去铁敏阻抑ob/ob小鼠海马脑区的Tau蛋白过度磷酸化

目的研究去铁敏(DFO)对ob/ob小鼠脑内Tau过度磷酸化的影响,以探讨铁沉积是否涉及糖尿病(DM)的神经病理。方法繁育12只6月龄ob/ob小鼠,随机分为DFO组和对照组(n=6),分别给予腹腔注射DFO(100 mg·kg^-1)或空白溶剂15d。采用免疫组织化学和Western blot方法,检测小鼠海马脑区的Tau蛋白磷酸化及其调控蛋白激酶和磷酸酶的表达变化;DAB增强的Perl’s染色检测海马铁离子的分布。结果DFO处理后,ob/ob小鼠海马脑区Tau蛋白无明显变化,而在Ser396和Thr231位点的磷酸化水平降低。相应地,DFO组小鼠脑内蛋白激酶GSK3β和CDK5的活性显著下调,磷酸酶PP2A及其活性上调。另外,DFO组小鼠海马脑区的铁染色强度减弱。结论DFO能够有效改善ob/ob小鼠海马脑区的Tau病理,为揭示铁参与DM诱发的神经病理提供了新证据。     

饥饿、糖尿病和肥胖状态对小鼠肝脏SOCS2基因表达的影响

目的确定小鼠肝脏SOCS2基因在饥饿、糖尿病和肥胖状态下的表达水平,并初步研究SOCS2对糖异生的影响。方法动物分3组:C57BL/6J小鼠、对照组(饱食)和实验组(饥饿24 h);糖尿病模型小鼠db/db及对照小鼠db/m饱食;肥胖模型小鼠ob/ob及其对照C57BL/6J小鼠(饱食)。处死小鼠后提取肝脏RNA做反转录PCR,荧光实时定量PCR检测小鼠肝脏SOCS2及糖异生相关基因在3组小鼠中的表达水平;使用腺病毒表达系统在C57BL/6J小鼠原代肝细胞中过表达SOCS2,Western blot检测SOCS2蛋白的表达,葡萄糖生成实验检测糖输出。结果饥饿使C57BL/6J小鼠肝脏中SOCS2 mRNA水平下调,db/db和ob/ob小鼠肝脏SOCS2基因表达比其对照小鼠均明显下降(P0.05),调节糖异生的关键基因PGC-1α、PEPCK和G6Pase的mRNA水平均上升。在C57BL/6J小鼠原代肝细胞中过表达SOCS2,得到大小为Mr 23 000的蛋白,糖输出受到明显抑制。结论初步认定SOCS2可抑制C57BL/6J小鼠原代肝细胞糖异生,可能是治疗糖尿病的一个新靶点。     

