血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的酶法制备

以扇贝裙边的酶解产物——蛋白多肽对ACE活性的抑制率作为控制水解程度的指标,确定制备ACE活性抑制肽的最佳酶种及酶解工艺技术条件.通过胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合风味酶、枯草杆菌蛋白酶5种酶酶解扇贝裙边得到的蛋白多肽对ACE抑制能力的比较发现,5种酶在不同酶解时间所得到的酶解蛋白多肽都具有一定的ACE抑制能力,其中胃蛋白酶酶解蛋白多肽的ACE抑制率最高,为91.33%;再经L9(3)4正交实验对胃蛋白酶酶解工艺条件进行优化,确定酶解反应最佳条件是酶量400 U.g-底1物,pH 2.5,温度32℃,底物浓度(原料∶水)1∶2,酶解时间3 h;试验结果还表明,单酶(胃蛋白酶)的酶解蛋白多肽比复合酶(复合风味酶)和双酶(胃蛋白酶 木瓜蛋白酶)的酶解蛋白多肽对ACE活性的抑制能力都强.     

碱性蛋白酶水解豆粕制备ACE抑制肽水解条件的优化

为了寻求高效的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽制备方法,在实验室条件下利用碱性蛋白酶水解豆粕生产ACE抑制肽,并采用单因素和多因素实验相结合的方法对酶解条件进行优化.结果发现,适当延长碱性蛋白酶的水解时间和提高p H,可大幅度提高ACE抑制肽的抑制活性.单因素和多因素实验综合结果显示,碱性蛋白酶水解豆粕产生ACE抑制肽的适宜水解条件为:p H为9.0,水解温度为50℃,水解时间为4 h,蛋白酶质量分数(酶质量/底物质量)为2.0%,底物质量浓度为40 g/L,在此条件下制备的ACE抑制肽的抑制率可达到97.97%.     

响应面法优化金枪鱼蛋白抗痛风活性肽制备工艺

为制备具有抗痛风活性的金枪鱼蛋白肽,本研究以金枪鱼为研究对象,以蛋白回收率及XOD抑制率为指标,通过单因素实验选择中性蛋白酶和胰蛋白酶为复合酶,经响应面优化得到复合酶最佳酶解条件为:复合酶解温度45.5℃,加酶量935 U·g-1,复合酶解时间6.5 h;对于蛋白回收率,三因素影响顺序为:加酶量复合酶解温度复合酶解时间;对于XOD抑制率,三因素影响顺序为:复合酶解温度复合酶解时间加酶量。此条件下进行酶解,测得蛋白回收率为83.46%,与预测值偏差1.2%,比单一蛋白酶解提高36.1%;XOD抑制率为43.51%,与预测值偏差0.8%,比单一蛋白酶解提高54.4%,表明复合酶解后效果提高显著。此时酶解液主要含小分子肽,(1～3)KDa肽段含量为42.57%,1 KDa肽段含量为35.98%,大分子肽含量相比于未酶解时降低了90.7%。研究结果表明该复合酶法制取的金枪鱼抗痛风活性肽具有高蛋白回收率及良好的XOD抑制率,该技术对金枪鱼抗痛风活性肽的进一步深入研究和应用具有一定的理论指导意义。     

酶解牦牛乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

目的:乳清蛋白是牦牛乳中的重要成分,其经酶解制备的乳源性ACE抑制肽以安全性高和无副作用等优点在高血压的防治中具有重要的研究和应用价值.本实验研究利用乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺技术.方法:本实验对从耗牛乳中提取的乳清蛋白,分别根据碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶各自的最适pH及温度,采用酶解法制备ACE抑制肽,以ACE抑制活性为指标初步筛选出最佳水解酶,并探究最佳酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳反应条件.结果:碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶,英最佳反应条件为:pH8.5、温度60℃、E/S为5.5％、水解6h.制备的ACE抑制肽抑制率可达到85.2％.结论:碱性蛋白酶为最佳酶选,用碱性蛋白酶制备的ACE抑制肽体外抑制率较高,符合工业生产要求.这为进一步优化乳清蛋白降血压肽的制备工艺提供依据.     

