网织红细胞与骨髓瘤细胞杂交的胞质杂交体细胞血红蛋白的PAGE电泳分析

小鼠网织红细胞(RM)×人早幼粒白血病细胞突变株(Hb-60-AR);兔网织红细胞(RR)×小鼠BW-胸腺淋巴肉瘤细胞(BW5147);大鼠骨髓有核红细胞(RNR)×小鼠SP2/0浆细胞瘤细胞等不同异种杂交组合的胞质体杂交细胞珠蛋白基因产物血红蛋白的PAGE电泳分析,结果表明在正常状态下检测不到血红蛋白的肿瘤细胞,一旦与网织红细胞或有核红细胞融合后,则能持续地出现血红蛋白,进一步证明哺乳类红细胞胞质因子具有调节基因活动,激活珠蛋白基因表达的作用,不同种属红细胞胞质因子似无种属特异性。     

网织红细胞胞质因子调控肿瘤细胞基因表达的核酸杂交分析 Ⅰ.β-珠蛋白基因的表达

本实验采用核酸杂交技术,以小鼠和人β-珠蛋白基因为探针,分析了同种和异种细胞的胞质体杂交细胞中β-珠蛋白基因的表达状态。结果发现小鼠β-珠蛋白基因转录物不但在同种杂交(小鼠网织红细胞RM×小鼠骨髓瘤BW)的胞质体杂交细胞(BW-RM)中出现,而且在兔网织红细胞与小鼠骨髓瘤的异种杂交细胞(Bw-RR)中亦有表达。同样在小鼠网织红细胞与人浆细胞瘤(HMy)的异种胞质杂交细胞(HMy-RM)中出现人β-珠蛋白基因产物。说明网织红细胞胞质因子可激活原来处于不活动状态的肿瘤细胞β-珠蛋白基因并使之表达.兔和小鼠的胞质因子有同样的调节基因表达的作用而似无种属特异性。对网织红细胞胞质因子调控基因表达和肿瘤细胞恶性逆转的机理和分子生物学基础进行了讨论。     

兔网织红细胞胞质因子对小鼠骨髓瘤细胞恶性调控的研究

以无细胞核的兔网织红细胞与小鼠骨髓瘤细胞BW(胸腺淋巴肉瘤)及SP2/0(浆细胞瘤)分别进行异种杂交。实验结果表明杂交后形成的二种胞质杂交细胞(BW-RR及SP 2/0-RR)均呈现下列去恶性分化特征;①细胞分裂指数、~3H-TdR标记指数及生长曲线明显下降。其中SP2/0-RR的核分裂活动受到明显的抑制;②在软琼脂培养中不形成集落;③异种移植至裸鼠不长瘤;④染色体数量减少,众数及畸变率下降;⑤出现正常分化的珠蛋白基因产物血红蛋白和HGPRT基因的酶产物,珠蛋白探针分子杂交实验证明有珠蛋白基因的表达。为不同种属红细胞胞质因子调控肿瘤细胞恶性提供了证据。论文对胞质因子调控基因表达、恶性逆转及其在红细胞发生过程中自然去核的物质基础等问题进行了讨论。     

中国医学科学院学报1986年第八卷文题索引

惬学科排予l,作者后之数字为卷和页次) 签础医学细他生物学 人结肠癌(WRS)可移植性瘤株在裸小鼠体 内的建立(简报),汪俊等,幻18 一种红细胞膜表面琉基的测定方法,刘晓冰 等,s:146 自发转化的人胚鼻咽部上皮细胞株的建立, 刘育希等,B:145 肿瘤干细胞培养及其应用(评述),李申德, 8:1 63 人骨髓瘤细胞系(TMP 8310)的建立及其驯 化(简报),寸晰等,8:192 网织红细胞与骨髓瘤缺陷株细胞杂交前后 HGPRT酶基因产物的测定,徐炎等, 8:199 人胎肺克隆形成细胞在恶性转化研究中的意 义,黄明等,s:207 自发血道转移的小鼠前胃癌细胞系(MFC) 叼建立及…     