硫化氢对烧伤大鼠创面巨噬细胞硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系的影响

目的应用外源性硫化氢(H_2S)干预烧伤大鼠,探讨H_2S对其创面巨噬细胞硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H_2S/CSE)体系的作用。方法取78只健康SD大鼠,随机选取6只大鼠作为正常对照组,其余大鼠(烧伤组)按照随机数字表法又分为4组,0.9%氯化钠溶液组,硫氢化钠(NaHS,体外H_2S供体)组,炔丙基甘氨酸(PPG,H_2S合成酶抑制剂)组,NaHS+PPG组,每组18只。正常对照组不做任何干预,烧伤组大鼠均制成5%TBSA深Ⅱ度烧伤创面,0.9%氯化钠溶液组、NaHS组、PPG组及PPG+NaHS组分别给予每天1次定时腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.002 m L/g、NaHS56μmol/kg、PPG 45 mg/kg及NaHS 56μmol/kg+PPG 45 mg/kg,分别在干预后3、7、14 d处死大鼠,分离、提取并培养创面巨噬细胞(每个时相点随机选取6只大鼠);正常对照组大鼠直接处死,取正常皮肤巨噬细胞培养。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定对烧伤组大鼠创面巨噬细胞(正常对照取组大鼠正常皮肤巨噬细胞)培养上清液中炎H_2S的浓度;采用实时定量PCR检测其巨噬细胞中胱硫醚-γ-裂解酶mRNA(CSEmRNA),多组间数据比较采用单因素方差分析,相同时相点各组间两两比较采用SNK-q检验。结果在干预后3、7、14 d,细胞培养上清液中H_2S的浓度,0.9%氯化钠溶液组、NaHS组、PPG组、NaHS+PPG组组间比较,差异有统计学意义(F=34.657、23.532、15.985,P值均小于0.05);干预后3、7、14 d,NaHS+PPG组[(60.74±1.21)、(54.27±1.15)、(54.27±1.16)μmol/L]与NaHS组[(98.29±1.43)、(91.82±1.26)、(87.93±1.30)μmol/L]比较,差异均有统计学意义(P值均小于0.05),与PPG组[(52.98±1.20)、(54.27±1.02)、(52.98±1.14)μmol/L]比较,差异均无统计学意义(P值均大于0.05)。巨噬细胞中CSEmRNA变化情况,0.9%氯化钠溶液组、NaHS组、PPG组、NaHS+PPG组组间比较,差异有统计学意义(F=8.547、7.162、6.565,P值均小于0.05);在干预后3、7、14 d,NaHS+PPG组(0.195±0.002、0.265±0.004、0.325±0.003)与NaHS组(0.334±0.007、0.329±0.005、0.456±0.002)比较,差异均有统计学意义(P值均小于0.05),与PPG组(0.145±0.001、0.202±0.004、0.245±0.003)比较,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。结论烧伤后大鼠创面巨噬细胞H_2S/CSE体系功能降低。微量的外源性H_2S对巨噬细胞H_2S/CSE体系具有促进作用。PPG能够抑制巨噬细胞内源性H_2S的生成,但不能抑制CSE-mRNA的表达。     

胆固醇代谢障碍影响ob/ob小鼠室管膜下区神经发生

目的 检测胆固醇对ob/ob肥胖小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响，探讨肥胖引起中枢神经系统功能障碍的可能机制。方法 选取4月龄ob/ob和野生型(WT)小鼠各6只，运用细胞增殖抗原(Ki67)和双皮质素(DCX)免疫荧光染色检测ob/ob小鼠侧脑室室管膜下区(SVZ)神经发生水平；分离培养18只4月龄ob/ob和WT小鼠SVZ的NSCs,运用BrdU掺入实验和β-Ⅲ-微管蛋白(Tuj1)免疫荧光染色检测NSCs的自我更新和分化能力。运用基质辅助激光解飞行时间质谱(MALDI-MS)分别检测3只ob/ob和WT小鼠脑组织的脂质分布，并分析胆固醇(ST)含量和胆固醇合成相关基因的表达变化。体外培养15只WT新生鼠(P0)SVZ的NSCs,并通过电穿孔法转染胆固醇合成限速酶3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A还原酶(Hmgcr)的小干扰RNA(siRNA),验证敲减效率，并通过BrdU掺入实验和Tuj1免疫荧光染色检测Hmgcr基因敲减对NSCs的影响。结果 与WT小鼠相比，ob/ob小鼠SVZ部位Ki67⁺和DCX⁺细胞数量均显著下降(...     

生肌玉红胶原海绵修复创面损伤

背景：生肌玉红胶原海绵能显著促进创面愈合。 目的：观察生肌玉红胶原海绵对兔皮肤创面愈合的影响。 方法：在新西兰白兔背部制造3处全层皮肤缺损创面,分别以生肌玉红胶原海绵、贝复剂(重组碱性成纤维细胞生长因子外用溶液)、生理盐水修复。观察各组创面愈合时间、创面愈合率,检测创面修复组织内成纤维细胞数、血红素氧化酶1、转化生长因子β1 mRNA与蛋白及增殖细胞核抗原蛋白表达。 结果与结论：与贝复剂、生理盐水比较,生肌玉红胶原海绵可显著促进成纤维细胞增殖(P < 0.05),增加创面血红素氧化酶1、转化生子因子β1及增殖细胞核抗原的表达(P < 0.05),提高创面愈合率(P < 0.05),缩短创面愈合时间(P < 0.05)。证实生肌玉红胶原海绵能够促进创面修复,其作用机制可能是通过提高创面血红素氧化酶1、转化生长因子β1表达促进细胞增殖,增加成纤维细胞等创面修复细胞。     

