从茶叶中提取茶多酚技术

茶多酚是一种天然抗氧化剂,其主要成分儿茶素,化学名称为3,3’,4’,5,7-五羟基黄脘儿茶酚,分子式C15H14O6,分子量290。有两种异构体,即儿茶素和表儿茶素。其他儿茶素衍生物有d-没食子儿茶素、L-表没食子儿茶素、L-表儿茶素没食子酸酯,L-表没食子儿茶素没食子酸酯等。     

超高效液相串联质谱同时测定茶叶中的8种有效物质

建立了一种同时测定茶叶中8种有效成分(儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、茶氨酸、咖啡因)的超高效液相色谱串联质谱分析方法。样品用体积分数70%的甲醇水浴提取,采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱分离,串联四级杆质谱多反应离子监测测定,外标法定量。结果表明,8种有效成分在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数大于0.991,平均回收率(n=5)在94.7%±5.2%~104.7%±6.1%之间。方法的检出限在3.0~60.0 ng/m L之间,定量限在6.0~200.0 ng/m L之间。     

用没食子酸酯萃取分离酯型儿茶素单体

以疏水性没食子酸酯为萃取剂研究天然酯型儿荼素单体在水-有机醇两相体系中的分配行为，考察没食子酸酯烷基链长度、没食子酸酯浓度、萃取温度和振荡时间等因素对分配系数和分离因子的影响。研究结果表明：没食子酸酯与表儿萘素没食子酸酯形成复合物的稳定性比与其他2种单体（表没食子儿萘素没食子酸酯和没食子儿萘素没食子酸酯）形成的复合物的稳定性强，且当没食子酸正十二酯浓度为0．15mol／L，温度为20℃，振荡时间为30min时，表没食子儿荼素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯和没食子儿萘素没食子酸酯的分配系数KEGCG，KECG和KGCG分别为13．32，6．04和1．65；分离因子α1和α2分别为3．7和2．2。     

黔产茶叶中儿茶素类成分的HPLC分析研究

建立一种同时测定黔产茶叶中四种儿茶素(表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯和表没食子儿茶素)含量的高效液相色谱分析方法.采用Agilent 1100高效液相色谱仪、Welch色谱柱ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱,在流速1 m Lmin-1、柱温35℃、检测波长278 nm的条件下测定了该四种儿茶素的含量,回收率均在98.4%~102.00%之间,各组分回归方程的相关系数均在0.99996以上.该方法选择性好,灵敏度高,重复性好,检测快速准确,适合用于茶叶中儿茶素含量的测定.     

普洱茶渥堆发酵中活性成分测定及其相关性分析

利用高效液相色谱法分别测定表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、茶氨酸、槲皮素、黄嘌呤和次黄嘌呤在普洱茶发酵过程中的含量变化,发现在发酵过程中,表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、茶氨酸和槲皮素的含量下降,黄嘌呤和次黄嘌呤的含量上升。对这6种成分进行了相关性分析,发现多酚类与氨基酸类呈极显著正相关。     

