目前在国内已有十来个单位进行该酶的固定化技术的研究,在国外固定化葡萄糖异构酶已用于工业化生产.如日本参松公司采用白色链霉菌热固定法可反复使用七次;美国克林顿公司(Clinton Co.)采用DEAE纤维素吸附法酶的半衰期为16天左右;丹麦诺沃公司采用聚丙烯酰胺     

碱性ABSE接枝淀粉固定化葡萄糖异构酶

以2'-氯乙基二乙胺盐酸盐（DEAE）为载体修饰剂,对β-硫酸酯乙砜基苯胺（SESA）为载体活化剂,制备多孔球状碱性氨基苯磺酰乙基接枝淀粉（ABSE接枝淀粉）载体,采用重氮化方法固定化葡萄糖异构酶．测定DEAE基团量对固定化葡萄糖异构酶pH-活力的影响,同时对葡萄糖异构酶的最佳固定化条件和性质进行详细的研究．结果表明,DEAE基因虽然并没有使固定化异构酶的最适pH发生移动,但却使其加宽,于pH6仍保持最大活力85％．葡萄糖异构酶经固定化后pH稳定性明显提高,但是温度稳定性却有所下降．该固定化葡萄糖异构酶于4℃储存2个月,活力没有明显改变．     

双酶体系(葡萄糖淀粉酶—葡萄糖异构酶)固定化的研究

利用正交试验L_(16)(4~4×2~3)对大孔型阴离子交换树脂D_(290)、D_(296)、D_(370)制备固定化双酶(葡萄糖淀粉酶—葡萄糖异构酶)的不同条件进行筛选的结果表明:对制备固定化双酶影响的七个因素中,以树脂的转型、葡萄糖异构酶量影响最大,其次是葡萄糖淀粉酶量及交联剂的最终浓度,而所选用的缓冲液种类、P~H、离子强度等影响甚小。采用正交试验获得的最佳条件分别固定两种单酸和同时固定双酶进行比较,其固定化双酶的酶活性约高于两种固定单酶(混合或串联使用)的酶活性。     

猪末端转脱氧核苷酸酶的分离纯化

末端转脱氧核苷酸酶催化脱氧垓苷三磷酸连接到单链多聚脱氧核苷酸的3′—OH末端。猪胸腺匀浆抽提液,经磷酸纤维素吸附层析,硫酸铵分级沉淀,DEAE—纤维素负吸附,葡聚糖凝胶G100过滤和两次羟基磷灰石柱层析,分离后得到该酶,纯化倍数达2736倍。葡聚糖凝胶G100过滤分离出三个活力峰,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示其分子量分别为60000,53000和32000道尔顿,其中53000组分比活最高,达每毫克蛋白3135活力单位。     

固定化葡萄糖异构酶的制备和性质

引言酶是蛋白质,是具有高度专一性与高效率的生物催化剂。由于酶有容易失活,不能多次使用等缺点,因此使酶的应用受到限制。将酶固定在不溶性载体上,即制成固定化酶,则稳定性增加,并可反复使用。固定化酶技术已为许多国家研究和应用。由于酶的纯化比较麻烦,而且费用较高,近年来又发展了直接将酶固定在菌体内或将产酶菌体固定在载体上,即固定化细胞。使用固定化细胞或固定化酶,能达到同一目的,而前者可以最大限度地提高酶的效率,能降低成本,因此目前对固定化细胞的研究不断深入,品种也不断增加。葡萄糖异构酶可以把葡萄糖转化为果糖。许多国家为了解决食糖供应不足的困难,正在利用淀粉作原料,用葡萄糖异构酶进行转化,生产异构糖,这种糖含有45%的果糖和55%的葡萄糖,甜度与蔗糖相仿,类似蜂蜜香味,可以代替蔗糖用于食品工业。这种糖此蔗糖更     

皖南山区尖吻蝮蛇毒新出血毒素的纯化及其性质的初步研究

用DEAE·Sephadex A-50,Sephadex G-75,DE_(52)纤维素和Sephadex G-100柱层析,从尖吻蝮蛇毒中纯化出一新的出血毒素(AaH—IV),是糖蛋白,有酪蛋白水解酶和纤溶酶活性,但无精氨酸酯酶等的一些酶活性.其分子量51,000,pI 是5.4.     