β淀粉样蛋白及代谢酶类在阿尔茨海默病和糖尿病模型小鼠脑内的表达

目的观察阿尔茨海默病(AD)和糖尿病模型小鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)及代谢相关酶类的表达情况,以便从分子水平找到糖尿病并发AD的实验室依据。方法 5月龄双转基因痴呆症模型小鼠(APP/PS1双转基因小鼠)、ob/ob T2DM肥胖模型小鼠和野生型C57BL/6J小鼠为对照,分别用免疫组化染色、ELISA和Western blot检测脑内老年斑(SP)、Aβ含量及Aβ代谢酶类的表达情况。结果 APP/PS1小鼠大脑皮质及海马均可见一定数量的SP;ob/ob小鼠大脑皮质内偶可见SP,而对照组未见SP。与对照小鼠相比,APP/PS1与ob/ob小鼠脑内Aβ40、Aβ42的含量明显升高(P0.05);但APP/PS1小鼠脑内Aβ水平显著高于ob/ob小鼠(P0.05)。APP在APP/PS1小鼠脑内的表达显著高于其他两组小鼠;在ob/ob小鼠脑内的表达要强于对照小鼠(P0.05)。Aβ生成的关键酶BACE1在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著高于对照小鼠(P0.05),但其在APP/PS1小鼠脑内的表达要强于ob/ob小鼠(P0.05)。Aβ降解的关键酶IDE在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著低于对照小鼠(P0.05),且在ob/ob小鼠脑内表达最低。结论 Aβ生成与降解的异常以及其异常聚集沉积不仅发生在早期AD脑内,同时也发生在T2DM脑内,提示Aβ过表达可能是促进2型糖尿病并发AD的重要原因之一。     

外源性硫化氢对APP/PS1小鼠tau蛋白磷酸化及对PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响

目的探讨外源性硫化氢(H2S)对APP/PS1转基因小鼠海马区tau蛋白磷酸化及对PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响。方法将7月龄APP/PS1小鼠20只,随机分为模型组及硫氢化钠(NaHS)组,每组10只;另取同龄C57BL/6小鼠作为对照组,连续腹腔注射NaHS共6周,每天1次。HE染色检测脑组织病理学改变;TUNEL检测小鼠海马区神经细胞凋亡情况;Morris水迷宫检测各组小鼠的学习与记忆能力;免疫组化检测各组小鼠海马区tau、p-tau(Ser-202)、p-tau(Thr-231)及p-tau(Ser-396)蛋白表达情况;Western blot检测PI3K、Akt、GSK-3β、p-Akt及p-GSK-3β蛋白的表达。结果与模型组相比,NaHS组小鼠脑组织病理损伤明显改善;小鼠海马区神经细胞凋亡数量明显降低;小鼠逃避潜伏期明显缩短,单位时间内目标象限停留时间延长,穿台次数增加;p-tau(Ser-202)、p-tau(Thr-231)及p-tau(Ser-396)蛋白表达明显降低;同时,PI3K、p-Akt蛋白水平增加,而p-GSK-3β蛋白水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 NaHS可减少神经细胞凋亡,抑制tau蛋白磷酸化,改善学习记忆能力,其机制可能与调控PI3K/Akt/GSK-3β信号通路活性有关。     

