Walker-256腹水大鼠单个核细胞IFN-γ、IL-4基因表达研究

探讨Walker-256腹水型大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mono-nuclear cell PBMC)中Thl和Th2类细胞因子IFN-γ、IL-4基因表达水平,进一步了解恶性肿瘤机体免疫状态的变化.建立Walker-256腹水型大鼠模型,观察其生存状态.两周后分离PBMC,用RT-PCR法检测IL-4、IFN-γ的表达水平.结果表明,腹水大鼠IL-4基因表达水平较对照组升高(分别为0.48±0.06、0.33±0.04,p＜0.05),而IFN-γ基因表达水平较对照组降低(分别为0.24±0.02、0.37±0.02,p＜0.05).结论为:腹水型肿瘤大鼠Th1/Th2平衡被打破,向Th2漂移,通过检测IL-4和IFN-γ基因表达可了解肿瘤机体免疫状态.     

经水摄入三氯乙烯对BALB/c小鼠干扰素-γ和白细胞介素-4的影响

探讨经水摄入三氯乙烯(TCE)对BALB/c小鼠的干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的影响。将60只BALB/c雌性小鼠随机分为3组:空白对照组、溶剂对照组和TCE染毒组,每组20只,TCE染毒组经饮水摄入2.5g/L TCE,染毒2、4、8、12周,每组各处死5只小鼠,取其外周血和脾脏。利用免疫组化法检测脾脏组织中IFN-γ和IL-4的表达,ELISA法检测外周血血清中IFN-γ和IL-4的含量。与空白对照组和溶剂对照组相比,TCE染毒组小鼠脾脏与血液中IFN-γ和IL-4的表达明显上升,IFN-γ/IL-4比例明显下降,且差异有统计学意义。经水摄入TCE能够同时上调小鼠体内IFN-γ和IL-4的表达,进而可能上调Th1和Th2细胞免疫应答,而Th2细胞上调更占优势,故Th1/Th2比例下降。     

Th1/Th2型细胞因子平衡与正常妊娠的关系

目的:探讨Th1/Th2型细胞因子平衡与正常妊娠之间的关系.方法:采用酶联免疫吸附方法检测40例非妊娠妇女和42例正常妊娠妇女的血清中Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-1 β)及Th2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10和IL-13)的表达水平.结果:非妊娠组相比,妊娠组血清中IL-2和TNF-α的表达水平明显降低(P值均＜0.05),IL-4和IL-10的表达水平明显升高(P值均＜0.05);而两组血清中IFN-γ、IL-1β、IL-6和IL-13表达水平的差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论:正常妊娠是以分泌Th2型细胞因子为主的,提示Th1/Th2型细胞因子的平衡可能在正常妊娠中发挥重要作用.     

水溶性壳聚糖对1型糖尿病小鼠胰腺Th1及Th2相关细胞因子表达的影响

该研究旨在探讨水溶性壳聚糖(WSC)对1型糖尿病(T1DM)小鼠胰腺Th1、Th2相关细胞因子表达的影响。采用多次小剂量链尿佐菌素注射的方法建立T1DM小鼠模型,对建模成功的T1DM小鼠给予连续12周WSC干预。采用逆转录-聚合酶链式反应检测干预后小鼠胰腺Th1相关细胞因子IFN-γ以及Th2相关细胞因子IL-4的m RNA表达水平。结果发现,WSC能够有效地降低T1DM小鼠胰腺IFN-γ的m RNA表达,同时也有效地降低T1DM小鼠胰腺IFN-γ与IL-4的比例。     

