小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌多重PCＲ 方法的建立

摘要: 目的为实验动物微生物检测提供一种简便、灵敏、快速,并且特异性强的小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌多重PCＲ 检测方法。方法根据小肠结肠炎耶尔森氏菌fox 基因、假结核耶尔森氏菌inv 基因、志贺氏菌ipaH 基因及空肠弯曲菌gyrA 基因设计并筛选出特异性引物; 优化退火温度等条件,分析多重PCＲ 的特异性、敏感性,使用该多重PCＲ 方法检测小鼠和豚鼠样品。结果多重PCＲ 扩增出了预计的PCＲ产物,即小肠结肠炎耶尔森氏菌( 511 bp) 、假结核耶尔森氏菌( 779 bp) 、志贺氏菌( 290 bp) 和空肠弯曲菌( 156 bp) 。该方法的灵敏度为1 × 10 － 3 ng /μL( 小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌) 和1 × 10 － 2 ng /μL( 空肠弯曲菌) 。特异性检测未从其他菌中检测出阳性条带。使用该方法从样品中检测出不等的阳性样品数。结论该多重PCＲ 方法对实验动物微生物检测具有很好的应用和开发前景。     

沙门氏菌比对试验的检验分析

目的通过实验,分析检验过程中应注意的问题,提高沙门氏菌的检验水平。方法选择鼠伤寒沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌分别与检验中常见的5种其它肠杆菌属细菌组合成染菌虾仁模拟样品10组,按照现行的检验标准:GB 4789.4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验~([1]),进行分离鉴定。结果10组样品均能检出沙门氏菌和干扰菌,检验结果准确.在检验过程中发现BS平板需要经过培养48h才能观察到明显的菌落特征;增菌液培养时间越长,沙门氏菌的生长越好;甲型副伤寒沙门氏菌有微弱产H_2S现象;粘质沙雷氏菌对鼠伤寒沙门氏菌的硫化氢反应有抑制作用;奇异变形杆菌和柠檬酸杆菌与沙门氏菌属A-F多价O诊断血清发生交叉凝集反应现象。结论本实验总结出的培养过程中发现的检测技术问题,在水产品、动物及动物产品的沙门氏菌等肠杆菌属的检验中,都有很好的借鉴意义。     

氨浓度检测的溯源验证实验

摘要: 目的在采用纳氏试剂比色法进行动物室氨浓度检测时用国家标准物质进行验证,以保证实验室检测结果的准确性。方法取十份样品分别用氨标准样品与实验室配置的氨溶液进行平行实验,同时绘制氨标准曲线进行比对。结果实验室配置的氨溶液标准曲线与氨标准样品标准曲线的偏差为－ 1. 79%。结论氨浓度检测受多种因素影响,为使检测结果准确性和一致性得以保证,应进行实验室验证、校准工作。     

运动性气单胞菌分离和鉴定方法的研究

通过碱性蛋白胨水 (APW)的增菌效果与气单胞菌培养基 (RYAN)的选择性效果试验 ,建立了运动性气单胞菌细菌学分离和鉴定的实验室检测程序。应用该程序对 8个模拟阳性样品和 71个动物产品、养殖水样及动物病料进行检测 ,结果模拟感染菌全部被分离到 ,从 71个检测样品中分离到 2 0株运动性气单胞菌。实验表明 ,所建立的分离和鉴定方法简便、快速、敏感。此外本文对用生化特性判定细菌致病力的可行性作了探讨     

从业人员预防性健康体检沙门/志贺氏菌检验PCR方法快速筛查的应用

采用实时荧光定量PCR方法快速检测食品等从业人员肠道致病菌,并与培养法进行比较,了解实时荧光定量PCR方法的应用价值.方法:随机采集96 752份从业人员肛拭子标本分别进行实时荧光定量PCR方法和培养法检测沙门氏菌和志贺氏菌,比较两种方法对两种肠道菌的检出率.结果:96 752份标本中,实时荧光定量PCR方法共检测出91份标本沙门氏菌阳性,其中83份分离阳性,41份志贺氏菌阳性,其中30份分离阳性.而传统培养法检测未检出.结论:实时荧光定量PCR方法可以很好的应用在从业人员肠道致病菌的筛查,并且可以提高从业人员肠道致病菌的检出率和准确性,节省劳动力,降低工作人员的工作强度.     