硫化氢对糖尿病大鼠ED的影响和机制研究

 目的：观察硫化氢（H 2S）对糖尿病（DM）大鼠勃起功能障碍（ED）的影响。方法：将70只SD雄性大鼠分为2组，60只腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立DM大鼠模型，10只注射生理盐水为正常对照。阿朴吗啡诱导勃起后检测DM造模成功大鼠的勃起功能情况，将存在ED的36只大鼠随机分成3组：糖尿病对照组（DM组）、糖尿病+硫氢化钠组（DM+NaHS组）和糖尿病+西地那非组（DM+sildenafil组）。DM+NaHS组每天腹腔注射NaHS （50 μmol/kg），DM+sildenafil组每天给予西地那非（5 mg/kg）灌胃，DM组每日腹腔注射生理盐水，注射体积为0.25 mL。持续饲养12周后，观察各组大鼠勃起功能情况，采集各组大鼠动脉血，测定血液中H 2S含量及各组阴茎海绵体组织胱硫醚γ-裂解酶（cystathionine γ-lyase, CSE）活性及CSE表达水平。结果：STZ诱发的DM造模成功率为81.7%（49/60），DM大鼠发生ED的比例为73.5%（36/49），与DM组比，DM+NaHS组和DM+sidenafil组大鼠勃起功能良好，3个实验组大鼠勃起率分别为(33.3±5.5)%、（54.5±5.3）%和(63.6±9.1)%。与正常大鼠组比，各组DM大鼠阴茎海绵体中CSE活性与表达水平均有下降，其中DM+NaHS组大鼠的CSE活性及表达水平显著低于DM组（P<0.05）和DM+sildenafil组（P<0.05）。结论：STZ诱导的糖尿病大鼠中ED发生率较高，H 2S对糖尿病合并ED大鼠勃起功能有一定的促进作用。外源性给予H 2S可以反馈性抑制大鼠阴茎组织中CSE的活性和表达。     

硫化氢对柯萨奇病毒感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用

目的研究硫化氢对柯萨奇病毒B3（Coxsachievirus B3, CVB3）感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用以及胱硫醚γ-裂解酶（ CSE）/硫化氢（ H2 S）通路在其体内的表达情况。方法将110只5周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为4组：正常对照组、病毒性心肌炎组、硫氢化钠（外源性H2 S供体）组和DL-炔丙基甘氨酸（ PAG,CSE不可逆抑制剂）组。以腹腔注射CVB3建立急性病毒性心肌炎模型,接种当天记为第0天,24 h后每组每日经腹腔分别注射相应干预药物。分别于接种后第4天和第10天从各组随机抽取10只处死,留取血清和心肌标本。观察心肌炎症病理改变,酶联免疫吸附法检测H2 S及IL-6、TNF-α等炎症因子含量,逆转录-聚合酶链反应法检测心肌组织CVB3、CSE的mRNA表达水平,免疫组化及蛋白质印迹法定性、定量检测CSE蛋白水平表达。结果与正常对照组比较,病毒性心肌炎组血清和组织H2 S浓度、CSE mRNA、CSE蛋白水平表达均明显下调,给予NaHS干预可明显上调H2 S水平,减轻心肌损伤、减轻炎症细胞浸润以及间质水肿,对病毒CVB3 mRNA的表达有抑制作用,而给予PAG干预,可明显抑制H2 S和CSE表达,加重心肌损伤、炎症细胞浸润及间质水肿,促进CVB3 mRNA的复制。结论在病毒性心肌炎中,CSE/H2 S通路表达明显受到抑制,给予PAG干预可明显抑制该通路的表达,加重心肌损伤,促进病毒复制,外源性供给硫化氢可对感染心肌起到保护作用,且可抑制病毒复制。     