疲劳模型大鼠T1/T2平衡变化及其与IL-12、IL-27的关系研究

选取20只8周龄清洁级SD大鼠,随机分成正常对照组(A组,n=10)与疲劳模型组(B组,n=10).B组采用力竭游泳运动训练的方式建立疲劳模型,在完成最后一次力竭游泳后24 h采集股动脉血,采用ABCELISA法分析血清IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-27含量.结果表明:(1) B组大鼠血清IFN-γ含量与IFN-γ/IL-4比值均显著低于A组(P0.05),但血清IL-4含量与A组相比无显著性差异(P0.05);(2) B组大鼠血清IL-12与IL-27含量均低于A组,其中血清IL-12的比较存在显著性差异(P0.05);(3)大鼠血清IL-12与IFN-γ含量显著相关(P0.01),但血清IL-27与IFN-γ含量、IL-12与IL-27含量之间均无显著相关关系(P0.05).疲劳大鼠出现T1/T2失衡,表现为T1型免疫反应抑制,该变化与IL-12分泌的变化有关,但与IL-27分泌的关系并不密切.     

平喘灵冲剂对哮喘模型大鼠IgE,白介素-4和γ-干扰素表达的影响

观察平喘灵冲剂对哮喘模型大鼠IgE,白介素-4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)表达的影响,探讨该中药治疗哮喘的作用机理.将60只SD大鼠分为6组:正常对照组、模型组、平喘灵大、小剂量组、地塞米松组及平喘灵冲剂小剂量加地塞米松组.采用免疫放射法观察IgE的变化,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察IL-4、IFN-γmRNA的表达.模型组IgE,IL-4 mRNA表达显著升高(P<0.05)、IFN-γmRNA表达显著降低(P<0.05);各治疗组IgE,lL-4 mRNA的表达均显著降低(P<0.05)、IFN-γmRNA的表达明显增高(P<0.05);平喘灵冲剂小剂量加地塞米松组作用更明显(P<0.05).平喘灵冲剂可能是通过减少IL-4的分泌合成,相对增加IFN-γ的合成,使IL-4和IFN-γ之间趋于平衡,从而抑制体内IgE的产生,发挥其抗气道炎症的作用,平喘灵冲剂与地塞米松合用有协同作用.     

种植性胃肿瘤鼠Th1/Th2相关上游转录因子及细胞因子的表达

从基因水平了解种植性胃肿瘤鼠辅助性T细胞(Th)的免疫平衡状态。建立Walker-256种植性胃肿瘤大鼠模型,观察其生存状态,从心脏血中分离单个核细胞(MNC)进行细胞培养,用RT-PCR法检测GATA-3、T-bet、IL-4、IFN-γ基因表达水平。种植性胃肿瘤鼠较正常对照组GATA-3表达增高,T-bet表达降低(P<0.05),IL-4水平高于正常对照组,而IFN-γ水平低于正常对照组(P<0.05)。种植性肿瘤大鼠存在Th细胞特异性转录因子、细胞因子基因水平的Thl/Th2平衡紊乱,以Th2亚群亢进为主,肿瘤鼠机体处于抗肿瘤免疫抑制状态。     

CCI_4肝纤维化大鼠TGF-β_1表达的动态变化

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝纤维化过程中的变化及其意义.方法40%CCl4-花生油溶液皮下注射法制备CCl4大鼠肝纤维化模型.第3、5、7、9、11、13周分批处死对照组和实验组大鼠各5只,剖取动物肝脏,HE染色、Masson染色和免疫组化染色,观察肝纤维化和TGF-β1在大鼠肝组织的表达.结果在大鼠CC14肝纤维化形成过程中,TGF-β1的表达在肝损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高.结论TGF-β1表达与肝纤维化程度成正相关.     

