麦洼牦牛初乳期乳腺中2个特异表达EST片段的克隆与分析

为研究牦牛初乳期乳腺特异表达的基因,采用抑制消减杂交和斑点杂交法对麦洼牦牛初乳期(产犊后2 d)和常乳期(产犊后18 d)特异表达的基因进行了分离鉴定。结果发现2个在初乳期间特异表达的EST片段,并命名为LAO和COL1α1。测序结果LAO片段长698 bp,GenBank比对,其核苷酸序列与西藏黄牛(Bos taurus)、小家鼠(Mus musculus)、家犬(Canis familiaris)等的L-氨基酸氧化酶基因有较高的序列相似性,其序列一致性分别达到96%、73%、72%;COL1α1片段长337 bp,比对结果,其序列与Bos taurus、马鹿(Cervus elaphus)、家犬(Canis lupus fa-miliaris)等的Ⅰ型胶原蛋白α1有较高的序列相似性,其序列一致性分别为100%、100%、99%。2个序列与牛基因组的Blast分析表明,LAO片段定位于3号染色体LOC782545区,该区域编码1个L-氨基酸氧化酶基因;另一片段定位于19号染色体LOC615867区,该区域编码1个Ⅰ型胶原α1基因。研究表明,L-氨基酸氧化酶基因和Ⅰ型胶原蛋白α1基因是牦牛初乳期乳腺特异表达蛋白,这2个基因在牦牛初乳期乳腺组织中较高的表达水平可能与初乳期乳腺特殊的生理状态有关。     

海南白唇竹叶青线粒体基因组结构与特征分析

白唇竹叶青蛇(Trimeresurus albolabris)是亚洲竹叶青毒蛇之一,主要分布在东亚和东南亚。为研究海南岛产白唇竹叶青蛇线粒体基因,测定了采自海南文昌的个体线粒体基因组全序列,并与近缘物种进行比较。结果显示,其环状基因组全长17222 bp,包含13个蛋白质编码基因、22个转移RNA基因、2个核糖体RNA基因、2个控制区和1个L-链复制起源。总碱基组成为33.4%A,27.0%T,27.3%C,12.3%G,除8个tRNA基因和ND 6亚基基因在轻链上编码的外,其余基因均分布在重链上。此序列与其他产地的白唇竹叶青蛇相似度为99.61%,与其他竹叶青蛇相似度大于88%,与原矛头蝮蛇相似度大于85%。     

家蚕线粒体基因组EcoRⅠ2.0kb片段的克隆及序列分析

对家蚕线粒体基因组EcoRⅠ 2 .0kb片段进行了克隆和序列分析 ,结果表明该片段包含完整的丝氨酸转移RNA基因、NADH氧化还原酶亚基Ⅰ基因、细胞色素氧化酶b亚基基因的部分序列。与果蝇 (Drosophilamelanogaster)的mtDNA进行了同源性比较 ,并根据无脊椎动物线粒体基因组密码子表 ,推定氨基酸序列。     

家蚕尿酸氧化酶基因BmUo的克隆及其序列分析与原核表达

尿酸氧化酶(urate oxidase;EC1.7.3.3)能够降解尿酸形成尿囊素,在嘌呤代谢途径中起到至关重要的作用。用生物信息学方法在家蚕基因组数据库中进行同源性检索,获得一条可能的家蚕尿酸氧化酶序列,根据预测序列设计引物及克隆、测序验证,已成功地克隆到家蚕尿酸氧化酶基因BmUo的完整ORF。克隆的cDNA(GenBank登录号:DQ189992)全长1088bp,ORF长1014bp,编码337个氨基酸残基,预测分子质量为38.18kD,等电点为6.90。通过半定量RT-PCR检测了该基因在各组织的表达情况,发现该基因的mRNA在5龄第3天的家蚕的脂肪体和马氏管中有表达。该基因在氨基酸水平上与果蝇、按蚊尿酸氧化酶的相似性分别为45.6%和51%,在第91个氨基酸残基处具有Asn-Ser-X-Val/Ile-Val/Ile-Ala/Pro-Thr-Asp-Ser/Thr-X-Lys-Asn的高度保守序列,这一序列在真核生物和原核生物中均广泛存在,可能与尿酸氧化酶的酶活性有关。家蚕尿酸氧化酶与其他38个物种尿酸氧化酶的聚类分析发现,尿酸氧化酶基因在昆虫、真菌、双子叶植物和哺乳动物这一层面上是相对保守的。将BmUo基因片段与pET-28a连接,构建原核表达载体pET-28a/uo,重组载体转化大肠杆菌BL21后,在37℃的培养条件下可检测到与理论分子质量相符的蛋白条带。     