回阳生肌汤对糖尿病小鼠皮肤创面愈合及单核巨噬细胞表型转化的影响

目的:探讨回阳生肌汤对糖尿病小鼠创面愈合的作用及可能的机制。方法:10只db/m小鼠为空白对照组,30只db/db糖尿病小鼠随机分为模型组、回阳生肌汤组和重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)组;各组小鼠在造模前称重、检测血糖,背部全层皮肤切除直径为6 mm的创面,外用药物贴敷,隔天换药,创面拍照并计算创面面积。造模7 d后取小鼠背部皮肤组织,采用苏木素-伊红染色观察组织病理学改变;多重免疫荧光染色检测创面组织促炎型(M1型)和抗炎型(M2型)巨噬细胞的数量;蛋白芯片技术检测M1型和M2型巨噬细胞相关蛋白的表达水平;流式细胞术检测小鼠骨髓和血液中总单核细胞、抗炎型单核细胞(Ly6C~(low/-))和促炎型单核细胞(Ly6C~(hi/+))占总活细胞的比例。结果:db/db小鼠体重和血糖显著高于db/m小鼠(P0.01)。与模型组相比,回阳生肌汤干预可显著提高db/db小鼠创面愈合率(P0.01),促进肉芽组织新生,丰富成纤维细胞和血管。多重免疫荧光染色显示,与模型组相比,回阳生肌汤组M1型巨噬细胞数量减少,M2型巨噬细胞增多(P0.01)。蛋白因子芯片结果显示,回阳生肌汤能抑制白细胞介素1β(IL-1β)、IL-1α、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肿瘤坏死因子受体Ⅱ(TNF-RII)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达(P0.05或P0.01)。流式细胞术结果显示,与模型组相比,回阳生肌汤组骨髓总单核细胞和Ly6C~(low/-)单核细胞比例升高,Ly6C~(hi/+)单核细胞比例下降(P0.05或P0.01),血液中总单核细胞和Ly6C~(hi/+)单核细胞比例下降,Ly6C~(low/-)单核细胞比例升高(P0.01)。结论:db/db糖尿病小鼠血糖升高,创面愈合迟缓;回阳生肌汤可提高db/db糖尿病小鼠创面愈合率,减轻创面炎症反应,其机制可能是调节骨髓和血液中Ly6C~(low/-)/Ly6C~(hi/+)单核细胞平衡,抑制Ly6C~(hi/+)促炎型单核细胞向创面局部募集,促进Ly6C~(low/-)抗炎型单核细胞募集,从而减少创面中血液来源的M1型巨噬细胞,增加M2型巨噬细胞。     

外源性硫化氢减轻小鼠阻塞性肾损伤

目的:探讨外源性硫化氢(H2S)在小鼠阻塞性肾损伤中的保护作用及可能机制。方法:将8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、手术组和H2S组,每组5只,单侧输尿管结扎(UUO)构建肾阻塞模型,H_2S组小鼠腹腔注射H_2S供体硫氢化钠(Na HS),手术组和假手术组小鼠注射等体积的生理盐水,每天1次。7 d后处死小鼠,取出肾脏,提取RNA行RT-PCR检测3组小鼠肾脏内源性H_2S催化酶mRNA表达的差异;组织HE染色观察3组小鼠肾脏的组织结构的变化;Masson染色检测3组小鼠肾脏纤维化的差异;检测血浆胱抑素C含量来反映肾小球滤过能力;Western blot检测LC3、beclin-1和纤连蛋白(FN)蛋白表达的变化。结果:与假手术组相比,手术组小鼠肾脏中胱硫醚β-合成酶(CBS)、胱硫醚γ-裂解酶(CSE)和3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-MST)的mRNA表达显著降低,胶原纤维显著增多,而H_2S组小鼠肾组织胶原纤维又比模型组显著减少。与假手术组相比,手术组小鼠肾脏中FN的蛋白表达显著升高,而H_2S组小鼠的FN表达量比手术组小鼠显著降低;与假手术组相比,手术组和H_2S组小鼠肾组织细胞中LC3-II和beclin-1蛋白表达均显著增高,而H_2S组小鼠肾组织细胞中LC3-II和beclin-1蛋白表达又显著高于手术组。结论:外源性H_2S可能通过上调细胞自噬而减轻UUO小鼠的肾纤维化。     

杏仁核脑区硫化氢对创伤后应激障碍模型大鼠抑郁样行为的影响

目的:探讨创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)大鼠抑郁样行为改变及杏仁核内胱硫醚β-合成酶(cystathionineβ-synthase,CBS)/硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)水平的变化,并研究补充H_2S对大鼠抑郁样行为的作用及机制。方法:应用连续单一应激方案制备PTSD动物模型,用强迫游泳实验和糖水偏好实验检测大鼠抑郁样行为,用Western blot技术和亚甲基蓝法检测杏仁核CBS/H_2S体系含量,用整体细胞外电生理方法记录杏仁核神经元放电情况。结果:与正常对照组比较,PTSD组大鼠强迫游泳不动时间显著延长(P0.01),糖水偏好率显著降低(P0.01);杏仁核脑区的CBS/H_2S体系含量显著降低(P0.01)。与PTSD组比较,PTSD+硫氢化钠组大鼠强迫游泳不动时间显著减少(P0.01),糖水偏好率显著升高(P0.01)。微量压力注射L-半胱氨酸使杏仁核神经元自发放电频率显著升高(P0.01)。结论:PTSD大鼠通过抑制杏仁核CBS/H_2S体系导致抑郁样行为加重。H_2S拮抗PTSD大鼠抑郁样行为的机制可能与其增加杏仁核神经元放电频率和兴奋性有关。     