分子筛固定化葡萄糖淀粉酶的制备

以改性分子筛作为固定化酶的载体,用固定化葡萄糖淀粉酶生产葡萄糖。一种新的基于多次吸附多次戊二醛交联的固定化方法增加了固定化葡萄糖淀粉酶的稳定性,另讨论了该方法的机理。制备的固定化葡萄糖淀粉酶在柱反应器中水解淀粉连续使用２２ｄ,产物ＤＥ值维持在９５左右基本保持不变。     

固定化双酶体系（葡萄糖淀粉酶—葡萄糖异构酶）的性质研究

采用大孔型阴离子交换树脂吸附与戊二醛交联法相结合,制备固定化双酶.该酶是将葡萄糖淀粉酶(GA)和葡萄糖异构酶(GI)同时固定在同一载体上,其酶作用的最适pH为6.8,最适温度为55℃,最适底物浓度为15％,热稳定性在50℃以下较稳定.     

磁场影响固定化葡萄糖异构酶活性的研究

采用丹麦Novo公司测固定化葡萄糖异构酶 (SweetzymeT)活力的反应体系 ,用半胱氨酸 -咔唑法评价酶的活性 ,研究了磁场在不同条件下对酶活力的影响。实验发现 :在不同磁化时间、温度、磁场强度和pH条件下磁化底物 ,使其活性增加可达 2 8 6 % ,并且具有可逆性 ,但磁化固定化酶或磁场作用于酶—底物反应体系 ,未见酶活力的明显变化。     

明胶—戊二醛固定化双酶体系的研究

采用明胶包埋、戊二醛交联相结合的方法制备固定化葡萄糖淀粉酶—葡萄糖异构酶双酶体系.该酶制备的最适条件是温度50℃pH值6.5.该酶反应的最适温度为50℃,最适pH为5.4,最适底物浓度为15％,热稳定性在50℃以下.     

鄱阳湖滨湖水牛锥虫病的研究——一、伊氏锥虫的分离和纯化

我们利用自制的离子交换柱,使用进口的(英国,DE-52)和国产的(上海,DEAE-1)DEAE纤维素,对严重感染伊氏锥虫的小白鼠、大白鼠和小犬的血液进行了成功的分离,获得了无血细胞和无血小板的纯净锥虫.经过DEAE纤维素提纯后的虫数是:小白鼠8—20亿;大白鼠41—310亿;小犬120—650亿.分离和提纯后的锥虫运动活泼,具有感染力.分离主要依赖宿主血细胞、血小板和锥虫之间表面电荷的差异;成功的关键是缓冲液PH的标准状态和离子强度.     

固定化葡萄糖异构酶的研究——Ⅱ.固定化葡萄糖异构酶的性质

固定化葡萄糖异构酶能连续地使葡萄糖异构化成为果糖,生产葡果糖浆,其甜度近似于蔗糖,为生产食用糖源提供了一条新途径.它具有能反复使用,适于自动化、管道化生产,不会给产品带进杂质等优点.目前在国外已大规模投入生产。在国内也在葡萄糖连续异构化的扩大试验中取得了较为满意的结果。本文比较研究了固定化葡萄糖异构酶与自然酶的一些性质。因自然酶经明胶包埋、     

离子交换层析法分离大鲵乳酸脱氢酶同工酶

采用DEAE—纤维素阴离子交换层析,以0.02M tris-HCl+0.06M NaClpH7.8和0.02M tris-HCl0.15M NaCl pH7.4缓冲液分部洗脱,可以分离大鲵乳酸氢酶同工酶LDH_1和LDH_5。     

用蕉芋淀粉酶法制造果葡糖浆

本文研究了以蕉芋淀粉为原料,用淀粉酶和固定化葡萄糖异构酶生产果葡糖浆的各种最适条件,包括pH、酶浓度、底物浓度、金属离子、温度、时间等因素。结果表明,α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶水解蕉芋淀粉的葡萄糖值可达95一99%。固定化葡萄糖异构酶转化葡萄糖为果糖的转化率可达45-54%,其甜度超过同浓度的蔗糖。通过与木薯、甘薯淀粉比较实验表明,蕉芋淀粉是制造果糖的良好原料,而且,它在长江以南均可普遍栽培。     

大孔树脂吸附固定化脂肪酶机理研究

目的 探讨大孔树脂吸附固定化脂肪酶机理.方法 选取4种不同树脂(XAD1180,XAD7HP,A568,XAD18),通过氮气低温吸附法对栽酶树脂的孔径分布情况进行分析,对吸附-交联法制备固定化脂肪酶的工艺条件进行考察.结果 XAD1180为最适的固定化载体,其最佳固定化条件为:给酶量1 400～1 600μg/mL,戊二醛浓度为0.05%(体积分数),缓冲液pH7.5,吸附温度30℃,吸附时间10 h.结论 XAD1180树脂为南极假丝酵母脂肪酶理想的吸附固定化栽体.吸附同时用戊二醛交联,可以起一定加固脂肪酶的作用.     