Th17细胞相关细胞因子与急性移植物抗宿主病关系的探讨

目的探讨异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病后,血清中Th17细胞相关的细胞因子与急性移植物抗宿主病的关系。方法 78例血液病患者进行异基因造血干细胞移植,对移植后发生急性移植物抗宿主病患者(n=12),未发生急性移植物抗宿主病患者(n=14),及健康对照组(n=10),以及发生急性移植抗宿主病患者(n=10)在有效治疗前后,采用酶联免疫吸附法检测血清中细胞因子IL-17、IL-23、IL-21、IFN-γ、TGF-β1、IL-22浓度。结果 1 aGVHD者(n=12)血清中Th17细胞相关因子浓度(pg/mL)较正常对照组(n=10)和无aGVHD组(n=14)显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);而TGF-β1(1 156.61±458.04)显著低于正常对照组(2 978.34±1 647.71)和无aGVHD组(2 541.62±1 805.16),差异有统计学意义(P<0.05)。IL-22:未发生aGVHD组高于健康对照组(22.14±2.49,19.18±1.24),差异有统计学意义(P<0.05);除IL-21、IL-22和IL-23浓度高于健康对照组外(P<0.05),其余的细胞因子健康对照组和无急性aGVHD组差异无统计学意义(P>0.05),aGVHD组血清IL-22浓度与无aGVHD和健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。210例有效治疗者,治疗后均有降低,治疗前后差异有统计学意义(P<0.05),而IL-22在有效治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Th17细胞相关的细胞因子与(IL-17、IL-23、IL-21、IFN-γ、TGF-β1)与aGVHD的发生发展和疗效有关,而与IL-22无关。     

四周有氧训练影响Ⅱ型糖尿病大鼠免疫因子IL-1Ra、IL-4、IFN-γ等指标的实验研究

目的:探讨4周有氧训练对Ⅱ型糖尿病大鼠免疫应答因子IL-1Ra、IL-4、IFN-γ等指标变化的影响。方法:24只SD大鼠随机分为Ⅱ型糖尿病安静组(A组)、II型糖尿病有氧训练组(B组),健康安静对照组(C组)。B组进行4周的跑台有氧训练(每周6d),第1周前3d训练时间分别为30m in、40m in和50m in,第4d起每天持续跑台60m in。结果:4周有氧训练后,A组和B组的血清指标IL-1Ra、IL-4、IFN-γ等均显著高于C组(P<0.01);4周跑台训练后B组血清指标IL-1Ra、IFN-γ等显著低于第1周(P<0.01),而血清指标IL-4无显著变化(P>0.05)。结论:4周有氧训练能够逆转Ⅱ型糖尿病大鼠血清指标IL-1Ra、IFN-γ的上调;IFN-γ/IL-4比值下降;但4周有氧训练后大鼠血清指标IL-4无显著变化。     

慢性砷暴露诱导小鼠肺结构损伤和免疫失衡

以C57BL/6雄性小鼠为受试动物,研究慢性饮水砷(As)暴露对肺的损伤效应。小鼠摄入含5 mg/L或50 mg/L As的亚砷酸钠水溶液180 d后,检测肺组织氧化应激指标,病理学改变及免疫相关基因的表达。结果发现,砷染毒组小鼠肺超氧化物歧化酶(T-SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)显著下降,脂质过氧化产物丙二醛含量显著升高。显微镜观察发现砷组小鼠肺组织炎性细胞浸润,肺泡隔增厚,肺泡囊缩小。氧化应激指标及病理学改变呈现剂量依赖性。50 mg/L As组Th1细胞因子IFN-γ的转录水平显著升高,Th2细胞因子(IL-4、IL-5和IL-13)的转录被抑制,IL-4/IFN-γmRNA比值显著降低。研究表明,长期经口摄入砷引发了小鼠肺组织的氧化损伤和组织结构改变,并造成了肺Th1/Th2细胞因子失衡,Th1炎症反应加强。砷引起的肺组织结构损伤及免疫失衡可能与砷诱导的肺氧化应激相关。     

蒙药娜仁满都拉—11对Walker—256腹水型大鼠IL—4和IFN—γ调节作用的研究

建立Walker-256腹水型肿瘤大鼠模型,娜仁满都拉-11灌胃.10天后采集外周血(peripheral blood mono-nuclear cell,PBMC),分离单个核细胞进行细胞培养,用酶联免疫吸附法(ELISA),RT-PCR法检测IL-4、IFN-γ基因的表达水平.结果蒙药灌胃组比生理盐水对照组大鼠生存质量提高, IFN-γ表达升高, IL-4表达降低(P＜0.05), 提示蒙药娜仁满都拉-11 能增强IFN-γ的表达,降低IL-4的表达,有一定的抗肿瘤免疫调节作用.     