硫化氢通过抑制自噬减轻心脏停搏后脑损伤

 目的: 观察硫化氢在心肺复苏后脑保护中的作用,并探讨其对神经元细胞自噬的影响。方法: 窒息法建立大鼠心脏停搏模型。72只雄性Wistar大鼠随机分为假手术(sham)组、模型(model)组和硫氢化钠(NaHS)组。自主循环恢复(ROSC)后2 h、4 h、12 h和24 h用Western blot方法检测神经元自噬标志物beclin-1的表达和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的转换;ROSC后12 h,用免疫组化方法观察LC3颗粒的表达;透射电镜观察神经元自噬现象;ROSC后72 h,TUNEL染色计数顶叶皮层凋亡神经元。ROSC后24 h、48 h和72 h行神经功能缺损评分(NDS)评价神经功能。结果: ROSC后2 h、4 h、12 h和24 h,model组自噬标志物beclin- 1的表达持续增加,而NaHS组beclin-1的表达先增加,然后逐渐降低(P < 0.05)。自噬标志物LC3 II/I的表达也是同样趋势。免疫组化显示,ROSC后12 h,model组神经元胞浆和胞核LC3颗粒的比例较NaHS组明显增多(P < 0.05)。电镜显示,model组自噬泡明显多于NaHS组及sham组(P < 0.05)。TUNEL染色显示,ROSC后72 h凋亡神经元数量model组明显多于NaHS组及sham组(P < 0.05)。NDS评分显示,NaHS组在各时点神经功能优于model组(P < 0.05)。结论: 硫化氢可以抑制心脏停搏模型大鼠ROSC后神经元自噬,减少神经元凋亡,改善神经功能。     

硫化氢对肠缺血再灌注损伤大鼠回肠上皮细胞凋亡的影响

 目的: 探讨硫化氢(H₂S)对大鼠缺血再灌注(I/R)损伤回肠上皮细胞线粒体形态和功能及凋亡的影响。方法: 24只雄性Wistar大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组和I/R+NaHS组。建立大鼠肠I/R损伤模型。在灌注前10 min时经I/R+NaHS组大鼠尾静脉注入100 μmol/kg NaHS后按1 mg·kg^-1·h^-1输注直到再灌注2 h,实验结束后取回肠标本测定回肠上皮细胞形态和呼吸功能指标。敏感硫电极法测定血浆H₂S含量。RT-PCR检测回肠组织Bcl-2和Bax mRNA表达,Western blot 检测总caspase-3、活化型caspase-3、细胞色素C(Cyt C)、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果: I/R组线粒体的面积、体积密度、最大直径、最小直径、等效直径以及活化型caspase-3、Cyt C和Bax表达均显著大于I/R+NaHS和sham组(P<0.01)。I/R组线粒体数量、周长、比表面、面积密度和粒子数密度、血浆H₂S、R₃、R₄、RCR、P/O和Bcl-2表达均显著小于I/R+NaHS和sham组(P<0.01)。结论: 硫化氢下调活化型caspase-3、Cyt C和Bax的蛋白水平,上调Bcl-2表达,对I/R损伤大鼠回肠上皮细胞线粒体形态和功能均有保护作用。     

