黄藤水提物对AD果蝇疗效和寿命的影响

探讨黄藤水提物对AD果蝇疗效和寿命的影响。Elav-gal4基因型雌性果蝇和UAS-Aβ42基因型雄性果蝇进行杂交,收集三天内子代Elav-gal4 >> UAS-Aβ42雄性果蝇,利用UAS-Aβ42/cyo雄性果蝇作为对照,实验组果蝇和对照组果蝇放置在浓度为0、0.5、1、2 mg/mL的黄藤水提物培养基中饲养0、7、14 d,观察爬管实验阳性的果蝇数量,并每天计数果蝇的死亡数直至全部果蝇死亡,计算果蝇平均寿命。结果表明黄藤水提物浓度为0.5 mg/mL饲养7 d和14 d时,与对照组相比,AD果蝇的神经行为学表现和存活时间有改善作用,但效果不显著（P＞0.05）;浓度增加到1 mg/mL时,实验组饲养7 d和14 d爬管实验阳性的果蝇数量与对照组相比均有所上升（P＜0.05）,并且延缓果蝇死亡时间,延长果蝇寿命（P＜0.05）;然而随着浓度的增加,饲养7 d和14 d的果蝇爬管行为学与对照组相比均有明显的抑制作用（P＜0.05）,果蝇的生存时间也显著减少（P＜0.01）。此次实验还发现黄藤水提物在低浓度时治疗AD作用并不明显,但超过2 mg/mL时对AD果蝇爬管行为学和寿命均产生不利影响,因此只有在剂量和给药天数均合适的情况下才会产生积极作用。     

胱抑素C和组织蛋白酶B轴对β淀粉样肽聚集和降解的影响

淀粉样蛋白沉积疾病是由错误折叠的蛋白在细胞内外聚集而引起的一类蛋白质构象类疾病.淀粉样肽β(Amyloid β,Aβ)被认为是引起阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)的致病蛋白，Aβ是由淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein, APP)经一系列分泌酶切割而产生的，由于切割方式不同产生多种不同的肽段类型.人胱抑素C(Human cystatin C,HCC)是一种普遍存在于人体体液和组织液中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂.HCC可与可溶性的Aβ结合，它与Aβ的原纤维共定位于AD病人的脑部病灶组织，表明它具有一定的神经保护作用.组织蛋白酶B(Cathepsin B,Cat B)是一种半胱氨酸蛋白酶，主要存在于脑内胶质细胞的溶酶体中.Aβ含量的增加可以刺激胶质细胞释放Cat B,对Aβ浓度进行调节，但Cat B在中枢神经系统中的Aβ前体蛋白处理和Aβ42代谢中发挥的作用仍有待确定.本文阐述了HCC-Cat B轴可能在AD进程的不同阶段发挥了不同的作用的观点，以期为AD的预防和治疗提供有价值的信息.     

双功能抑制剂SK10对Cu~(2+)存在下Aβ聚集的抑制和解聚作用

由于β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)的聚集是阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)发病机制中的关键过程,而金属离子Cu~(2+)存在下的Aβ的聚集速率加快,且Cu~(2+)本身会促进活性氧(ROS)的产生,增加神经毒性,因此开发既能螯合Cu~(2+)又能抑制Aβ聚集的双功能抑制剂非常重要.本文将金属螯合三肽(SSH)和Aβ聚集七肽抑制剂相组合,设计合成了新的双功能Aβ聚集十肽抑制剂SSHLVFFARK-通过硫代黄素T(ThT)荧光实验、聚集动力学实验、原子力显微镜检测(AFM)、等温滴定量热和MTT细胞毒性测定等研究了SK10对Cu~(2+)存在下Aβ聚集的抑制和解聚作用以及细胞毒性的抑制作用.实验结果表明:SK10不仅可以抑制Cu~(2+)存在下的Aβ40聚集(ThT荧光强度降低了60%),随着SK10浓度的提高使Aβ40纤维逐渐减少,还能降低Cu~(2+)存在下Aβ40聚集产生的细胞毒性,使细胞活性恢复至90%以上;同样,SK10对Cu~(2+)存在下的Aβ42聚集也有抑制作用.由于SK10对Cu~(2+)具有较强的特异性亲和力,能够螯合复合物中的Cu~(2+),因此能抑制由Cu~(2+)催化产生的活性氧(ROS)对细胞的毒性.进一步研究表明SK10还可解聚形成的聚集体,使已形成的聚集体消失,缓解其产生的细胞毒性,使细胞活性提高到90%.以上研究结果不但体现了SK10的药用潜力,也为今后设计和开发金属螯合Aβ聚集双功能抑制剂提供了思路.     