接种地衣芽孢杆菌发酵的普洱茶品质与微生物群落分析

为通过接菌发酵提高普洱茶的品质,将从普洱茶中分离鉴定到的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)L1接种于灭菌和未灭菌的晒青茶中,分别进行纯菌发酵与强化发酵。结果表明:纯菌发酵后茶叶中茶多酚质量分数和5种儿茶素[儿茶素(C)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、儿茶素没食子酸酯(CG)、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)]质量比较自然发酵显著降低(P<0.05),茶褐素质量分数显著增加(P<0.05)。与自然发酵相比,强化发酵中茶褐素[(6.75±0.13)%]、茶红素[(1.04±0.09)%]和可溶性糖[(5.76±0.10)%]质量分数显著升高 (P<0.05)；而CG[(0.39±0.03)mg/g]、表儿茶素[(0.86±0.05)mg/g]、GCG[(0.20±0.03)mg/g]、 C[(2.28±0.14)mg/g]、表没食子儿茶素[(1.69±0.11)mg/g]、EGCG[(0.33±0.02)mg/g]6种儿茶素质量比显著降低(P<0.05)。强化发酵茶汤甜味(3.33±0.78)和厚重感(6.11±0.71)感官评分增加,苦味(1.33±0.50)、涩味(0.67±0.50)和酸味(0.33±0.44)分数降低。色差仪检测发现,强化发酵茶汤的a*值(25.70±0.68)、b*值(77.06±1.07)增加,L*值(71.58±0.83)降低。细菌16S rRNA和真菌ITS序列的扩增子测序发现,地衣芽孢杆菌L1在整个过程中并未一直是优势细菌(发酵中后期仅为0.2%~0.5%),但改变了微生物群落结构,表现在短杆菌(Brevibacterium)、食腺嘌呤芽生葡萄孢酵母(Blastobotrys adeninivorans)和Rogersella griseliniae的相对丰度显著升高(P<0.05)；而无色杆菌(Achromobacter)、伯克氏菌(Burkholderia)、柠檬酸杆菌(Citrobacter)、欧文氏菌足杆菌(Erwinia)、埃希氏菌(Escherichia)、克雷白氏菌(Klebsiella)和微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)7种微生物的相对丰度显著降低(P<0.05)。因此,接种地衣芽孢杆菌L1发酵普洱茶,可能通过与其他微生物的协同作用改变茶叶中的特征成分,从而提高普洱茶的感官品质。  收稿日期:2021-08-09 基金项目:国家自然科学基金资助项目(31760225;32160728)；云南省高层次人才培养计划青年拔尖人才专项(YNWR-QNBJ-2018-366)；云南省科技厅科技计划项目(202104BI090008)。 第一作者:刘琨毅,男,副教授,博士,主要从事传统发酵食品方面的研究。 *通信作者:赵 明,男,教授,博士,主要从事茶叶生物化学方面的研究。     

茶多酚及茶多酚锗的组成、结构和抑制肺癌细胞生长速率的研究

采用有机合成法合成茶多酚-锗化合物.运用反相液相色谱技术初步分离茶多酚和茶多酚锗的酚类组成.选用基质辅助激光解吸电离化飞行时间(MALDI-TOF)质谱技术分析茶多酚及茶多酚-锗的组成和结构.结果表明,茶多酚主要由儿茶素及酚类化合物组成,其中(-)表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、(-)表没食子儿茶素没食子棓酸甲酯(EGC-MG)和表三羟基黄烷-3-醇没食子酸酯(EZG)易与Ge4 反应且形成含锗的酚类化合物.茶多酚及茶多酚-锗化合物均有抑制肺癌细胞生长的能力,其抑制速率随着酚类化合物浓度增加而提高,但茶多酚锗抑制速率高于茶多酚近1倍.     

基于HPLC和模式识别的绿茶分类

为判别不同绿茶的类别,利用高效液相色谱分析茶叶中儿茶素和咖啡因等内部有效成分的质量分数,根据其质量分数利用模式识别方法进行分类.试验以5种中国绿茶为研究对象,首先,采用高效液相法分析茶叶中表没食子儿茶素、(+)-儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯和咖啡因等6种有效成分的质量分数.在此基础上,分别运用线性判别分析(LDA)、K最邻近(KNN)和人工神经网络(ANN)等模式识别方法建立相关模型对5种绿茶进行判别分析,试验结果表明ANN判别模型效果最好,模型训练和预测时的判别率分别达到98%和92%.研究结果表明,利用HPLC分析茶叶中的儿茶素和咖啡因等质量分数,再结合ANN模式识别的方法可以对不同类别的绿茶进行定性判别.     

以柯萨奇B3病毒3C蛋白酶为靶点的体外药物筛选模型的建立及应用

建立以柯萨奇B组3型病毒3C蛋白酶(CVB3-3C)为靶点的药物筛选模型,并筛选新型抑制剂。使用原核表达模型实现CVB3-3C蛋白酶体外重组表达。经Ni-NTA亲和层析、阴离子交换层析纯化获得高纯度CVB3-3C蛋白。应用荧光共振能量转移法检测蛋白酶活性,建立药物筛选模型。对768种化合物进行筛选,获得了2种对CVB3-3C蛋白酶有较强抑制作用的化合物(MDCE-A008和MDCE-A043),IC50值分别为(60.61±6.26)μmol/L、(105.7±14.88)μmol/L。建立的CVB3-3C蛋白酶药物筛选模型为获得有效抑制剂提供了技术保证。     

EGCG抗炎及抗肿瘤活性的相关性

没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）作为一类茶多酚,具有广泛的抗炎、抗肿瘤活性,且其显著的抗肿瘤功效在清除自由基、保护DNA、参与调节炎症相关信号通路及免疫细胞功能方面均与其抗炎活性密切相关。