外源性硫化氢对肝细胞NLRP3炎症小体的影响

目的:研究外源性硫化氢(H_2S)对人肝细胞NLRP3炎症小体的影响。方法:采用不同浓度的脂多糖(LPS)诱导人肝细胞L02和SMMC-7721建立炎症模型,Western blot检测细胞中NLRP3炎症小体的表达并结合细胞毒性实验(MTT法)确定合适的LPS浓度。细胞分为4组:对照组用普通培养基培养18.5 h;LPS组用普通培养基培养0.5 h后,再用100μg/L LPS刺激18 h;LPS+H_2S组和H_2S组用200μmol/L硫氢化钠(Na HS)刺激0.5 h后,再分别用100μg/L LPS和普通培养基培养18 h。各组处理后分别收集细胞,Western blot检测细胞中NLRP3和caspase-1的蛋白表达量。结果:与对照组相比,LPS组细胞内NLRP3和caspase-1的表达增加(P0.05),H_2S组细胞内的NLRP3和caspase-1表达无明显变化;与LPS组相比,LPS+H_2S组细胞内的NLRP3和caspase-1表达减少(P0.05)。结论:外源性H_2S可抑制人肝细胞中NLRP3炎症小体的表达。     

硫化氢对臭氧致小鼠气道炎症的影响

目的:研究硫化氢(H_2S)对臭氧(O_3)暴露所致小鼠气道炎症的影响,并探究其机制。方法:32只C57BL/6小鼠随机分为正常对照(control)组、O_3组、硫氢化钠(NaHS)+O_3组以及NaHS组。第1、3、5天将O_3组和NaHS+O_3组小鼠置于2.14 mg/m~3O_3环境中暴露3 h,同时control组和NaHS组置于新鲜空气中暴露3 h。每次暴露前30 min,NaHS+O_3组和Na HS组小鼠腹腔注射Na HS(14μmol/kg)。末次暴露24 h后测定小鼠气道反应性,收集支气管肺泡灌洗液用于炎性细胞计数和总蛋白测定,收集肺组织标本行HE染色观察形态改变。测定肺组织中IL-6、IL-8、丙二醛(MDA)和NF-κB p65蛋白水平。结果:与control组相比,O_3组的气道反应性、炎性细胞数、总蛋白浓度和炎症评分,以及IL-6、IL-8、MDA和NF-κB p65蛋白水平明显增高,NaHS+O_3组则明显低于O_3组。结论:H_2S显著减轻了O_3暴露所致气道炎症反应,可能与抑制脂质过氧化和降低NF-κB表达相关。     

H2S通过MAPK信号通路影响缺血再灌注损伤大鼠回肠上皮细胞凋亡

 目的: 建立大鼠肠缺血再灌注(I/R)损伤模型,研究H₂S对I/R损伤大鼠回肠上皮细胞凋亡、MAPK信号通路表达的影响。方法: 30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组、I/R+NaHS组。建立大鼠肠I/R损伤模型。再灌注前10 min时经大鼠尾静脉注入100μmol/kg NaHS,随后按1 mg·kg^-1·h^-1输注直到再灌注2 h。RT-PCR检测回肠组织ERK、JNK和p38MAPK的mRNA表达,Western blot检测回肠组织p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK、p-NF-κB P65的蛋白水平。TUNEL染色检测回肠上皮细胞凋亡。敏感硫电极法测定血、回肠组织匀浆中的H₂S浓度。结果: I/R组的H₂S浓度、ERK、mRNA、p-ERK均低于sham组和I/R+NaHS组,JNK mRNA、p38MAPK mRNA、p-JNK、p-p38MAPK、p-NF-κB P65和凋亡指数高于sham组和I/R+NaHS组。结论: H₂S通过下调ERK的mRNA表达及磷酸化,上调JNK、p38MAPK mRNA的表达,促进JNK、p38MAPK、NF-κB磷酸化,从而减轻I/R损伤大鼠的回肠上皮细胞凋亡。     