β-淀粉样蛋白31-35及25-35片段对海马CA1细胞兴奋性和抑制性受体通道电流的影响

在Alzheimer病(AD)出现神经变性前的早期记忆功能障碍中,可溶性β-淀粉样蛋白(Aβ)发挥了重要作用.Aβ及其活性片段对海马长时程增强(LTP)的压抑效应与其对学习记忆认知行为的伤害作用具有密切联系,但其机制仍不清楚.鉴于突触后兴奋性和抑制性受体/通道在突触传递、包括LTP的诱导中起着关键性调制作用,利用全细胞膜片钳技术观察了β-淀粉样蛋白31-35片段(Aβ31-35)和25-35片段(Aβ25-35)对急性分离的海马CA1区锥体细胞谷氨酸(Glu)受体、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和γ-氨基丁酸(GABA)受体通道电流的影响.结果显示:急性给予Aβ25-35或Aβ31-35可对Glu受体电流和GABA受体电流产生相反的调制作用.Aβ25-35预处理剂量依赖性地减小了Glu和NMDA引起的全细胞内向电流,相反,GABA受体电流被明显增强;小片段的Aβ31-35也选择性抑制了Glu和NMDA受体电流,增强了GABA受体电流;然而,给予Aβ25-35的反序列Aβ35-31预处理后,Glu,NMDA和GABA引起的受体电流均未出现明显改变.这些结果表明,Aβ25-35和Aβ31-35片段急性处理可导致海马锥体细胞NMDA受体和GABAA受体分别受到抑制和易化影响,这可能有助于解释AD早期可溶性AB对海马LTP及认知行为造成的伤害作用.同时,Aβ25-35Aβ31-35片段具有的类似效应提示,31-35序列很可能是Aβ发挥神经毒性作用的活性中心.     

绿茶多酚对拟痴呆模型小鼠学习记忆活动和AchE活性的影响

目的建立D-半乳糖与Aβ25～35诱导的拟痴呆(Alzheimer's diaease,AD)模型小鼠,观察绿茶多酚对其学习记忆活动和AchE活性的影响.方法皮下注射D-半乳糖(120 mg/kg,连续给药12周),并在第7周时,侧脑室注射Aβ25～35(4 nmol/L),建立AD模型小鼠.利用跳台法和水迷宫方法评价绿茶多酚对AD模型小鼠学习记忆障碍的改善作用;并测定血液和脑组织中AchE的活性.结果绿茶多酚明显延长模型小鼠跳台潜伏期,减少跳台错误次数;缩短游出迷宫时间和减少进入盲端的错误次数,而对脑组织和血浆AchE活性无明显影响.结论绿茶多酚对D-半乳糖与Aβ25～35诱导的AD模型小鼠学习记忆障碍具有改善作用,其作用可能与脑内AchE活性无关.     

铝与阿尔茨海默病发生间关系的研究进展

近年来随着免疫铝佐剂与蛋白及多肽作用机制研究的不断深入,铝与AD发生之间的关系研究重新引起人们的重视.研究发现三价铝离子Al~(3+)对Aβ多肽及磷酸化Tau蛋白具有非常强的结合能力,Al~(3+)作为交联剂具有促进Aβ多肽及磷酸化Tau蛋白聚集等作用,铝在AD的发生过程中具重要作用.通过控制铝摄入防治AD的发生具有重要理论和临床意义.     