Alcalase酶解蛋清粉制备抗凝血肽的工艺优化

采用Alcalase碱性蛋白酶酶解蛋清粉制备食源性抗凝血肽。结果表明:底物浓度过大会抑制水解度的增长,底物质量分数为1%时蛋白质完全水解后的产物抗凝血活性最佳;高温和低温均对水解度有影响,低温酶解产物的抗凝血活性较好;pH值对水解度的影响与Alcalase的最适pH值有关;pH值为7时,抗凝血活性最好;酶/底物浓度增大,但底物不变的情况下,对水解度的提高不明显,酶/底物浓度过大,导致抗凝血活性降低。考虑交互作用经试验优化设计确定的酶解最佳工艺参数为:底物质量分数为1%,酶解温度为50 ℃,酶/底物质量分数为5%,酶解pH为8。在该条件下水解2 h,凝血抑制率达到68.92%。     

酶法制备鹿骨多肽的工艺研究

目的探讨鹿骨多肽胰蛋白酶酶解的最优工艺.方法采用热水抽提法提取鹿骨中的胶原蛋白,再经胃、胰蛋白酶酶解,制得鹿骨多肽,该实验先以鹿骨蛋白产率为指标,确定了鹿骨蛋白最佳提取时间,再以鹿骨多肽的水解度为指标,通过单因素和正交实验优化鹿骨多肽的胰蛋白酶酶解工艺.结果鹿骨多肽最佳制备条件:底物浓度为4%,酶的用量为7 500 U/g,pH=8. 0,温度37℃,时间为4 h,此时水解度为24. 52%.结论此工艺确定了热水抽提法提取鹿骨蛋白及胃、胰蛋白酶水解制备鹿骨多肽的最优工艺,为分离纯化鹿骨活性肽奠定了基础.     

体外消化对大豆多肽性质和ACE抑制活性的影响

为了验证大豆多肽血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的生物可获得性,采用Alcalase蛋白酶催化大豆蛋白水解获得了3种水解程度不同的大豆多肽,再应用摸拟体外消化方法处理大豆蛋白及其水解产物,并进一步分析了摸拟消化前后大豆多肽结构、性质和ACE抑制活性的变化.结果显示:3个大豆多肽的相对分子质量均小于16000,且水解度越高,TCA可溶性蛋白含量就越高;经过摸拟体外消化,大豆蛋白出现降解,其分子大小和性质与大豆多肽趋于一致,大豆多肽则进一步降解;3种大豆多肽的ACE抑制活性在经过摸拟体外消化后显著下降,大豆蛋白的ACE抑制活性则显著上升,两者之间没有显著差异,表明虽然Alcalase对大豆蛋白的酶促处理能够释放降血压肽,但经过模拟体外消化后其ACE抑制活性又会下降,而直接口服大豆蛋白有可能获得同样的降血压效果.     

紫贻贝酶解多肽体外抗肿瘤活性研究

确定了紫贻贝胰蛋白酶水解时的最佳条件,研究了紫贻贝酶解多肽的体外抗肿瘤活性.采用正交实验方法, 以料液比、pH、加酶量、酶解温度和酶解时间为因素,以酶解液的氨基氮含量和肿瘤细胞增殖抑制率为指标进行L16(45)正 交实验,MTT法检测酶解多肽对DU-145、PC-3、H1299和MGCS0-3等肿瘤细胞的抑制活性;HE染色法观察酶解多肽对 肿瘤细胞形态的影响;免疫组化法检测酶解多肽对细胞中Bel-2表达的影响.结果表明:当料液比为1:4、pH为8.5、加酶 量为1 000 U/g、温度为45℃、酶解时间为5h时酶解多肽的水解度最大;当料液比为1:4、pH为8.0、加酶量为1 500 U/g、温 度为40℃、酶解时间为2h时酶解多肽的抗肿瘤活性最强,该肽可以下调肿瘤细胞中Bc1-2的表达.紫贻贝酶解多肽具有 抗肿瘤活性,可能是通过诱导细胞凋亡来实现的.     

一种大蒜蛋白酶解物系列产品及其制备方法和用途

江苏大学的“一种大蒜蛋白酶解物系列产品及其制备方法和用途”被授予发明专利．该发明涉及植物蛋白的开发利用领域，以大蒜脱除大蒜油或大蒜素之后得到的包含大蒜蛋白质的残余物为原料，通过加蛋白酶采用酶法水解，制成富含活性肽的蛋白酶解物．采用单酶水解和双酶水解的方法，可以在温和的条件下，将大蒜残余物如干渣粉中蛋白质酶解成2—10肽的活性多肽和氨基酸类物质．该酶解液的制备方法包括：大蒜干渣粉碎→酶解→灭酶→离心→过滤→超滤→酶解物．酶解物通过后续加工可以制成不同的液剂和粉剂制品．该酶解物可以通过对血管紧张素Ⅰ转化酶（ACE）的抑制作用用于降低高血压患者的血压，同时具有提高免疫、调节血脂以及抗衰老的功能．     

