糖原合成酶激酶3β介导心房钠尿肽对H9c2心肌细胞线粒体保护作用的研究

目的  探讨心房钠尿肽（ANP）对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法  采用四甲基罗丹明乙酯（TMRE）荧光染料和激光共聚焦显微镜成像技术测定H9c2心肌细胞TMRE荧光强度的变化,即线粒体膜通透性转换孔（mPTP）开放程度。利用双氧水H2O2诱导H9c2心肌细胞线粒体mPTP的开放,预处理不同浓度的ANP后,观察ANP对mPTP开放的影响;同时利用Western blot检测H9c2心肌细胞的糖原合成酶激酶3β（GSK-3β Ser9）磷酸化程度,即失活程度。利用激活型GSK-3β质粒转染的H9c2心肌细胞（GSK-3β-S9A-HA）,来观察ANP对GSK-3β-S9A-HA的线粒体mPTP开放程度。结果  与对照组（600μmol/L H2O2）比较,0.01、0.10、1.00和10.00 nmol/L ANP明显抑制H2O2对TMRE荧光强度的衰减效应（P <0.05）,其中1.00 nmol/L的ANP效应最强。Western blot检测结果显示,0.01、0.10、1.00和10.00 nmol/L ANP明显增强GSK-3β Ser9的磷酸化（P <0.05）,即抑制GSK-3β的活性。利用GSK-3β-S9A-HA后发现,ANP（1.0 nmol/L）不能抑制mPTP开放（与H9c2比较P <0.05）。结论  ANP通过调节GSK-3β活性来抑制H9c2心肌细胞mPTP的开放,从而保护H9c2心肌细胞的缺血再灌注损伤。

     

大鼠认知障碍对糖代谢的影响及其与肝脏和骨骼肌糖原合成酶激酶-3β表达水平的关系

目的  探讨大鼠认知障碍对糖代谢的影响及其与肝脏和骨骼肌;糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）表达的关系,为糖代谢的神经调节机制研究提供新的实验依据。方法  Aβ1-42大鼠海马内注射构建认知障碍模型,血糖仪检测大鼠空腹血糖（FPG）,半定量反转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测肝脏与骨骼肌GSK-3β mRNA的表达,蛋白印迹法（Western blot）检测肝脏与骨骼肌GSK-3β的表达。结果  ①实验组大鼠FPG为（7.99±0.15）mmol/L,与假手术组和对照组比较显著升高（P <0.05）。②实验组大鼠肝脏和骨骼肌GSK-3β mRNA表达水平分别为（0.47±0.03）和（0.26±0.02）,与假手术组和对照组比较均明显升高（P < 0.05）。③实验组大鼠肝脏和骨骼肌GSK-3β表达水平分别为（0.47±0.04）和（0.26±0.03）,均显著高于假手术组与对照组（P <0.05）。结论  大鼠认知障碍可引起血糖水平的升高,其机制可能与认知障碍大鼠肝脏和骨骼肌GSK-3β表达升高有关。

     

AktGSK-3β通路介导调控莱菔硫烷减轻心脏移植缺血再灌注损伤的研究

摘要：目的  探讨蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）信号通路对莱菔硫烷（SFN）预处理减轻大鼠心肌冷缺血再灌注损伤（IRI）的作用机制。方法  64例健康雄性SD大鼠随机分为4组：IRI组、SFN组、阻滞剂LY294002+IRI（LY+IRI）组、阻滞剂LY294002+SFN预处理（LY+SFN）组,将冷藏于心肌保护液（组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液）9 h的供体心脏移植到受体大鼠的腹腔,复制同种大鼠异体异位心脏移植模型,术后24 h取供体心脏心肌组织,采用免疫组织化学法（IHC）和Western blot检测Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、GSK- 3β、磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白的表达。结果  IHC法和Western bolt检测各种蛋白结果显示,与IRI组比较,SFN组p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达升高（P <0.05）。应用阻滞剂LY294002后,SFN+LY组与LY+IRI组的p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论  SFN能通过Akt/GSK-3β信号通路减轻心脏移植心肌冷缺血再灌注损伤。

     