检测和校准实验室能力认可准则在实验动物检测领域应用说明的详解

摘要: 实验动物检测是中国合格评定国家认可委员会( CNAS) 对实验室的认可领域之一。在该领域,实验动物作为检测对象和实验对象,广泛应用于食品、医药、卫生防疫、生物安全、动物检疫、农业、化工、环境保护等学科。为了进一步规范该领域实验室认可活动的一致性、有效性,CNAS 特制定了检测和校准实验室能力认可准则在实验动物检测领域应用说明( CNAS-CL58) 。本文对该应用说明的相关要求进行了重点解读,包括组织、服务和供应品的采购、记录的控制、管理评审的管理要素和人员、设施和环境条件、方法、检测和校准物品( 样品) 的处置、检测和校准结果质量保证的技术要素。     

禽源沙门氏菌不同检测方法的比较及分型研究

本研究采集同一地区三家规模化蛋鸡场的饲料、肛拭子和病死鸡样品共813份,分别采用本实验室改进的环介导等温扩增技术(LAMP)、普通PCR技术以及美国农业部沙门氏菌分离培养标准(USDA MLG 4.05)进行沙门氏菌检测,并对分离株进行血清型鉴定及ERICPCR分型.结果,三种方法均检出沙门氏菌阳性16份,检出率同为1.97%.其中病死鸡、饲料和肛拭子中检出率分别为11.29%、3.03%和1.02%.16株禽源沙门氏菌中有7种血清型,其中12株沙门氏菌ERIC-PCR分型相似性均小于90%.结果表明,本实验室改进的LAMP方法与PCR方法检出率相同,与USDA MLG 4.05的符合率为100%.16株沙门氏菌血清型多样,分子分型的相似度低.     

普通培养基与优化培养基对防城港海域真菌分离效果的影响

为建立北部湾海域真菌样品库,研究海洋真菌次生代谢产物及其生物活性,以广西防城港海域海泥为样本,采用普通培养基与含有不同抑制剂的优化培养基,对比研究不同培养基分离效果,为海洋真菌培养提取优化提供方法。样品经无菌水处理后,分别用上述不同培养基进行分离纯化,再将提取到的DNA与NCBI数据库配对进行种属鉴定。用相对多度描述样品真菌组成,用Simpson指数与Jaccard系数描述各种实验培养基对海洋真菌分离结果的均衡性与选择性。共分离并鉴定菌株107株,归属于23属,优势菌属依次为青霉属Penicillium、枝孢菌属Cladosporium、曲霉属Aspergillus。Simpson指数和Jaccard系数显示,SA、MD普通培养基,含青霉素、青霉素+庆大霉素的MD优化培养基,以及含青霉素、孟加拉红的PDA培养基均具有较好的分离效果。总体来看,PA培养基对囊担菌属Cystobasidium分离效果最好,YPDA培养基对枝孢属分离效果最好。含青霉素+氯霉素的MD优化培养基对篮状菌属Talaramyces的分离效果最好,含孟加拉红的PDA优化培养基对曲霉属分离效果最好。实验表明,不同培养基及抑制剂对海洋真菌的选择性不同,建议在分离纯化海洋真菌时选择合理的培养基及抑制剂以提高分离效果。本文为研究海洋真菌次生代谢产物及其生物活性提供了菌种,也为分离、纯化和鉴定海洋真菌提供了参考。     

利用噬菌体有效分离稀有放线菌的初步研究

 利用噬菌体S7和S3专一性感染裂解链霉菌的特性,选用几丁质、土壤浸汁和改良海藻糖-天门冬酰胺3种分离培养基,结合使用预培养、预处理及添加不同抑制剂等多种手段,对采自云南、缅甸的3份土样进行处理.实验检测了在不同培养基上噬菌体对链霉菌的抑制效果,结果表明在几丁质培养基上,噬菌体对链霉菌的抑制效果明显,提高了稀有放线菌的出菌率,增加了物种多样性.利用噬菌体是一种有效分离稀有放线菌的方法.     

小鼠肝肿瘤细胞原位灌注分离培养方法的建立

摘要: 目的建立一种有效分离小鼠肝肿瘤细胞的原代培养方法,为肝癌发生发展的机制研究提供有效的实验手段。方法以9 月龄H-ras12V 转基因肝癌小鼠为实验材料,采用传统的小鼠肝细胞原代培养的灌注分离法,并对其进行改进,即在灌注的同时,用剪刀剪去肿瘤表面阻塞的血管和组织,疏通灌注液流,达到有效消化肿瘤组织的目的。对用此改良灌注法分离的肝肿瘤细胞和肿瘤周围组织细胞进行成活率计数,并进行后续的原代细胞培养,观察第3、5、7 天的细胞生长状态和形态特征。结果通过对传统的灌注分离肝细胞法进行改良,分离的肝肿瘤细胞成活率由未改良前的10%提升到40%。原代培养的结果表明,分离的肝肿瘤细胞与肝肿瘤周围的正常肝细胞的形态和随时间延长的凋亡变化状态没有显著差异。结论改良的灌注法能够有效的分离小鼠肝肿瘤细胞,并显著提高其存活率和细胞质量,可用于后续的原代细胞培养并开展相关的实验。另外,本文对改良灌注法的详细叙述也为相关的科研工作者提供了切实可行的操作规程。     