Aβ16—22聚集及海藻糖抑制其聚集过程的毛细管电泳检测

淀粉质β（amyloidp,Aβ）多肽是阿尔兹海默症（Alzheimer’Sdisease,AD）的致病蛋白,其疏水核心Aβ16—22具有重要的研究价值．以Aβ16—22为模型多肽,利用毛细管电泳检测方法,分析了Aβ16—22在水溶液和海藻糖溶液中的聚集过程．结果表明,毛细管电泳法不仅能够很好地分离Aβ16-22聚集过程中单体和部分聚体,实现对多肽聚集过程的快速鉴定和分析,同时也可检测海藻糖对Aβ16—22聚集的抑制作用．研究结果可为Aβ聚集抑制剂的高通量筛选和AD治疗中的快速诊断提供实验基础．     

女贞苷对Aβ1-42损伤SH-SY5Y细胞的保护作用及其机制

目的:探讨女贞苷对Aβ1-42诱导神经毒性损伤SH-SY5Y细胞的保护作用及其相关作用机制.方法:对SH-SY5Y细胞进行女贞苷梯度(4μM、20μM、50μM、100μM、500μM)预保护12 h后,加入浓度为15μM的Aβ1-42诱导损伤12 h.MTT法测定终点细胞存活率,ELISA检测细胞外Aβ1-42含量,Western Blot法检测LC3表达变化.结果:女贞苷组(50μM、100μM)可明显增加细胞存活率;ELISA检测结果显示,女贞苷组细胞上清液Aβ1-42含量相较模型组下降;WB检测显示,自噬小体标记物LC3蛋白的表达下调.结论:女贞苷可有效保护Aβ1-42诱导损伤的SH-SY5Y细胞,提高细胞存活率.其可能机制为女贞苷可能增加SH-SY5Y细胞对Aβ1-42的清除,减少其在胞外的聚集而引起的神经毒性,并对自噬有一定的抑制,从而达到对细胞的保护作用.     

温郁金挥发油对Aβ_(25-35)致阿尔兹海默病小鼠模型行为学的影响

目的研究温郁金挥发油对β-淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))致阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的学习记忆改善作用。方法 60只昆明种小鼠随机分为假手术组,模型组,温郁金挥发油低(0.016 mL/kg)、高(0.048 mL/kg)剂量组,盐酸多奈哌齐组(1.30 mg/kg)及参枝苓组(2.6 mL/kg),海马内注射(Aβ_(25-35)),制作小鼠AD模型。连续灌胃给药15 d。Y迷宫和Morris水迷宫实验检测各组小鼠认知行为的改变,HE染色观察其对AD模型小鼠神经元的影响。结果温郁金挥发油可显著增加AD模型小鼠的自发交替反应率,缩短逃避潜伏期,减少总路程,延长游泳路程百分比,具有统计学意义(P0.05或P0.01);可改善海马区神经元细胞排列紊乱、水肿等现象,减少神经元死亡。结论温郁金挥发油对Aβ_(25-35)致阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力具有改善作用。     

荧光光谱法研究人参皂苷Rb1与Aβ_(1-42)的相互作用

β淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)是构成老年斑的主要成分,Aβ在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发生、发展中起主要作用。文章采用紫外和荧光光谱法研究人参皂苷Rb1与Aβ_(1-42)的相互作用,为AD药物筛选提供理论依据。研究表明,人参皂苷Rb1可以增强Aβ_(1-42)的荧光,二者发生相互作用,形成了络合物。人参皂苷Rb1与Aβ络合物的双倒数曲线呈良好的线性关系,说明人参皂苷Rb1与Aβ形成1∶1的络合物,络合常数约为214.5L·mol~(-1)·s~(-1)。     

电针对5月龄APP/PS1转基因小鼠海马组织及组织间液可溶性Aβ1-42水平短时作用的影响

目的探讨电针干预对早期阿尔茨海默病小鼠脑组织间液(brain interstitial fluid,ISF)及海马组织中可溶性Aβ_(1-42)水平的影响.方法将16只雄性5月龄APP/PS1转基因阳性小鼠随机分为模型组和针刺组,将8只同窝、同性别转基因阴性小鼠设为正常对照组,采用电针"百会"、"涌泉"或同等条件束缚作为干预手段,以脑微透析技术获取小鼠海马组织间液,应用ELISA法检测3组小鼠海马组织以及海马ISFβ淀粉样蛋白1-42水平,分别在干预后的6,7,8,9 h观察其是否发生改变.结果与正常对照组相比,模型组海马组织以及ISF中可溶性Aβ_(1-42)明显升高(P0.01);与模型组相比,针刺组小鼠ISF可溶性Aβ_(1-42)降低(P0.05),海马组织Aβ_(1-42)水平对比差异无统计学意义(P0.05).针刺组在电针治疗后6~9 h样品ISF中Aβ_(1-42)含量的检测结果没有随时间变化而变化(P0.05).结论电针可降低AD模型小鼠海马ISF可溶性Aβ_(1-42)水平.     