淫羊藿苷联合地塞米松对人髓核细胞增殖及分泌表达的影响

目的  探讨淫羊藿苷（ICA）与地塞米松（Dex）联合作用对人髓核细胞（hNPs）增殖及聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、II型胶原蛋白（Col2a）、IL-6、IL-8和基质金属蛋白酶（MMP-13）表达的影响。方法  取生长状态良好的hNPs按不同处理因素分为：control组（只含培养基）、ICA组（20μmol/L ICA）、Dex组（0.2μmol/L Dex）、ICA+Dex组（20μmol/L ICA+0.2μmol/L Dex）、IL-1β组（10 ng/ml IL-1β）、ICA+IL-1β组（20μmol/L ICA+10 ng/ml IL-1β）、Dex+IL-1β组（0.2μmol/L Dex+10 ng/ml IL-1β）、ICA+Dex+IL-1β组（20μmol/L ICA+0.2μmol/L Dex+10 ng/ml IL-1β）,各组作用48 h;CCK-8法检测细胞的增殖;Western blot、RT-PCR以及ELISA检测Aggrecan、Col2a、IL-6、IL-8和MMP-13表达。结果  CCK-8结果显示：与control组比较,低浓度的ICA（≤20μmol/L）和Dex（≤0.2μmol/L）单独作用均提高hNPs存活率但差异无统计学意义（P >0.05）。然而,10μmol/L ICA和0.2μmol/L Dex联合用药对hNPs的存活率大于单独用药（P < 0.05）;Western blot、RT-PCR以及ELISA结果表明：与单独用药组相比,ICA和Dex联合作用促进Aggrecan、Col2a蛋白和mRNA表达（P <0.05）;另外,ICA和Dex联合处理抑制IL-1β诱导的hNPs炎症介质IL-6、IL-8的分泌表达（P <0.05）,同时降低MMP-13蛋白、mRNA水平（P <0.05）。结论  ICA与Dex联合作用对促进hNPs增殖、Aggrecan和Col2a表达有效果;同时抑制IL-1β诱导的hNPs炎症介质IL-6、IL-8和MMP-13的表达,为椎间盘退行性病变的药物治疗提供理论依据。

     

持续脑电双频指数监测在脓毒症脑病患者中的应用价值

目的  探讨持续性脑电双频指数（BIS）监测在脓毒症脑病（SAE）患者中的临床应用价值。方法  采取随机区组法，将山东省胜利油田中心医院2011年4月-2014月4月收治的116例脓毒症患者按是否为脑病患者分为脓毒症脑病组（SAE）及非脓毒症脑病组（非SAE），比较两组BIS、PCT、S100β蛋白、GCS分数及APACHE-II分数差异，并就BIS与GCS分数及APACHE-II分数进行Pearson相关性分析，同时对以上指标在患者的差异进行比较。结果  SAE组PCT值（8.453±3.442）μg/L及S100β蛋白值（0.775±0.356）μg/L均高于非SAE组（4.775±2.874）μg/L、（0.146±0.096）μg/L，差异具有统计学意义（P <0.05）；同时，脓毒症脑病患者BIS与GCS及APACHE-II具有明显的相关性，相关系数分别为0.754及-0.657，而脓毒症患者则无明显相关性，此外，两组患者不同治疗结局下各项指数差异均具有统计学意义（P <0.05）。结论  对脓毒症患者实施持续BIS监测有利于早期确诊患者是否并发脓毒症脑病，并对治疗预后起到一定的预判作用，同时BIS与GCS及APACHE-II具有较好的相关性，若配合PCT及S100β表达水平，则有助于准确评估患者病情。

     

血液透析合并慢性乙型肝炎患者血清β2-微球蛋白水平及其影响因素

目的  观察血液透析合并慢性乙型肝炎（简称慢性乙肝）患者血清β2-微球蛋白（β2-MG）水平,并探讨血清β2-MG的影响因素。方法  按照“慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）”筛选行血液透析治疗的慢性乙肝患者,30例纳入研究。选择30例乙肝病毒（HBV）阴性的血液透析患者作为对照组;用t检验比较两组实验室指标,用多元线性回归分析法分析影响血清β2-MG的因素。结果  HBV阳性组血清β2-MG水平为（65.64±10.18）μg/ml,较HBV阴性组（44.90±12.81）μg/ml显著升高（P <0.010）。多元线性回归分析显示,血清β2-MG水平与血清清蛋白呈负相关（B=-0.001,P =0.015）,与HBV感染、透析龄及谷丙转氨酶呈正相关（B=14.127,P =0.000;B=0.421,P =0.001;B=0.077,P =0.032）。结论  血液透析合并慢性乙肝患者血清β2-MG水平较HBV阴性的血液透析患者显著升高,且与血清清蛋白、谷丙转氨酶、HBV感染及透析龄有关。