CCI4肝纤维化大鼠TGF-β1表达的动态变化

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）在肝纤维化过程中的变化及其意义．方法40％CCI4-花生油溶液皮下注射法制备CCI4大鼠肝纤维化模型．第3、5、7、9、11、13周分批处死对照组和实验组大鼠各5只,剖取动物肝脏,HE染色、Masson染色和免疫组化染色,观察肝纤维化和TGF-β1在大鼠肝组织的表达．结果在大鼠CCI4肝纤维化形成过程中,TGF-β1的表达在肝损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高．结论TGF-β1表达与肝纤维化程度成正相关．     

白细胞介素23基因沉默对支气管哮喘小鼠的影响

目的观察白细胞介素23(IL-23)基因沉默对肺组织IL-23蛋白表达、哮喘鼠气道炎症和支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-5(IL-5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平的影响.方法构建siRNA IL-23表达载体并通过脂质体转染获得高浓度的含有siRNA IL-23的浓缩液,RT-PCR和WB法检测IL-23mRNA及IL-23蛋白表达水平,确定转染成功.通过滴鼻方式吸入到卵蛋白(OVA)致敏的小鼠体内,观察其对BALF中炎症细胞的影响;ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子IFN-γ,IL-5,TNF-α,ICAM-1的变化;HE染色观察肺组织病理学改变;WB法检测肺组织中IL-23蛋白表达.结果与对照组相比,模型组及空质粒组BALF中IL-5,TNF-α,ICAM-1水平升高,IFN-γ水平下降,肺组织中IL-23蛋白表达量升高(P0.01),沉默组上述各项指标明显下降,IFN-γ水平升高(P0.01);病理学检测结果表明:与对照组相比,模型组和空质粒组气道内有大量炎性细胞浸润,沉默组炎症受到抑制(P0.01).结论 IL-23在哮喘发病中起重要作用,阻断其基因表达可以明显改变哮喘症状.     

共刺激分子B7和CD40对日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫偏移的调控作用

为观察干预B7/CD28和CD40/CD40L共刺激信号对Th1/Th2细胞因子表达水平和Th1/Th 2免疫偏移的调控作用, 分别取小鼠感染日本血吸虫后6、8、10和12周的脾淋巴细胞经抗CD8 0(B7-1)mAb、抗CD86(B7-2)mAb、抗CD40mAb和抗CD40LmAb处理后培养72h,用ELISA 双抗体夹心法测定培养上清中IFN-γ和IL-4的表达水平的动态变化并分析干预2种不同的共刺激信号对 Th1/Th2免疫偏移的影响.结果显示抗CD80mAb和抗CD86mAb均能显著抑制IL-4的表达水平, 尤其是抗CD86mAb对IL-4抑制作用尤为明显.抗CD40mAb和抗CD40LmAb也能影响Th2细胞因子的表达.其中以阻断CD40分子的作用更为显著.结果提示B7/CD28和CD40/CD40L共刺激信号可以调节Th1/Th2细胞因子的表达水平和调控Th1/Th2免疫偏移.干预B7/CD28和CD40/CD40L 介导的共刺激信号调控Th1/Th2免疫偏移有可能是一种控制血吸虫卵肉芽肿病变新型的免疫治疗途径.     

中药喘可治注射液对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制.方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20 μL/mL)孵育4 h后, 加入过氧化氢(H2O2)、放线菌酮(CHX)、环磷酰胺(CTX)诱导细胞凋亡,荧光酶标仪结合Sytox Green染色检测细胞凋亡;加药孵育4 h后,加入细菌脂多糖(LPS,终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后Grass试剂盒检测巨噬细胞NO的量;加药孵育4 h后,加入LPS(终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后流式细胞仪结合Cytometric Bead Array(CBA)技术检测细胞因子的释放.结果:CKZ能抑制H2O2、CHX、CTX诱导的细胞凋亡;促进非刺激状态下巨噬细胞NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α 5种细胞因子的产生, 抑制LPS和IFN-γ刺激的NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生.结论:CKZ可抑制巨噬细胞凋亡,并对巨噬细胞NO的分泌和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的生成具有双向调节作用.     

