人防御素研究进展

人防御素是机体天然防御体系的重要组成部分,存在于人中性粒细胞中,具有广泛的杀菌活性,是当前国内、外生物医学研究的热点.文章介绍了人、β、三种防御素的最新研究进展,重点强调其结构特征,特别是人β-防御素的结构特征.     

脊椎动物β-防御素的研究进展

防御素是近年来发现的广泛存在于动植物体内的一类富含精氨酸和半胱氨酸残基的阳离子抗菌肽。脊椎动物的防御素分为α-防御素、β-防御素和θ-防御素3种,其中β-防御素分布区域最为广泛,在脊椎动物的呼吸道、消化道及泌尿生殖道粘膜层有大量表达。其在机体受到感染的早期抑制、抵御和杀灭多种外来病原微生物等方面发挥着不可取代的作用。综述了国内外β-防御素的研究现状,从其蛋白质分子结构、基因的结构及表达调控、抗微生物活性及作用机制、与炎症反应的关系以及作为效应分子和调节分子等角度入手,探讨了脊椎动物β-防御素在免疫应答中的重要作用,并提出了它的应用前景和存在的问题。     

鸡β-防御素及其基因工程研究进展

鸡β-防御素作为鸡重要的天然免疫屏障,对于细菌、真菌乃至某些被膜病毒有广谱高效杀伤作用.该文着重描述了鸡β-防御素的分子结构、抗菌机理、生物活性及其基因工程研究进展,并从原核系统和真核系统的基因克隆与表达的研究现状进行了综述.     

人β防御素3基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达

根据大肠杆菌对精氨酸密码子使用的偏爱性和β防御素3全基因中G．C、A、T含量的平衡，设计搭桥引物，通过PCR法合成人β防御素全基因序列，克隆到真核表达载体pPICZα-A，测序确认．将重组体电击转化酵母GS115，转化子经甲醇诱导表达，Tricine-SDS-PAGE分析，琼脂孔穴扩散法检测抑菌活性．结果表明，目的基因在毕赤酵母中已得到表达，表达量为0．22mg／mL，重组人β防御素3对金黄色葡萄球菌有抑菌活性．     

哺乳动物防御素的研究及应用

防御素(Defensins)是近年来发现的广泛存在于生物界的一类阳离子抗菌活性肽.其中哺乳动物防御素的抗菌谱最为广泛,具有很高的应用潜力.文章针对哺乳动物防御素的组成分布、表达调控、生物学活性、基因工程等方面进行了研究.     

重组人β防御素-3表达条件的优化及其对抑菌活性的影响

探讨表达条件对重组人β防御素-3(rhβD-3)表达量和抑菌活性的影响.对重组酵母菌的摇瓶发酵条件,如pH、发酵温度、甲醇的添加量等进行优化.结果表明,适宜的表达条件为BMMY培养基pH为6.0,装液量50mL/500mL锥形瓶,28℃,290r/min培养48h,每24小时加0.5%(V/V)甲醇.优化后rhβD-3的表达量可提高到340μg/mL,抑菌活性也有所提高.     

β-防御素的合成及构效关系

防御素是抗菌肽中的一大家族,从植物到动物均有表达.β-防御素含多个二硫键,在先天免疫系统中具有重要作用,除抗菌活性外,还具有其他重要的生物学功能,如抗病毒作用,与受体、趋化因子相互作用等.综述了β-防御素在合成、结构特征和构效关系方面的最新研究进展.     

窄叶蓝盆花花序化学成分及其抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性的研究

研究蓝盆花Scabiosa comosa Fisch花序的化学成分,及其抗氧化活性和抑制α-葡萄糖苷酶活性.反复采用硅胶柱色谱,RP-C18柱色谱,Sephadex LH-20,MCI,制备型高效液相色谱等方法分离纯化窄叶蓝盆花花序的化学成分,利用多种波谱技术(UV,NMR,LC-MS)鉴定化合物结构.进一步对这些化合物的DPPH游离基清除率和α-葡萄糖苷酶活性抑制率进行了测定.本实验从蓝盆花花序中分离鉴定出10个化合物,7个酚类化合物,2个萜类化合物和1个甾醇化合物.其中芹菜素-4′-O-β-葡萄糖苷(2),芹菜素-7-O-α-阿拉伯糖(1-6)-β-葡萄糖苷(6)和3β,23-二羟基乌索-12-烯-28-酸(9)为首次从本属植物中分离得到.体外活性实验结果显示,木犀草素(3),木犀草素-7-O-β-葡萄糖苷(4)和绿原酸(7)具有显著的清除DPPH游离基活性,EC50值分别为19、43和26μg·mL-1;另外,黄酮苷元芹菜素(1)和萜类化合物熊果酸(8)及3β,23-二羟基乌索-12-烯-28-酸(9)具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性.     