     

Notch1在肌成纤维细胞转化中的作用及表达变化

目的  探讨在成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中,Notch1表达的变化规律,以及γ-分泌酶抑制剂（DAPT）抑制Notch信号后,对细胞转化的影响。方法  取新出生2～3 d SD大鼠的肺组织,用胰酶消化法分离肺成纤维细胞,再将培养至第3代的细胞分为3组：对照组、转化生长因子-β1（TGF-β1）组、TGF-β1+ DAPT组。对照组为空白对照,TGF-β1组加入5ng/ml TGF-β1,TGF-β1+DAPT组同时加入5 ng/ml TGF-β1及5μmol/L DAPT。采用免疫细胞化学法对α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达变化进行检测。同时通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测Notch1 mRNA和蛋白的表达变化。结果  α- SMA免疫细胞化学结果表明,对照组大部分细胞无染色,而TGF-β1组则可见大部分细胞内有黄色和棕黄色颗粒及条纹,DAPT组和对照组无明显差异。对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组Notch1 mRNA表达量分别为（0.278±0.022）、（0.783±0.018）和（0.313±0.029）,对照组与TGF-β1组、TGF-β1组与TGF-β1+DAPT组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,对照组与TGF-β1+DAPT组比较差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组Notch1蛋白表达量分别为（0.312±0.019）、（0.701±0.026）和（0.345±0.022）,组间比较结果同Notch1 mRNA。结论  Notch1可以促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,进而促进肺纤维化。

     

腹腔镜与开腹脾切除术在治疗肝硬化所致脾功能亢进中的对比研究

目的  比较研究腹腔镜脾脏切除术与开腹脾脏切除术在治疗肝硬化所致脾功能亢进中的临床疗效，为手术治疗肝硬化所致脾功能亢进提供参考。方法  选取2012年1月-2015年12月于该院手术治疗的46例肝硬化所致脾功能亢进患者为研究对象。采用随机数字表法分为观察组和对照组各23例，对照组行开腹脾脏切除术，观察组行腹腔镜脾脏切除术。比较两组手术相关指标、肝功能、炎症反应、免疫功能。结果  手术指标：观察组手术时间长于对照组，切口疼痛程度、拔管时间、术后住院时间均明显低于对照组[（101.38±26.25）min对比（76.14±15.36）min，（156.42±36.43）ml对比（180.50±48.19）ml，（2.50±0.79）切口疼痛程度对比（4.31±1.28）切口疼痛程度，（4.77±1.52）d对比（6.76±2.41）d，（7.79±1.28）d对比（11.03±2.73）d]（t =3.349～5.153，P <0.05）；肝功能：术后1 d时，观察组血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（Tbil）、直接胆红素（Dbil）均明显低于对照组[（43.32±4.52）u/L对比（46.365±5.36）u/L，（60.56±7.21）u/L对比（73.45±8.36）u/L，（27.52±3.42）μmol/L对比（34.28±4.25）μmol/L，（8.16±1.02）μmol/L对比（12.12±1.24）μmol/L]（t = 3.928～10.354，P <0.05）；术后7 d时，观察组ALT、AST、Dbil等指标明显低于对照组[（41.56±5.12）u/L对比（47.56±5.24）u/L，（37.75±4.52）u/L对比（54.42±6.25）u/L，（7.28±1.12）μmol/L对比（9.52±1.14）μmol/L]（t =3.928～10.354，P <0.05）；炎症反应免疫功能：术后1 d和3 d，观察组白细胞计数（WBC）、C反应蛋白（CRP）、CD8+均明显低于对照组[（13.18±2.31）×109/L对比（16.85±3.42）×109/L，（56.65±6.85）mg/L对比（74.25±8.35）mg/L，（24.12±3.24）%对比（26.14±3.45）%；（11.42±3.24）×109/L对比（15.32±3.36）×109/L，（38.64±4.35）mg/L对比（53.12±5.54）mg/L，（20.14±3.23）%对比（22.54±3.52）%]，CD4+、CD4+/CD8+明显高于对照组[（26.24±3.25）%对比（24.82±3.24）%，（1.46±0.32）%对比（1.34±0.28）%；（32.82±4.46）%对比（29.31±3.42）%，（1.65±0.28）%对比（1.50±0.31）%]（t =2.021～10.256，P <0.05）。结论  腹腔镜脾脏切除术有助缓解患者疼痛程度，减轻对肝功能的影响，降低炎症反应，保护免疫功能，促进患者术后恢复。