网织红细胞胞质因子调控肿瘤细胞基因表达的核酸杂交分析 Ⅱ.myc癌基因的表达状态

本实验用Northern杂交方法,以c-myc癌基因为探针,对人和小鼠骨髓瘤细胞以及杂交后的同种和异种胞质体杂交细胞和异种杂交细胞进行了癌基因表达的核酸分子杂交分析。结果表明,在小鼠-小鼠,小鼠-兔及人-小鼠的胞质体杂交细胞(BW-RM,BW-RR,HMy-RM)中均未检测到myc癌基因的表达产物。但自15代以后开始出现微弱或可测的表达活性,并随传代而有上升的趋向。同样,在小鼠浆细胞瘤(Sp2/o)与大鼠有核红细胞(ER)的异种杂交中,杂交细胞(SpER)的第4代和第7代细胞中亦未检查到myc基因转录物。表明细胞杂交后,myc基因受到了抑制。这种抑制作用似无种属特异性。这一结果提示红系细胞内“胞质因子”对肿瘤细胞原来活化的myc基因具有抑制作用,并与杂交细胞的恶性下降有关。论文对胞质因子对癌基因表达的调控作用及其分子生物学机理进行了讨论。     

红细胞分化去核因子：哺乳类红细胞终末分化／肿瘤抑制 …

本文报道哺乳类红细胞终末分化去核因子（ＥＤＤＦ）调控恶性骨髓瘤细胞的分化以及与ＥＤＤＦ相关的基因克隆的系列研究结果。以不同分化期哺乳类红细胞为研究对象,观察红细胞自然排核前后的细胞形态变化和与之互为对应的物质代谢的改变,分析ＥＤＤＦ与终末分化、核浓缩及自然排核的可能关系;用自建的红细胞质体杂交模型,分别对红白血病和非红系的骨髓瘤细胞进行同种和异种的细胞杂交实验以验证ＥＤＤＦ的作用规律。结果表明,哺     

杂交瘤技术与单克隆抗体简介

自1890年 VonBehring 发现抗毒素以来,免疫学家们为获得单特异性抗体作过许多努力,均未成功。直至1975年,英国的Khler 和 Milstein 用小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞(内含大量能分泌抗体的 B 细胞)杂交,成功地获得了抗羊红细胞的单克隆抗体,创立了淋巴细胞杂交瘤技术。该技术是利用亲代骨髓瘤细胞在体外能迅速生长繁殖,不分泌或缺乏 HGPRT     

胞质因子对肿瘤细胞恶性的调控研究——小鼠骨髓瘤细胞与网织红细胞胞质体的胞质杂交实验

本文选用无细胞核而富含珠蛋自mRNA的正常小鼠网织红细胞与骨髓瘤细胞系中的BW胸腺淋巴肉瘤细胞系、NS-1浆细胞癌细胞系及P388淋巴瘤细胞等分别进行胞质杂交实验,以研究胞质因子调控肿瘤细胞恶性的可能性。实验结果表明3种淋巴瘤细胞在并入网织红细胞胞体后所形成的杂交细胞呈现下列去恶性化特征:1)杂交细胞出现组织化学反应及超微结构形态改变;2)细胞分裂指数及生长速度明显下降;3)作异种移植至裸鼠后丧失发生肿瘤能     

人浆细胞瘤与小鼠网织红细胞异种杂交的恶性调控研究

用人浆细胞瘤细胞与小鼠网织红细胞异种杂交获得成功。杂交细胞可以传代,出现下列明显的肿瘤细胞去恶性化特征:①生长速度及~H-TdR并合率明显下降;②出现红细胞特异的遗传标记——血红蛋白;③出现慢型迁移率的葡萄糖-6-磷酸异构酶Gpi;④在软琼脂培养基中不形成细胞集落;⑤异种移植至裸鼠后丧失发生肿瘤的能力。表明红细胞胞质体杂交模型可以用作研究细胞恶性调控的实验系统。对调控肿瘤细胞恶性表型的可能机理进行了讨论。     

早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α融合基因及其在急性早幼粒细胞白血病临床中的应用

正常情况下,早幼粒白血病基因与维甲酸受体α基因均存在于正常的细胞中,其表达产物对细胞的生长发育均具有十分重要的调控作用。在绝大多数急性早幼粒细胞白血病发病过程中,由于某种原因引起17号染色体与15号染色体之间产生移位,从而导致早幼粒白血病基因与维甲酸受体α基因融合形成早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α融合基因,它与急性早幼粒细胞白血病的发生、发展、诊断、治疗以及预后判断等临床关系十分密切。     