Alzheimer病研究进展--β淀粉样蛋白学说与主要防治策略

Alzheimer病(AD)是严重危及中老年人身心健康的中枢神经系统退变性疾病,目前对其发病机制的认识以淀粉样蛋白学说占主导地位.该学说认为淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积是AD发病的中心环节;减少Aβ沉积或清除已形成的淀粉样蛋白斑块的措施可以预防和治疗AD.淀粉样蛋白形成主要受遗传因素和环境因素影响.淀粉样蛋白基因突变引起Aβ生成增加,早老蛋白基因突变除了使Aβ生成增加外,还影响细胞内信号传导,使细胞易于凋亡.ApoEε4是AD发病的遗传学危险因素.认识到淀粉样蛋白沉积在AD发病中的关键作用后,人们设计了一系列策略预防淀粉样蛋白沉积,并清除已形成的斑块以防治AD.综述了淀粉样蛋白沉积的影响因素和干预Aβ沉积措施的研究进展.     

Cu~(2+)诱导的Aβ_(40)种子的特性及其对Aβ_(40)聚集的影响

淀粉样β蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)的二次成核机制认为Aβ聚集体可作为种子加速Aβ聚集.而Cu~(2+)与Aβ结合也会加剧Aβ聚集,因此了解Cu~(2+)诱导的Aβ种子对Aβ二次成核的影响具有重要意义.本文考察了不同浓度Cu~(2+)诱导的Aβ_(40)种子对Aβ_(40)聚集过程、聚集体形貌、二级结构以及细胞毒性的影响.结果表明,随着Cu~(2+)浓度增加,Aβ_(40)种子形貌由纤维状转变为球形.并且,两种形貌的Aβ_(40)种子均可促进Aβ_(40)二次成核并形成富含β-折叠结构的纤维状聚集体.其中,纤维状种子比球形种子的促进作用更强并具有浓度依赖效应.值得注意的是,两种形貌的种子诱导的Aβ_(40)聚集体细胞毒性具有明显差异.对比发现:球形种子诱导的Aβ_(40)聚集体比纤维状种子诱导的聚集体毒性显著加剧.本文明确了Cu~(2+)诱导产生的种子对Aβ聚集的促进作用,可为开发有效的Aβ聚集抑制剂提供理论依据.     

果蝇对冷、热极限温度耐受能力的研究

以野生型黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)为基本实验材料,统计分析了非致死的冷、热预刺激对果蝇耐极限温度能力的影响,并用SDS-PAGE电泳研究了冷、热刺激后热休克蛋白的表达情况.实验发现,冷、热预刺激能提高果蝇在同类温度下的耐受水平.同时,高、低温具有交互作用,即冷预刺激提高了果蝇在高温下的存活率.在0℃下,果蝇体内22、23、26、27、42、51、52及70 kD的蛋白质出现增量表达;37℃下70、83 kD的蛋白质表达量增多,推测上述增效作用可能是这些蛋白质引起的.     

β-淀粉样蛋白31—35及25—35片段对海马CA1细胞兴奋性和抑制性受体通道电流的影响

在Alzheimer病（AD）出现神经变性前的早期记忆功能障碍中,可溶性β-淀粉样蛋白（Aβ）发挥了重要作用,Aβ及其活性片段对海马长时程增强（LTP）的压抑效应与其对学习记忆认知行为的伤害作用具有密切联系,但其机制仍不清楚．鉴于突触后兴奋性和抑制性受体／通道在突触传递、包括LTP的诱导中起着关键性调制作用,利用全细胞膜片钳技术观察了β-淀粉样蛋白31—35片段（Aβ31-35）和25-35片段（Aβ25-35）对急性分离的海马CA1区锥体细胞谷氨酸（Glu）受体、N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体和γ-氨基丁酸（GABA）受体通道电流的影响．结果显示：急性给予Aβ25-35或Aβ31-35可对Glu受体电流和GABA受体电流产生相反的调制作用．Aβ25-35预处理剂量依赖性地减小了Glu和NMDA引起的全细胞内向电流,相反,GABA受体电流被明显增强;小片段的Aβ31-35也选择性抑制了Glu和NMDA受体电流,增强了GABA受体电流;然而,给予Aβ31-35的反序列Aβ35-31刊预处理后,Glu,NMDA和GABA引起的受体电流均未出现明显改变．这些结果表明,Aβ25-35和Aβ31-35片段急性处理可导致海马锥体细胞NMDA受体和GABAn受体分别受到抑制和易化影响,这可能有助于解释AD早期可溶性Aβ对海马LTP及认知行为造成的伤害作用．同时,Aβ25-35和Aβ31-35片段具有的类似效应提示,31—35序列很可能是Aβ发挥神经毒性作用的活性中心．     