影像技术在动物实验中的应用

摘要: 影像技术研究是借助于某种介质与机体的相互作用,把内部组织器官结构、密度以影像方式表现出来。常用的方法包括: X 线、CT、MＲI、超声、血管造影和生物发光等。人们通过各种影像技术可以连续、准确、甚至无创观察动物体内疾病变化,极大提升了实验研究水平,推动疾病检测由传统的解剖形态,向功能、代谢,甚至是受体和基因的分子水平发展,其中涉及的福利是指在整个影像检测过程中保证动物的康乐。目的就是在动物福利与“人类利益”之间找到平衡点。即关注影像检测中可能影响动物康乐的因素,从而减少动物的痛苦; 同时,当福利条件满足动物康乐时,可最大限度地发挥影像实验的效能。     

小鼠巨细胞病毒PCR 诊断方法的建立及其应用

摘要: 目的建立小鼠巨细胞病毒( MCMV) PCR 检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI 公布的巨细胞病毒设计引物,进行PCR 体系优化、敏感性、特异性测试; 运用优化后的方法,对87 份小鼠血清进行检测,对阳性样本进行测序分析。结果建立的小鼠巨细胞病毒PCR 方法灵敏度高,特异性好,初步检测4 个屏障设施的87 份小鼠血清, 13 份为阳性,通过测序证实为小鼠巨细胞病毒,验证了此方法的可行性。结论为小鼠巨细胞病毒的快速检测提供了方法。     

实验动物从业人员培训考核系统的应用与推广

摘要: 实验动物从业人员培训考核系统的7 个子系统已经全部建立起来,并在推广中不断完善。其中,实验动物从业人员上岗证考试系统于2014 年4 月份正式在北京地区推广使用,到2015 年6 月底,北京举行99 场考试,参考7 439人,合格人数为6 709 人,合格率95. 35%; 同时,黑龙江、内蒙、天津、辽宁、陕西和四川等地也已组织考试或正在准备采用该系统考试。实验动物从业人员培训考核管理系统的推广和应用,规范了不同省市间实验动物人员培训内容,统一了考核标准,达到了全国实验动物从业人员素质评价的一致性。     

实验动物机构认可制度助力实验动物质量保障体系的建设与完善

摘要: 实验动物福利和伦理已经成为实验动物质量保障体系构建过程中需关注的重要内容。本文在介绍部分国外发达国家实验动物管理的核心、管理模式和管理方法的基础上,对构建适合我国国情的实验动物管理模式提出了设想和展望,并介绍了我国目前正在构建的实验动物机构认可制度的研究进展及认可示范情况。     

中国疾病预防控制中心实验动物从业人员岗位培训机制的研究

摘要: 通过对中国疾病预防控制中心实验动物从业人员现状调查,分析实验动物从业人员培训中存在的问题,建立和完善适合本中心实验动物从业人员岗位培训机制。重视从业人员上岗培训和人才队伍的建设,提高实验动物人才队伍专业素质和专业技术水平,促进实验动物工作的快速发展。     

野生东方田鼠的实验动物化及标准的建立

摘要: 东方田鼠是重要的实验动物资源之一,本文总结了本实验室过去十几年来对东方田鼠进行的实验动物化工作,包括生物学性状、建群者与群体的有效大小、驯养、驯化( 实验动物化) 及进化动力等方面的研究以及实验动物化结果的评估和地方标准的制定。展望了以新一代基因组测序技术为基础进行的抗性基因的寻找与新品系的精细培育新方法的摸索。     

我国实验动物垫料质量控制的研究

摘要: 目的对北京地区大量使用的不同材质、不同产地的实验动物垫料进行研究,了解不同材质垫料有害物质水 平,为实验动物垫料地方标准的制定提供参考。方法按照现行方法,对垫料原材料进行物理特性、化学污染物及 微生物污染物水平检测。结果若依据《GB 14924. 2-2001 实验动物配合饲料卫生标准》的规定,各产地的玉米芯 垫料及刨花垫料都符合对重金属、有机磷、有机氯农药及其它有机农药污染的要求,而微生物污染,都有不同程度 的超标。结论本实验结果可作为制定实验动物垫料地方标准的参考。     

屏障环境设施指标动态变化的研究

摘要: 目的探讨屏障设施动态运行状况。方法对第三军医大学实验动物中心等单位的屏障设施内环境,按照国家《实验动物环境与设施GB 14925 － 2010》标准,对温湿度、噪声、照度、空气洁净度、最小静压差、空气菌落数、氨浓度等指标进行了静态和不同时段的动态检测。结果有些指标静态和动态情况下无显著变化,有些指标如空气洁净度、空气菌落数等变化较大。结论通过动物设施的环境检测,掌握了影响其变化的因素,可通过加强管理来保障动物环境设施的有效运行。