     

病毒性心肌炎患者治疗前后血清IL-35水平的变化及其意义

摘要：目的  观察病毒性心肌炎患者治疗前后血清白细胞介素35（IL-35）水平的变化，探讨其在病毒性心肌炎中的临床意义。方法  选取2012年1月-2015年12月在该院心内科住院的病毒性心肌炎患者54例，以及健康体检者54例作为研究对象，将其分为观察组和对照组，测定血清IL-35、心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、白细胞介素17（IL-17）水平。结果  54例患者总有效率为94.4%。治疗前观察组IL-35[（189.34±25.46）ng/L]与对照组[（398.35±24.27）ng/L]比较，差异有统计学意义（P <0.05），观察组cTnI、CK-MB和IL-17水平[（0.45±0.04）μg/L、（34.53±4.37）u/L和（546.57±24.34）pg/ml]与对照组[（0.03±0.01）μg/L、（8.57±1.26）u/L和（183.34±13.26）pg/ml]比较，差异有统计学意义（P <0.05）。观察组治疗后IL-35水平[（366.35± 22.43）ng/L]与治疗前[（189.34±25.46）ng/L]比较，差异有统计学意义（P <0.05），治疗后cTnI、CK-MB和IL-17水平[（0.07±0.02）μg/L、（11.35±1.65）u/L和（276.48±17.46）pg/ml]与治疗前[（0.45±0.04）μg/L、（34.53±4.37）u/L和（546.57±24.35）pg/ml]比较，差异有统计学意义（P <0.05）。治疗前后，男性和女性患者血清IL-35水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）。病毒性心肌炎患者血清IL-35水平与cTnI、CK-MB、IL-17呈负相关（P <0.05）。结论  病毒性心肌炎患者血清IL-35水平下降，经治疗后血清IL-35水平升高，IL-35可能参与病毒性心肌炎的发生、发展过程。

     

子宫颈癌与纤维蛋白原基因多态性的相关性研究

目的  探究在子宫颈癌发病过程中与纤维蛋白原（Fg）β448 G/A基因多态性的相关性。方法  采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性分析的方法对2013年5月-2014年12月初次就诊的汉族子宫颈癌患者141例标本与同期收集的健康汉族女性体检者141例标本的Fgβ448 G/A基因多态性进行基因型分型检测，并对检测结果进行统计分析。结果  ①病例组Fgβ448 G/A基因型频率及等位基因频率与对照组比较，病例组高于对照组（P <0.05）；②A等位基因与子宫颈癌的发生密切相关，③子宫颈癌GG、GA及AA基因型的血浆Fg水平分别是（3.09±0.22）、（3.11±0.26）和（3.31±0.51）g/L，差异无统计学意义（P >0.05）。结论  Fgβ448 G/A基因多态性变化与宫颈癌的发生可能具有相关性。

     

TPPU protects tau from H<Subscript>2</Subscript>O<Subscript>2</Subscript>-induced hyperphosphorylation in HEK293/tau cells by regulating PI3K/AKT/GSK-3β pathway