β-淀粉样蛋白寡聚化模拟研究进展

AD主要病理改变之一为老年斑。聚集的β淀粉样多肽（Aβ）纤维是老年斑构成核心，也导致AD患者神经退行性病变和认知障碍。Aβ神经毒性主要来自于可溶性Aβ寡聚体。但是关于Aβ及其寡聚体的毒性性质存在不同的研究观点，而且Aβ的聚集机制和产生毒性的机制尚不十分明确。Aβ的折叠和聚集是一个非常复杂的过程，在研究寡聚化问题时，经典...     

核桃仁提取物对AD模型大鼠海马和皮质区ChAT、AchE活性的影响

目的：观察核桃仁提取物对阿尔兹海默病(Alzheimer′s disease，AD)模型大鼠中枢胆碱能系统活性的影响，进而探讨核桃仁提取物对AD的防治作用.方法：采用双侧Meynert核立体定向注射微量Aβ1-40制造AD大鼠模型，分别使用核桃仁的3种提取物灌胃干预后，检测大鼠海马与皮质区胆碱乙酰转移酶(ChAT)、乙...     

Alzheimer氏病Aβ与Cu(Ⅱ)相互作用的研究方法

大量老年斑沉积在脑神经细胞外是老年性痴呆的一个重要病理特征.现已证明老年斑的重要组成成分是一种小片段肽Aβ,另外,发现老年斑中也存在一些过渡态的金属离子如Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅱ)等.近年的一些实验研究提示,Aβ与Cu(Ⅱ)络合成复合物可能是Aβ神经毒性作用的机制之一.以Aβ1-40为例,对在体外条件下研究AβCu(Ⅱ)复合物性质及生物学活性的实验方法进行介绍,这将有利于对Aβ神经毒性作用机制更加深入和广泛的研究.     

SNX12调控BACE1的细胞内定位和Aβ的产生

不溶性β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)的沉积是阿尔茨海默症(Alzheimer′s disease,AD)的中心环节,Aβ是由β-分泌酶(BACE1)和γ-分泌酶顺序切割β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)产生的,BACE1与APP在质膜、内含体/溶酶体、高尔基体反面膜囊(TGN)以及早期分泌途径之间的转运很大程度上影响了Aβ的产生.通过Western blot和免疫荧光的方法探讨了Sorting nexin12(SNX12)对Aβ产生的影响及其作用机制.Western blot结果显示过表达SNX12后,分泌到细胞外的Aβ减少,γ-分泌酶的活性及PS1、NCT、pen-2、APP和BACE1的蛋白水平没有明显变化,APP-βCTF水平降低,而下调SNX12时Aβ水平增加,与对照组相比,差异均具有统计学意义(p<0.05);免疫荧光结果表明,SNX12与BACE1在细胞内存在共定位,并且SNX12表达增加可以使BACE1和APP在细胞内处于同一区域的数量减少.这些结果表明,过表达SNX12通过调节BACE1在细胞内的定位,使细胞内处于同一区域的BACE1与APP的数量减少,导致经BACE1切割的APP减少,从而降低Aβ的产生.因此SNX12可能在AD的发病过程中起着一定的调节作用.     

青少年攻击性行为的研究及其控制措施

青少年攻击性行为是影响青少年的身心健康成长的一个重要因素,是一个重要的世界性研究课题.本文探讨了在攻击性行为研究中所采取的主要方法、青少年攻击性行为研究的主要领域、青少年攻击性行为产生的原因分析以及必要的教育控制措施.