人防御素HNP4在毕赤酵母中的表达

为了构建人防御素HNP4重组毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体pPIC9K-HNP4,建立高效、稳定表达人防御素HNP4的毕赤酵母表达菌株,并对表达产物进行检测与分析.利用PCR技术从pUC18-HNP4上扩增人防御素HNP4,构建人防御素HNP4重组表达载体pPIC9K-HNP4.SacI线性化后电击法转化入毕赤酵母GS115中,再通过同源重组到酵母染色体上,用G418筛选高表达菌株,在三角摇瓶中0.5%甲醇诱导表达.SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物,用标准大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌株混菌板鉴定活性.结果显示,SDS-PAGE和Western-blotting可检测到大小4.0 kDa左右的目的蛋白条带,表达量可达到500 mg/L,表达的重组人防御素HNP4具有较强的杀菌或抑菌活性.提示成功构建人防御素HNP4重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-HNP4,并建立高效、稳定表达有明显抗菌活性的重组人防御素HNP4的毕赤酵母表达菌株.     

家兔中性粒细胞防御素的纯化及其对念珠菌抗菌活性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化兔中性粒细胞防御素,兔中性粒细胞防御素NP2具有抗白念珠菌M1012R,INH A-207,乳酒念珠菌,热带念珠菌和高里氏念珠菌等菌的活性,具抗菌活性随防御素浓度的升高而增强。     

高效液相色谱-电化学法检测紫草中萘醌类衍生物的含量

建立高效液相色谱-电化学法测定紫草中紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素5种萘醌类衍生物的含量.实验结果表明,在优化的色谱条件下,紫草中5种主要电活性物质均得到较好分离,线性范围均为0.020~10.0mg·L~(-1),相关系数R均大于0.99.该方法简便、高效,灵敏度高,重复性好,对实际样品分析获得了满意的实验结果.     

微籽龙胆中黄酮苷类化学成分及其抗氧化活性研究

为研究药用植物微籽龙胆(Gentiana delavayi Franch)的活性物质基础,采用多种色谱技术(硅胶、ODS、MCI和Sephadex LH-20等)从微籽龙胆中抗氧化活性最好的正丁醇部位分离得到8个黄酮苷类化合物.通过核磁共振技术和文献数据对比,将其分别鉴定为:木犀草素-6-O-β-D-葡萄糖苷(1),牡荆苷(2),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(3),异牡荆素(4),葛根素(5),hypolaetin-8-O-β-D-glucoside(6),荭草素(7)和异荭草素(8),化合物1和6为首次从该属植物中分离得到.此外,测试了微籽龙胆各萃取部位和上述化合物的抗氧化活性.黄酮苷类化合物6和7表现出显著的DPPH自由基清除能力,其中化合物7的活性与阳性对照相当,其IC50值为(9.74±0.05)μg/mL.     

苦瓜皂甙的分离以及PTP1B抑制活性

通过溶剂萃取、大孔树脂D-101去杂、正相硅胶柱粗分、ODS反相硅胶柱反复分离纯化、薄层色谱检测,从苦瓜中分离出5种化合物.借助于ESI-MS、IR、13C NMR、1H NMR、DEPT-NMR等波谱技术,对这5种化合物进行结构鉴定.结果表明,此5种化合物都属于皂甙类,其中化合物A是甾体皂甙,其余4种为四环三萜葫芦烷皂甙.这5个化合物分别为:A为α-菠甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖甙;B为19(R)-羰基-25-二甲氧基-5β-葫芦烷-6,23-二烯-3β,25-羟基-5-19环氧酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖甙;C为葫芦烷-5-烯-3β,22,23,24,25-五基-3-O-3-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-D-吡喃葡萄糖甙(苦瓜素A);D为葫芦烷-5,23-二烯-3p,7,25-羟基-9-醛基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(苦瓜素L);E为葫芦烷-5,23-二烯-3β,7-二羟基-9-醛基-25-甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(苦瓜素K).5种化合物进行PTP1B抑制活性筛选试验,结果表明,这5种皂甙单体中,化合物D和化合物E对PTP1B没有抑制活性,化合物A、B、C对PTP1B有不同程度的抑制活性,其中抑制活性大小为化合物A＞化合物C＞化合物B.     