Neurofibrillary pathology of abnormally hyperphosphorylated tau is a hallmark of Alzheimer’s disease (AD) and other tauopathies. Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt/glycogen synthase kinase-3 beta (GSK-3β) signaling pathway is pivotal for tau phosphorylation. Inhibition of soluble epoxide hydrolase (sEH) metabolism has been shown to effectively increase the accumulation of epoxyeicosatrienoic acids (EETs), which are cytochrome P450 metabolites of arachidonic acid and have been demonstrated to have neuroprotective effects. However, little is known about the role of sEH in tau phosphorylation. The present study investigated the role of a sEH inhibitor, 1-(1-propanoylpiperidin-4-yl)-3-[4-(trifluoromethoxy)phenyl] urea (TPPU), on H₂O₂-induced tau phosphorylation and the underlying signaling pathway in human embryonic kidney 293 (HEK293)/Tau cells. We found that the cell viability was increased after TPPU treatment compared to control in oxidative stress. Western blotting and immunofluorescence results showed that the levels of phosphorylated tau at Thr231 and Ser396 sites were increased in H₂O₂-treated cells but dropped to normal levels after TPPU administration. H₂O₂ induced an obvious decreased phosphorylation of GSK-3β at Ser9, an inactive form of GSK-3β, while there were no changes of phosphorylation of GSK-3β at Tyr216. TPPU pretreatment maintained GSK-3β Ser 9 phosphorylation. Moreover, Western blotting results showed that TPPU upregulated the expression of p-Akt. The protective effects of TPPU were found to be inhibited by wortmannin (WT, a specific PI3K inhibitor). In conclusion, these results suggested that the protective effect of TPPU on H₂O₂-induced oxidative stress is associated with PI3K/Akt/GSK-3β pathway.     

过氧化氢诱导人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的建立

 目的 通过研究不同浓度过氧化氢(H2O2)作用不同时间对人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激水平的影响,确定建立滋养细胞氧化应激模型的条件。 方法 将HTR-8/SVneo用不同浓度(125、250、500 μmol/L) H2O2分别处理不同时间(1、2、4、24 h)后,采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术分析检测细胞内超氧化物阴离子水平以及细胞凋亡情况;紫外分光光度法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量。结果 随H2O2浓度增加及作用时间延长,HTR-8/SVneo细胞存活率逐渐下降,细胞内超氧化物阴离子含量及细胞凋亡率不断增加,细胞培养上清液中SOD活性逐渐降低、LDH含量不断升高。其中在250 μmol/L H2O2作用4 h条件下,SOD活性明显低于对照组(P<0.05),细胞内超氧化物阴离子水平及细胞凋亡率较对照组均显著增加(P<0.05),但LDH漏出量无明显增多(P>0.05),且该条件下细胞有较高的存活率(85.13%)。结论 建立人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的最适条件为250 μmol/L H2O2作用4 h。     

二氮嗪干预氧化应激介导的INS-1细胞KATP通道作用机制的研究

目的研究二氮嗪(diazoxide,DIZ)干预氧化应激对INS-1细胞ATP敏感性钾通道(Adenosine triphosphate-sensitive potassium channels,KATP channels)SUR1亚基基因的表达影响。方法将INS-1细胞株分为:①氧化应激组:将50、100、200、400μmol/L H2O2分别加入各瓶细胞中培养3 h;②二氮嗪干预组:加入50μmol/L二氮嗪培养INS-1细胞30 min后,加入400μmol/L H2O2,继续培养3 h;③牛磺酸干预组:加入1 mmol/L牛磺酸培养INS-1细胞30 min后,加入400μmol/L H2O2,继续培养3 h;④空白对照组:不加二氮嗪、牛磺酸及H2O2,其他培养条件相同。MTT检测氧化应激组细胞存活率、Elisa检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)、Western blot分别检测3组各SUR1亚基蛋白的表达。结果 H2O2处理INS-1细胞3 h与对照组相比较后50μmol/L组细胞存活率(105.27±3.83)%稍升高(P<0.05),200μmol/L组、400μmol/L组细胞存活率分别为68.66%和51.67%均显著降低(P<0.05、P<0.01);与对照组(112.87±9.28)mU/L相比较,50μmol/L H2O2组GSIS量(118.47±10.15)mU/L升高(P<0.05);200μmol/L组(85.79±7.03)mU/L、400μmol/L组(64.59±4.53)mU/L细胞均显著降低(P<0.05,P<0.01);不同浓度H2O2培养INS-1细胞3 h后SUR1亚基蛋白的表达50μmol/L组较正常组有升高(P<0.05),100μmol/L H2O2组较正常组无统计学差异,200、400μmol/L组比对照组明显升高(P<0.05);二氮嗪干预组SUR1亚基蛋白表达比对照组显著升高(P<0.01),牛磺酸干预组与对照组比较无明显升高(P>0.05)。结论低浓度H2O2可以促进细胞增殖与胰岛素分泌,中、高浓度H2O2抑制细胞增殖与胰岛素分泌,二氮嗪抑制细胞KATP通道SUR1亚基的表达,可能是通过抑制线粒体呼吸链电子转运抑制ROS的释放,减轻细胞氧化应激的程度。     