抗8-AG和HGPRT缺失的人早幼粒白血病细胞突变株(HL-60-AR)的体外诱导分化潜能

具有抗8-AG和HGPRT~-遗传标记的HL-60-AR细胞与维生素A酸或二甲基亚砜一起保温后,细胞对NBT还原反应能力增强;细胞膜表面出现C_2补体受体;细胞形态按粒系白细胞途径向较成熟的方向发育。同时,细胞并合~3H-TdR的速率降低;细胞几乎全部丧失在软琼脂中形成集落的能力。HL-60-AR细胞对次黄嘌呤的诱导分化反应不敏感。     

乙型肝炎病毒体外感染人绒毛膜癌JEG3细胞的实验研究

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人绒毛膜癌滋养层细胞(JEG3)模型,探讨HBV宫内感染机制。方法应用HBV阳性且高载量的血清,感染JEG3细胞。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测感染后细胞上清液和细胞内的HBV载量;应用ELISA方法检测感染后不同时间、不同代次上清液的HBsAg、HBeAg浓度;应用SP免疫组化检测感染细胞内HBsAg、HBeAg的表达。结果感染初代的JEG3细胞,随着时间增加病毒载量亦增加。传代后细胞及上清中的HBV载量随传代次数增加逐渐降低,5代后检测均为阴性;感染初代上清液HBsAg含量随时间增加,120h含量最高。传代细胞的上清液HBsAg检测1～4代为阳性,但浓度逐渐降低,5代后均为阴性。上清液的HBeAg检测,各时间点、各代均为阴性;1、2、3、4代细胞HBsAg、HBcAg染色可见阳性细胞。结论HBV可以在体外感染滋养层细胞,且能在传代细胞中有持续的表达。感染过程中参与调控的相关细胞因子及HBV复制的持续与否有待进一步探讨。     

STAT3在HL-60细胞内的表达

目的：探讨人早幼粒细胞白血病细胞内STAT3的表达及酪氨酸磷酸化活化情况。方法：培养人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60，利用特异性抗体，用免疫沉淀法、聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳及Western B1ot方法进行检测。结果：实验结果表明HL-60细胞内有STAT3α和STAT3β的表达和酪氨酸(Y705)磷酸化活化。结论：本研究结果提示STAT3的异常表达和活化可能与人早幼粒细胞白血病的发生有关。     

Overexpression of the promyelocytic leukemia gene suppresses growth of human bladder cancer cells by inducing Gl cell cycle arrest and apoptosis

Objectives To examine the anti-oncogenic effects of promyelocytic leukemia (PML) on bladder cancer and to explore its molecular mechanisms of growth suppression.Methods Wild-type PML was transfected into bladder cancer cells (5637 cell) and expressed in a replication-deficient adenovirus-mediated gene delivery system and introduced into human bladder cancer cells (5637 cell) in vitro and in vivo. The effect and mechanisms of the PML gene in cell growth, clonogenicity, and tumorigenicity of bladder cancer cells were studied using in vitro and in vivo growth assays, soft agar colony-forming assay, cell cycle analysis, apoptosis assay and in vivo tumorigenicity assay.Results Overexpression of PML in 5637 cells significantly reduced their growth rate and clonogenicity on soft agar. PML suppressed bladder cancer cell growth by inducing G1 cell cycle arrest and apoptosis. Adenovirus-mediated PML ( Ad-PML) significantly suppressed the tumorigenicity and growth of bladder cancer cells. Intratumoral injection of     

白血病肿瘤免疫抑制因子活性和理化性质的探讨

4种人白血病细胞株,一种小鼠肉瘤细胞株的培养上清液和4种白血病患者血清均发现有免疫抑制活性。抑制PHA诱导的淋巴细胞增殖,抑制白细胞介素2的产生和反应性,以2BS人胚肺细胞作对照则无抑制作用.肿瘤细胞株培养上清液无细胞毒作用,其抑制作用无种属特异性和组织器官特异性.其中,来源于HL-60人早幼粒白血病细胞肿瘤免疫抑制因子的分子量为87kD,其化学本质为蛋白质,抗急性非淋巴细胞白血病药物对这种肿瘤免疫抑制因子的分泌有部分阻抑作用。     

Overexpression of the promyelocytic leukemia gene suppresses growth of human bladder cancer cells by inducing G1 cell cycle arrest and apoptosis