天然抗冻多肽的制备、 分离及细菌低温保护活性研究

利用热水抽提法提取鲨鱼皮明胶,控制酶法水解条件制备天然抗冻多肽.以细菌低温保护活性为指标,筛选蛋白水解酶种类及酶解时间,利用Sephadex G-50凝胶过滤色谱、SP-Sephadex C-25强阳离子交换色谱等分离手段进行分离,得到细菌低温保护高活性组分.结果表明,酶解鲨鱼皮明胶得到高活性抗冻多肽的最适蛋白水解酶为酸性蛋白酶,酶解温度50℃、pH 3.0、酶/底物3 000 U·g-1、底物浓度3%、酶解时间1 h;经过Sephadex G-50凝胶过滤色谱、SP-Sephadex C-25强阳离子交换色谱等分离手段得到阳离子的P2组分,经过细菌低温保护测试,当浓度为500μg·mL-1时,大肠杆菌的存活率达到80.8%.分离得到的抗冻多肽具有较高的抗冻活性,可望应用于食品、医药等产业中.     

短讯

一种大蒜蛋白酶解物系列产品及其制备方法和用途江苏大学的“一种大蒜蛋白酶解物系列产品及其制备方法和用途”被授予发明专利.该发明涉及植物蛋白的开发利用领域,以大蒜脱除大蒜油或大蒜素之后得到的包含大蒜蛋白质的残余物为原料,通过加蛋白酶采用酶法水解,制成富含活性肽的蛋白酶解物.采用单酶水解和双酶水解的方法,可以在温和的条件下,将大蒜残余物如干渣粉中蛋白质酶解成2~10肽的活性多肽和氨基酸类物质.该酶解液的制备方法包括:大蒜干渣粉碎→酶解→灭酶→离心→过滤→超滤→酶解物.酶解物通过后续加工可以制成不同的液剂和粉剂制品.…     

碱性蛋白酶水解海洋鱼鳞工艺改进

鱼鳞中含有丰富的蛋白质资源,如何充分利用该资源越来越受到关注.利用碱性蛋白酶水解海洋鱼鳞蛋白制备鱼鳞蛋白多肽.通过考察温度、时间、酶量、底物浓度等单一因素对水解鱼鳞蛋白的影响,确定并设计了L9(34)正交试验因素和水平,最终获得了碱性蛋白酶水解海洋鱼鳞蛋白优化工艺条件,即温度60℃,时间1.5h,酶量3%(质量分数),底物质量分数10%.在此条件下,酶解所得水解度为32.38%.与其他方法比较,该工艺条件下水解时间大大缩短.检测了该条件所得蛋白肽段的分子质量分布,结果表明酶解产物主要集中在1～6ku.由此可见,该优化条件适合规模化生产,所得蛋白肽可以满足食品、化妆品行业的需求.     

响应面法优化酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的研究

鱼鳞是鱼类加工的下脚料之一,含有丰富的蛋白质和矿质元素等营养物质,是非常好的可利用生物资源. 文中研究了碱性蛋白酶酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的优化工艺. 以ACE抑制率为指标,在酶解温度、酶解pH、加酶量、底物质量浓度等条件下先进行单因素实验,在此基础上运用响应面法优化碱性蛋白酶酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的工艺条件. 结果表明:在加酶量61%(约12 000 U/g)、pH 89、温度547 ℃的条件下酶解2 h,ACE抑制率理论值为8536%,实际酶解物的ACE抑制率为862%,相对误差为091%.     

罗非鱼鱼鳞胶原多肽的优化制备及其生物活性研究

以罗非鱼鱼鳞为原料,采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶复合水解,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化酶解工艺,制备鱼鳞胶原多肽.测定胶原多肽的抗氧化活性、细菌低温保护活性、氨基酸组成及相对分子质量分布.结果显示,最适酶解条件为:底物质量浓度30.6 mg·m L-1、胰蛋白酶和碱性蛋白的加酶量分别为1.44和0.70 mg·m L-1、酶解温度50℃、pH值8.5、酶解时间6.35 h.酶解胶原多肽对DPPH自由基和羟基自由基的半数清除质量浓度(IC50)分别为2.89和3.54 mg·m L-1.经过细菌低温保护试验,当胶原多肽质量浓度为1 mg·m L-1时,嗜热链球菌的存活率达到75.6%.鱼鳞胶原肽相对分子质量分布显示,78%多肽片段的相对分子质量分布于180~2 000 u之间.氨基酸组成分析显示鱼鳞多肽富含甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸及天冬氨酸等,这些特定的氨基酸与胶原多肽的抗氧化活性、细菌低温保护活性相关.     