重组人促红细胞生成素对人肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护机制

目的:探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤保护机制。方法:体外培养HK-2细胞,随机分为5组:①正常对照组;②缺血再灌注损伤组;③预先给药组:缺血损伤30min前预先给予rHuEPO;④即时给药组:再灌注损伤5min前给予rHuEPO;⑤延迟给药组:再灌注损伤30min后给予rHuEPO。用AnnexinV/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡;用RT-PCR及Western印迹法分别检测蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA及蛋白活性水平。结果:缺血再灌注诱导细胞损伤后,细胞内Akt(Ser473)、GSK-3β(Ser9)水平下降,Caspase-3基因及蛋白水平均上调,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而Akt、GSK-3β基因水平不变(P>0.05);rHuEPO各干预组与缺血再灌注损伤组相比,细胞内Akt(Ser473)、GSK-3β(Ser9)表达水平上调,Caspase-3基因及蛋白水平均下调,预先给药组调节幅度最大,即时给药组次之,延迟给药组上调幅度最小,差异均有统计学意义(P<0.05);同时预先给药组(9.17%±0.35%)、即时给药组(12.47%±0.86%)和延迟给药组(15.63%±0.75%)细胞凋亡率明显低于缺血再灌注损伤模型组(17.97%±1.06%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:rHuEPO可能通过增强Akt活性,抑制其下游因子GSK-3β蛋白活性,从而抑制其下游凋亡蛋白酶Caspase-3活性的变化,减轻了抗霉素A诱导的人肾小管上皮细胞的缺血再灌注损伤。     

线粒体通透性转换孔在天麻素抗心肌细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨H9c2心肌细胞发生氧化应激损伤时,线粒体膜上的线粒体通透性转换孔（mPTP）在天麻素抗氧化应激损伤的 保护机制中所发挥的作用。方法本实验分为6组：正常组,过氧化氢组,天麻素+过氧化氢组,天麻素组,环孢菌素A组,环孢菌 素A+天麻素+过氧化氢组。通过加入环孢菌素A（mPTP开放剂）观察天麻素的保护作用是否被抑制。用MTT法初步检测各组 细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察细胞早期凋亡率,大鼠三磷酸腺苷（ATP）试剂盒检测ATP的 含量,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）的含量,激光扫描共聚焦显微镜观察Jc-1标记的线粒体膜电位,Western blot 检测细胞内细胞色素C（Cyt C）含量,Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的酶活性。结果环孢菌素A+天麻素+过氧化氢 组线粒体的相对膜电位低于天麻素+过氧化氢组（1.98±0.18 vs 3.08±0.14）,差异有统计学意义（P=0.014）。环孢菌素A可以阻断 氧化应激时天麻素降低细胞内活性氧和相关凋亡因子的含量、抑制相关因子活性的作用（P<0.05）,并且在一定程度上阻断了天 麻素的抗凋亡作用（5.77±0.75）% vs（1.97±0.82）%,两者差异有统计学意义（P<0.001）。结论天麻素可以通过抑制心肌细胞发 生氧化应激损伤时mPTP的开放,最终通过减少凋亡来发挥一定的抗氧化应激损伤的作用。     

I型钠氢交换蛋白调节细胞内酸碱平衡对胃癌细胞迁移、侵袭的影响

目的  观察I型钠氢交换蛋白（NHE1）通过调控胃癌细胞SGC-7901内酸碱值（pH）对其迁移、侵袭的影响。方法  采用共聚焦显微镜观察比较用特异性阻断剂5-（N-乙基-N-异丙基）阿米洛利（EIPA）阻断胃癌细胞SGC-7901的NHE1功能前后胞内pH值的变化,划痕实验观察细胞迁移能力的改变,transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变。结果  共聚焦实验发现对照组细胞内pHi为（7.2±0.12）,EIPA阻断剂组（5μm）为（7.01±0.23）,EIPA阻断剂组细胞内的pH值明显降低（P <0.05）;进一步划痕和侵袭实验证明加入不同浓度的EIPA（5、10和20μmol）后均能有效地抑制胃癌细胞SGC-7901的迁移和侵袭能力（P <0.05,P < 0.01）,并且抑制的程度与EIPA的浓度呈剂量依赖性。结论  阻断NHE1可以降低胃癌细胞pH值,进而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力。