外源性H2S干预对O3致哮喘小鼠气道反应性和气道重塑的影响

 目的: 探讨外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H₂S)对臭氧(ozone,O₃)致哮喘小鼠气道反应性和气道重塑的影响。方法: 将15只SPF级C57BL/6雌性小鼠随机分为对照组、O₃组和NaHS+O₃组,每组5只。O₃处理前0.5 h,对照组和O₃组腹腔注射生理盐水,NaHS+O₃组腹腔注射NaHS(H₂S的供体);O₃组和NaHS+O₃组隔天用O₃处理,对照组则呼吸清洁空气。持续4周后无创测定小鼠的气道反应性,随后进行气管环张力测定,通过肺组织HE染色测定支气管基底膜周径(Pbm)和管壁总面积(Wat)并标准化衡量气道重塑程度,并行AB-PAS染色测定肺组织中杯状上皮细胞的变化情况以进一步评价气道重塑程度。结果: 与对照组相比,O₃组小鼠的气道反应性显著增高;NaHS+O₃组明显低于O₃组,但与对照组相比差异无统计学显著性。与对照组相比,O₃组小鼠在乙酰甲胆碱刺激时的气管收缩力显著加大;NaHS+O₃组明显小于O₃组。与对照组相比,O₃组小鼠的支气管壁厚度明显加大;NaHS+O₃组显著小于O₃组但仍大于对照组。与对照组相比,O₃组小鼠肺组织中杯状上皮细胞占气道上皮细胞总面积的百分比显著上升;NaHS+O₃组显著低于O₃组但仍高于对照组。结论: 外源性H₂S对O₃所致哮喘的气道高反应性和气道重塑有缓解与保护作用,有望为临床药物治疗哮喘提供新靶点。     

硫化氢对FeCl_3诱导的小鼠颈动脉血栓模型中凝血和纤溶活性的影响

目的:探讨外源性硫化氢(H_2S)对三氯化铁(FeCl_3)诱导的小鼠颈动脉血栓模型凝血和纤溶活性的影响。方法:本实验分为空白对照组、模型组、不同浓度(12.5、25和50μmol/kg)的硫氢化钠(NaHS,H_2S供体)处理组和30 mg/kg氯吡格雷(clopidogrel,阳性对照)。不同浓度NaHS腹腔注射及硫酸氢氯吡格雷灌胃给药处理3d后,采用10%FeCl_3诱导小鼠颈动脉血栓模型。取各组颈动脉制成冰冻切片后,HE染色观察血栓形成及血管病理变化;对形成的血栓重量进行测量,计算血栓形成抑制率;采用血凝仪检测血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTF)、纤维蛋白原(FIB)和纤维蛋白降解产物(FDP)的变化;ELISA法检测血浆中血栓烷素B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素F_(1α)(6-keto-PGF_(1α))和纤溶酶原活化抑制剂(PAI)的含量。结果:与模型组相比,NaHS剂量依赖性地抑制小鼠颈动脉血栓的形成;NaHS处理可延长血栓模型中PT和APTT,减少FIB含量,增加FDP含量;NaHS处理能够降低颈动脉血栓模型中TXB_2及PAI含量,恢复6-keto-PGF_(1α)含量,并且6-keto-PGF_(1α)/TXB_2与血栓重量呈负相关。结论:硫化氢通过抑制机体凝血功能并激活纤溶活性而抑制FeCl_3诱导的颈动脉血栓形成。     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及PPARγ、NF-κB表达的影响

目的:初步探讨硫化氢(H2S)对糖尿病心肌纤维化的影响及其作用机制。方法:采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射的方法制作大鼠糖尿病模型,以硫氢化钠作为外源性H2S供体。将40只雄性SD大鼠随机分为对照组、STZ组、STZ+H2S组及H2S组,每组各10只。8周后处死大鼠,HE染色及VG染色观察心肌胶原分布情况,并用图像分析系统测量心肌间质胶原容积分数。Western blotting观察大鼠心肌组织中Ⅰ型胶原、PPARγ和NF-κB的表达水平。结果:与对照组相比,STZ组大鼠心肌组织胶原纤维明显增多,Ⅰ型胶原表达水平明显升高(P0.05),PPARγ表达明显减少(P0.05),NF-κB蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与STZ组相比,STZ+H2S组心肌胶原纤维较少,Ⅰ型胶原表达明显降低(P0.05),PPARγ表达显著上调(P0.05),NF-κB蛋白表达显著降低(P0.05),而H2S组大鼠心肌组织Ⅰ型胶原、PPARγ以及和NF-κB蛋白表达水平较对照组均无显著差异。结论:硫化氢可改善糖尿病心肌纤维化,其内在机制可能与PPARγ-NF-κB途径有关。