Objectives To examine the anti-oncogenic effects of promyelocytic leukemia (PML) on bladder cancer and to explore its molecular mechanisms of growth suppression.Methods Wild-type PML was transfected into bladder cancer cells (5637 cell) and expressed in a replication-deficient adenovirus-mediated gene delivery system and introduced into human bladder cancer cells (5637 cell ) in vitro and in vivo. The effect and mechanisms of the PML gene in cell growth, clonogenicity, and tumorigenicity of bladder cancer cells were studied using in vitro and in vivo growth assays, soft agar colony-forming assay, cell cycle analysis, apoptosis assay and in vivo tumorigenicity assay.Results Overexpression of PML in 5637 cells significantly reduced their growth rate and clonogenicity on soft agar. PML suppressed bladder cancer cell growth by inducing G1 cell cycle arrest and apoptosis. Adenovirus-mediated PML (Ad-PML) significantly suppressed the tumorigenicity and growth of bladder cancer cells. Intratumoral injection of Ad-PML into tumors induced by 5637 cells dramatically suppressed their growth.Conclusions The results indicated that overexpression of PML protein may promote efficient growth inhibition of human bladder cancer cells by inducing G1 cell cycle arrest and apoptosis, and adenovirus-mediated PML (Ad-PML) expression efficiently suppresses human bladder cancer growth.     

TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡及其与FHIT基因突变关系的初步研究

目的:分析原核重组表达的人可溶性TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡,并观察凋亡作用与FHIT基因突变的关系.方法:观察人可溶性TRAIL对28株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用,RT-PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失突变情况.结果:1～100 mg/L的重组人可溶性T RAIL蛋白即可诱导19株细胞(包括人肿瘤细胞株)如1990(胰腺导管癌)、MCF-7(乳腺癌)、A5 4 9(肺癌)、U251(星形胶质瘤)、HepG-2(肝细胞癌)、M85(胃癌)、CNE-2(鼻咽癌)、Hep-2( 喉癌)、AT-29(结肠癌)、3AO(卵巢癌)和B16-MB(黑色素瘤),髓性恶性细胞如Jurkat、K56 2、U937、6T-CEM,鼠源性S180(肉瘤)、Ehrlich(腹水瘤)和Lewis(肺癌),以及人内皮细胞株ECV304等发生凋亡;而其他9株细胞,如SK-N-SH(人神经母细胞瘤)、8898(人胰腺导管癌)、HeLa(人宫颈癌)、SMMU7721(人肝癌)、HL60(人白血病)、COS-7(猴肾)、人成纤维细胞、L929(鼠成纤维细胞)、Wish(人羊膜细胞)等需大于100 mg/L的TRAIL才能使其凋亡;观察到上述部分对TRAIL敏感的人源细胞的FHIT基因有缺失突变,而不敏感的人源细胞FHIT 基因完整.结论:原核表达的人可溶性TRAIL具有明显诱导多种肿瘤细胞凋亡的活性,其机制可能与FHIT基因的缺失有关.     

长期传代后HL-60细胞内脱氧胞苷激酶与阿糖胞苷耐药性的关系

 目的  通过观察人早幼粒白血病细胞系(HL-60)及其耐药细胞株(HL-60/R)经过长期传代后细胞内脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase, dck) mRNA表达及其酶活性的变化规律,探讨dck与阿糖胞苷(Ara-C)疗效及耐药现象发生的相关性。方法  分别采用实时PCR方法和核素液闪法测定HL-60和HL-60/R细胞内dck的mRNA表达水平及其酶活性水平。通过体外培养传代,观察2种细胞株经长期传代(5、10、20、30、40、50代)后细胞内dck的mRNA表达及酶活性的变化规律。结果  传代初期结果显示,HL 60和HL 60/R两组细胞株之间的mRNA表达水平分别为0.37±0.03和0.17±0.03,活性值分别为0.069±0.006 nmol·min-1·mg-1 protein和0.019±0.007 nmol·min-1·mg-1 protein,HL-60的dck mRNA表达水平和酶活性均明显高于HL-60/R(P<0.01)。并且两组细胞株之间的显著性差异(P<0.01)持续存在于各传代过程中。HL-60和HL-60/R两组各传代节点(10、20、30、40和50代)的dck mRNA表达水平与酶活性与本组第5代细胞相比,则无明显变化(P>0.05)。结论  HL-60及HL 60/R两组细胞株间的dck mRNA表达和酶活性在传代初期存在显著差异,且两组间的差异持续存在。但与各自的初期传代相比,长期传代后的dck mRNA表达和酶活性变化并不明显,提示dck仅与Ara-C的初期疗效明显相关,而与Ara-C耐药现象的发生可能无关。