家蚕细胞色素P450家族CYP6B29的克隆与序列分析

细胞色素P450单加氧化酶系在生物体对外源化合物的代谢和内源化合物的调节都起着非常重要的作用,许多证据表明昆虫杀虫剂抗性的产生与单加氧化酶系介导的代谢反应有关,其关键组份细胞色素P450作为终端氧化酶能氧化多样的底物。依据家蚕基因组P450预测序列设计1对引物,以家蚕中肠为材料提取mRNA,采用RT-PCR方法克隆了P450家族基因CYP6B29(GenBank登录号:DQ252324)。序列分析表明,该基因的ORF为1 518 bp,编码505个氨基酸,预测其相对分子质量约为58 kD,等电点为8.29。经与已知P450的6B亚族其它所有成员氨基酸同源比对发现,CYP6B29基因与美洲棉铃虫CYP6B27基因的同源关系最近,同源性达到60.5%。     

奇异变形杆菌次级L-氨基酸脱氨酶在大肠杆菌中的表达及其特征

L-氨基酸脱氨酶可催化天然L-氨基酸脱氨。本研究从奇异变形杆菌中分离出两种L-氨基酸脱氨酶,其中一种具有较高的脂肪族L-氨基酸和芳香族L-氨基酸活性,主要是L-苯丙氨酸;另一种脱氨酶可降解的L-氨基酸较少,主要是L-组氨酸。本研究从P.mirabilis KCTC 2566中分离、克隆并表达了一种次级氨基酸脱氨酶,并成功分析了其特征,命名为Pm1。将Pm1推测序列与其同源序列进行比对可知Pm1与P.vulgaris的L-氨基酸脱氨酶(LAD)具有很大相似性(96%);但与Pma的同源性相对较低(72%),Pma与LAD和Pm1相似,都具有L-组氨酸脱氨酶活性,这表明Pm1属于次级氨基酸脱氨酶。Pm1的Vmax和Km值分别为119.7μg苯丙酮酸/(mg.min)和31.55mmol/L苯丙氨酸,低于Pma的Vmax和Km值。Pm1可能对咪唑丙烯酸和α-酮戊二酸等商业材料的工业化生产起到一定的作用。     

家蚕蛹线粒体DNA EcoRⅠ 1.9kb片段的克隆及序列分析

克隆了二化性家蚕蛹体的线粒体DNAEcoRⅠ酶解 1 .9kb片段 ,并进行了序列测定。结果表明 :克隆片段中包含完整的线粒体赖氨酸转移RNA(tRNA Lys)基因、天冬氨酸转移RNA(tRNA Asp)基因、ATP合酶亚基Ⅷ基因和细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ、ATP合酶亚基Ⅵ基因的部分序列。并与果蝇线粒体DNA的同源性和参照果蝇线粒体DNA密码子翻译的氨基酸顺序进行了比较 ,由tRNA的一级结构推断出可能的二级结构模型     

对于断奶仔猪L-蛋氨酸与DL-蛋氨酸的生物利用率是相同的

正1引言与目标蛋氨酸是一种必需氨基酸,通常为猪典型日粮中的第二或第三限制性氨基酸。DL-蛋氨酸(50:50 D-与L-异构体的混合物;纯度99%)是家禽与猪饲料中主要的蛋氨酸来源。日粮中蛋氨酸的D-异构体必须被D-氨基酸氧化酶(D-AAOX)转化为L-异构体才可被动物利用。由于断奶仔猪与家禽的肝脏、肾脏、小肠等不同器官中均含有大量D-氨基酸氧化酶活性,因此D-蛋氨酸转化为L-蛋氨酸不会受到限制(Fang等,2010;     

微小牛蜱铁蛋白编码基因的克隆和分析

从微小牛蜱克隆到1个新的铁蛋白编码基因，cDNA全长642bp，编码区为123-639bp，编码172个氨基酸残基，该蛋白预测的分子量为19．9ku，等电点为4．24。经过分析，其预测氨基酸序列与已报道的变异革蜱、非洲钝缘蜱和蓖子硬蜱铁蛋白同源性分别为93．60％、88．37％和83．72％。且核苷酸序列在mRNA 5’未翻译区(5’UTR)的茎环结构存在铁应答元件(IRE)，其氨基酸序列上带有典型的亚铁氧化酶中心结构的保守序列。RT-PCR分析表明，该基因在微小牛蜱卵、幼蜱、半饱血雌蜱、饱血雌蜱和雄蜱这几个阶段均有表达。     

桑树HSP基因的生物信息学分析

本研究利用生物信息学对桑树的HSP基因氨基酸序列进行分析。结果表明：HSP基因位于真核生物细胞质中，基因序列有7条开放阅读框，氨基酸序列中有353个氨基酸，分子式为C_(1017)H_(1626)N_(296)O_(295)S_5。属于稳定蛋白。氨基酸序列具有亲水性，存在信号肽。HSP的结构以无规则卷曲为最主要方式。GO功能分为三类，序列中分布着14个蛋白结合位点。桑树与木豆、花生、雷公藤等的HSP氨基酸序列有同源性。