胰蛋白酶在两种载体上的固定化效果比较

以片状载体和偶联DEAE的纤维素微球作为固定化载体,以戊二醛作为交联剂,制备固定化胰蛋白酶,研究交联剂浓度、时间、交联温度等条件对交联效果的影响,并对固定化后的胰蛋白酶的效果进行探究.结果显示,在片状载体和纤维素微球上,固定化最适条件大致相同,最适交联剂浓度为2%,胰蛋白酶浓度为3%,最佳交联时间为10h,交联温度和固定化温度均为10℃.纤维素微球和片状载体在相同条件下酶固载量分别达到145mg/g和112.6mg/g,活力回收率分别为17.3%和14%.两种载体相比,纤维素微球作为固定胰蛋白酶的载体效果更佳.     

壳聚糖铜固定化漆酶研究

用壳聚糖与CuSO2.5H2O溶液络合成的壳聚糖铜为载体,固定化白毒鹅膏菌胞外漆酶,测定了铜盐浓度、络合时间、固定化时缓冲液的pH值、固定化时间、给酶量对固定化酶性质的影响。实验得出固定化最佳条件是在20℃、pH7.0的磷酸缓冲液中,固定2个小时,这种条件下酶活保持率为50.2%。固定化酶的最适pH值4.0比游离酶的4.6偏酸;固定化酶的最适温度24℃。     

二叶葎多糖的研究——1.分离、纯化及其基本性质

二叶葎用沸水抽提,三氟乙酸—正丁醉除蛋白,乙醇沉淀得二叶葎多糖粗品.比粗品进一步通过 CTAB 和 DEAE -纤维素柱层析纯化.其主要成份用 Sephadex G—150分子筛、纸层析、醋酸纤维薄膜电泳和琼脂糖电泳均证明是均一的.用 Sephadex G—200凝胶过滤法测得分子量是79000.纯多糖糖含量以葡萄糖为标准是69%,以半乳糖为标准是156%,以糖原为标准是70.4%.糖醛酸含量是74%.体内试验表明二叶葎多糖对移植 S—130肉瘤细胞具有抑制作用.     

以明胶为载体的固定化葡萄糖氧化酶的研究

1.研究了明胶经戊二醛处理后,酶经渗透制备固定化葡萄糖氧化酶的方法。采用这种方法制备的固定化葡萄糖氧化酶活力高、使用稳定。2.酶固定化后,表观米氏常数有所增加,热稳定性有所提高,其他葡萄糖氧化酶性质几乎没有改变。固定化酶提高了酶的稳定性和利用效率,促使近十几年来固定化酶的方法和技术的飞跃发展。固定化葡萄糖异构酶生产果葡糖浆、固定化青霉素酰胺酶生产半合成青霉素中间体6APA等一系列工业应用的成功,已使固定化酶成为新兴的酶工艺的重要组成部分。固定化葡萄糖氧化酶可用于制葡萄糖酸,近年来还用于血糖的分析。明胶是一种优良载体,适用于多种酶的固定化。本文报导了作者用渗透法制备明胶固定化酶的方法及固定化葡萄糖氧化酶的酶学性质等方面的工作。     

固定化氨基酰化酶性质的研究

1、米曲氨基酰化酶吸附于DEAE—萄聚糖凝胶制得固定化酶。2、考察了固定化酶的一些性质。固定化对氨基酰化酶的温度—活力关系没有影响;固定化酶的表观米氏常数与天然酶的米氏常数差别也不大;固定化酶的热稳定性提高5℃。3、固定化酶及天然酶水解乙酰—DL—色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸速度较快,缬氨酸、丙氨酸和α—氨基丁酸的衍生物居中,非天然氨基酸对甲氧苯乙氨酸的衍生物最慢。4、比较了固定化氨基酰化酶柱式法与分批法降解乙酰—DL—α—氨基丁酸的运转情况,表明酶柱在45℃,169小时运转过程中,能稳定地拆分底物。