CPP生产副产物--CNPP酶膜耦合法 制备ACE抑制肽研究

采用酶解与膜分离耦合的方法,以酶膜耦合法生产酪蛋白非磷酸肽(CPP)得到的副产物——酪蛋白非磷酸肽(CNPP)为原料制备高活性ACE抑制肽.用Protease N、胰蛋白酶、Fla-vourzyme、AS1398、酸性蛋白酶等几种蛋白酶对经过酶膜耦合制备的酪蛋白非磷酸肽进行二次酶解,同时与1 K膜分离耦合,然后对二次酶膜耦合所得产物的ACE抑制活性进行比较.结果表明,Protease N比其他几种蛋白酶更适合用于酪蛋白非磷酸肽制备高活性的ACE抑制肽,其产物的蛋白质量浓度为1 g/L时的ACE抑制率达到55.60%.     

紫苏籽抗氧化肽的制备工艺研究

采用碱提酸沉法从紫苏籽粕中提取蛋白质,进行蛋白酶筛选,发现紫苏籽蛋白经碱性蛋白酶酶解后有最好的抗氧化活性和水解度(DH).在单因素试验的基础上,采取响应面分析方法,并建立数学模型,确定最佳酶解工艺.试验结果表明:各因素影响紫苏籽粗蛋白酶解液DPPH自由基清除率的主次顺序是:加酶量酶解时间pH值,最佳条件是:加酶量3 000 U·g~(-1),酶解时间5.00 h,pH值9.80,温度50℃,此时DPPH自由基清除率为73.64%,说明紫苏籽蛋白质酶解多肽拥有很高的抗氧化活性.     

鲭鱼罐头蒸煮液蛋白酶解产物的生物活性分析

以鲭鱼罐头蒸煮液为原料,采用生物酶解方法制备活性肽,以实现鱼罐头加工废弃液的高值化利用.研究结果表明,采用复合酶(碱性蛋白酶和胰蛋白酶)分段酶解,得到相对分子质量MW1 ku的组分占50%,高于碱性蛋白酶(30%)和胰蛋白酶(28%)单酶水解效果.进一步采用超滤方法分离酶解产物,得到不同相对分子质量范围的3个组分,其中MW1 ku的P1组分的抗氧化活性和ACE抑制效果最好.     

白蛋白多肽体外抗氧化的研究

通过碱性酶和胃蛋白酶在最适条件下对鸡卵清白蛋白进行水解,并比较了两种酶解产物白蛋白多肽在体外的抗氧化活性。结果表明,碱性酶酶解产物体外抗氧化活性优于胃蛋白酶酶解产物;但随着白蛋白多肽浓度增加,其抗氧化活力均增强,还原能力也加强,在一定浓度范围内,白蛋白多肽均具有较强的清除.OH的效果,且白蛋白多肽均无助氧化作用。     

海参内脏酶解制备海参肽工艺

以蛋白水解度和酶解液中海参肽相对分子质量的分布作为指标,考察不同蛋白酶的酶解效果,筛选水解海参内脏的最适合蛋白酶,并通过单因素实验和正交实验优化酶解工艺.实验结果表明:胰蛋白酶的水解效果最佳,可用于水解海参内脏制备海参肽;在底物质量分数为1.0%,加酶量为0.375 1 mkat·g^-1,pH值为8.0,酶解温度为37 ℃,水解时间为5 h的最优酶解条件下,海参内脏的水解度可达到48.90%,酶解液中的多肽(2 000~5 000 u)质量分数为52.68%,寡肽(含氨基酸)(≤2 000 u)质量分数为47.25%.     

酶水解麦糟蛋白制备可溶性肽工艺研究

对碱性蛋白酶水解麦糟蛋白制备多肽的工艺条件进行了研究。通过单因素实验和正交实验,确定了较佳工艺条件：酶解pH10,加酶量3500u/g,酶解温度50℃,酶解时间20min。在此条件下,麦糟蛋白的水解度（DH）达22.18%,氮溶指数（NSI）达23.68%。