单增李斯特菌致流产小鼠子宫中Th1和Th2细胞因子的变化

为探讨Th1和Th2细胞因子在单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)致小鼠流产中的作用,用LM感染妊娠小鼠和小鼠巨噬细胞,统计胚胎存活率,酶联免疫测定(enzyme linked lmmuno sorbent assay,ELISA)小鼠子宫组织中和巨噬细胞培养基中主要的Th1和Th2细胞因子水平.结果显示,LM诱导的流产小鼠子宫中Th1细胞因子水平显著增加,溶血素O(listeriolysin O,LLO)基因缺陷型(Δ hly)LM感染组胚胎存活率和子宫中Th1、Th2细胞因子水平无显著变化;LM感染的巨噬细胞分泌的Th1细胞因子和白细胞介素-4(interleukin, IL-4)水平显著增加,IL-10水平显著降低,Δ hly LM感染组Th1和Th2细胞因子水平无显著变化.因此,LM感染后子宫中Th1/Th2细胞因子失衡诱导了小鼠流产,这可为临床防治LM诱导的流产提供科学依据.     

高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈鳞癌中γ-干扰素及白介素-10表达的相关性

目的:探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染与宫颈鳞癌组织中γ-干扰素(IFN-γ)及白介素-10(IL-10)表达的相关性.方法:选取宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈鳞癌组织共81例作为研究组,另选取15例正常宫颈组织作为对照组.采用导流杂交基因芯片技术检测宫颈脱落细胞中HR-HPV的感染状态及分型;应用免疫组化方法检测宫颈组织标本中IFN-γ及IL-10的表达并采用图象分析技术对其阳性表达进行半定量分析.结果:(1)正常宫颈组、CIN组和宫颈鳞癌各组的HR-HPV感染率比较有显著差异(P0.05).(2)正常宫颈组、CIN组及宫颈鳞癌组中IFN-γ阳性表达的IOD值分别为(3.556±1.356)、(3.085±1.081)及(1.617±0.754),经方差分析,组间比较有显著差异(P0.05);IL-10阳性表达的IOD值分别为(3.384±1.310)、(4.381±1.295)及(7.276±1.985),组间比较差异显著(P0.05).(3)在HR-HPV非感染组与感染组中IFN-γ阳性表达的IOD值分别为(3.340±1.053)和(2.481±1.210),IL-10阳性表达的IOD值分别为(3.590±1.350)和(5.772±2.048),两组比较均有统计学差异(P0.05).结论:宫颈局部IFN-γ的表达减弱,IL-10的表达增强,与HR-HPV的感染结局相关.     

痰热清注射液对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

观察痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠免疫功能的影响,并探讨其作用机制.采用流感病毒FM1感染小鼠模型,设正常对照组、模型组、利巴韦林阳性药物组、痰热清注射液大、中、小剂量组.分别用MTT法、淋巴母细胞法、巨噬细胞NO2-释放法、ELISA法测定T及B淋巴细胞的增殖功能I、L-2及IFN-γ的活性I、L-4及TNF-α浓度.痰热清注射液大、中、小剂量组明显增强流感病毒FM1感染小鼠的T,B淋巴细胞的增殖能力,并明显提高模型组T细胞培养上清中IL-2含量;痰热清注射液明显提高模型组肺匀浆中IFN-γ及IL-4含量,降低肺匀浆中TNF-α含量.痰热清注射液直接刺激T,B淋巴细胞的增殖,并通过细胞因子IL-2,IFN-γ,TNF-α等作用调控Th1与Th2细胞的平衡,增强机体的抗病毒免疫功能.