虫草素对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的应用Aβ25-35孵育PC12细胞制作细胞损伤模型,探讨虫草素对PC12细胞损伤的保护作用.方法将不同组别PC12细胞用Aβ25-35诱导48 h后,采用MTT法测定细胞活力,LDH法测定细胞膜通透性,化学比色法测定细胞中SOD活性和MDA含量,Western blot法检测PC12细胞中Caspase-3的表达.结果与模型组相比,两种剂量的虫草素均使细胞存活率显著增加,细胞培养上清中LDH含量显著减少,细胞中SOD活性显著升高,MDA含量显著下降,并明显降低PC12细胞Caspase-3的表达.结论虫草素对Aβ25-35诱导的PC12细胞死亡、氧化损伤和细胞凋亡有明显保护作用.     

酚羟基取代β-醛酮及其含糖类席夫碱衍生物的合成

鱼腥草素具广谱的抗菌活性,其药效团为β-醛酮结构.以含有羟基的苯乙酮为起始原料,合成了8个羟基取代及含有糖苷的芳香β-醛酮席夫碱衍生物,所合成化合物经过红外、核磁进行了结构表征.对所合成的化合物进行了抑菌活性测试,初步构效关系表明,苯环上酚羟基取代对抗菌活性有重要影响,烷氧基胺席夫碱种类对抑菌活性影响很大,酮羰基的存在对提高抗菌活性有利.     

红腹锦鸡和画眉防御素基因的基因组结构与进化(英文)

动物先天性免疫系统是病原入侵后遇到的第一道防线,而防御素是先天性免疫系统的重要组成部分.鸟类是传染性病原的重要宿主,其防御素基因的解析有助于阐明鸟类先天性免疫系统的防御机制.然而,有关鸟类防御素基因的研究却鲜见报道.本文解析了红腹锦鸡(鸡形目)和画眉(雀形目)两物种的95和177 kb的防御素基因家族,并结合已有的家鸡(鸡形目)和珍珠鸟(雀形目)防御素基因进行了比较基因组分析,发现鸟类防御素的基因组结构存在世系特异性;鸡形目的红腹锦鸡和家鸡的防御素基因较少,但雀形目的画眉和珍珠鸟的防御素基因却显著膨胀.进一步的组织特异性表达结果表明,雀形目中被特异复制的防御素基因主要表达在上下呼吸道、舌头和脾脏,有助于降低鸣禽呼吸系统的疾病易感性.而且,特异性膨胀的防御素基因特异地在鸣禽的呼吸系统表达,提示防御素基因的膨胀与其鸣唱这一生物特性有关.     

兔防御素基因酵母表达的研究

防御素是由动植物体内产生的一种多肽类抗菌、抗病毒活性物质,本研究根据巴斯德毕赤 酵母偏爱密码子的特性,设计兔防御素NP2基因,并构建巴斯德毕赤酵母的表达质粒pGAPZα-NP2,通 过LiCl法转入巴斯德毕赤酵母中,筛选和检测结果表明,兔防御素NP2基因已经成功地转入巴斯德毕 赤酵母,并得到表达。该实验可为兔防御素NP2抗菌抗病毒的研究和开发奠定理论和物质基础。     

新疆紫草的主要化学成分

用石油醚冷浸提取新疆紫草根,再将提取物用硅胶柱层析分离,结晶与重结晶得到单体化合物,并利用理化性质及波谱学方法分离鉴定所得化合物.结果表明,得到的7种化合物分别为去氧紫草素(1),β,β-二甲基丙烯酰紫草素(2),乙酰紫草素(3),紫草素(4),β-谷甾醇(5),丙酰紫草素(6),β-乙酰氧基异戊酰紫草素(7).     

芒柄花素-β-环糊精包合物的制备工艺

采用饱和水溶液法,通过调节溶液pH值制备出芒柄花素-β-环糊精包合物,并用紫外光谱和红外光谱分析等方法加以鉴定.制备芒柄花素-β-环糊精包合物的产率为73.24±0.39%,包合物在水中的溶解度明显大于芒柄花素单体.     

ACLY抑制剂脱氢弯孢霉菌素肝微粒体代谢

该文主要研究了潜在抗肿瘤候选化合物脱氢弯孢霉菌素的体外肝微粒体代谢特点.建立了脱氢弯孢霉菌素含量的HPLC测定方法,考察了脱氢弯孢霉菌素在不同种属来源的肝微粒体中的代谢速率差异.依据UPLC-MS结果推测脱氢弯孢霉菌素中α、β不饱和双键经环氧化反应,亲和反应和分子内脱水反应,生成epoxycurvularin、 10,11-邻二羟基弯孢霉菌素和curvulopyran,且脱氢弯孢霉菌素在溶液中可能发生非酶催化的化学转化.考虑到脱氢弯孢霉菌素结构中的α,β不饱和双键既是重要的活性结构又是主要的代谢位点,合理的前药设计可能是提高该化合物可药性的有效方法.