NLRP3炎症小体及其下游分子在幽门螺杆菌感染小鼠的表达

目的 研究NLRP3炎症小体信号通路相关分子在幽门螺杆菌(H.pylori)感染C57BL/6小鼠胃组织和血清中的表达情况,初步探讨NLRP3炎症小体信号通路在H.pylori致病中的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为H.pylori感染组和PBS对照组,于感染后不同时间点处死小鼠,RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3炎症小体和下游信号通路分子mRNA表达,Western blot法检测小鼠胃组织中caspase-1蛋白表达,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-33含量.结果 与对照组相比,H.pylori感染组小鼠胃黏膜均呈慢性炎症改变,且随时间延长,炎症程度逐渐加重.NLRP3炎症小体信号通路相关分子mRNA及caspase-1蛋白表达水平显著升高,血清中IL-1β、IL-18、IL-33的含量均显著增高.结论 H.pyori感染可以激活NLRP3炎症小体信号通路.     

SO_2衍生物通过NLRP3炎症小体促进气道上皮细胞炎症发生

目的:观察二氧化硫(SO_2)衍生物亚硫酸钠和亚硫酸氢钠对支气管上皮细胞NLRP3炎症小体活化的影响。方法:使用不同浓度的SO_2衍生物作用于支气管上皮细胞16HBE,通过流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成,Western blot检测细胞内NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)的分泌水平,结合细胞毒性实验(MTT)确定2 mmol/L为SO_2衍生物的实验浓度。采用RNA干扰技术沉默16HEB细胞NLRP3基因及ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理16HBE细胞,通过流式细胞术检测细胞内ROS, Western blot和ELISA分别检测NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及IL-1β分泌水平。结果:与对照组比较, 2 mmol/L和4 mmol/L SO_2衍生物组细胞内ROS水平、 NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及细胞上清液中IL-1β水平明显升高(P0.05)。与2 mmol/L SO_2衍生物组比较,NLRP3 siRNA组细胞内的NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平明显降低(P0.05),且细胞上清液中IL-1β的浓度明显下降(P0.05),ROS无明显变化;NAC组NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平及IL-1β浓度均明显下降(P0.05)。结论:SO_2衍生物激活支气管上皮细胞NLRP3炎症小体,促进IL-1β生成。     

TLR4/NLRP3炎症复合体介导对比剂诱导的肾小管上皮细胞炎症和损伤

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症复合体是否介导了对比剂(CM)引起的肾小管上皮细胞炎症和损伤。方法:本研究运用碘普罗胺作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E建立损伤模型。应用CCK-8法测定细胞存活率;Western blot测定TLR4、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平;ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的水平;Hoechst 33258核染色法检测凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位。用小干扰RNA沉默NLRP3表达。结果:CM可降低NRK-52E细胞的存活率并上调cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05);此外,CM可上调细胞TLR4/NLRP3炎症复合体的表达并促进炎症因子IL-1β和IL-18的分泌(P0.05)。沉默NLRP3可以对抗CM诱导的炎症因子分泌;TLR4抑制剂TAK-242及沉默NLRP3能减轻CM引起的细胞凋亡和线粒体功能损伤。结论:TLR4/NLRP3炎症复合体参与了CM致急性肾损伤的发病机制,并介导了CM诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症。     

肺炎支原体经ROS激活NLRP3炎性体诱导RAW264.7细胞分泌IL-1β

 目的: 观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)促进NLRP3炎性体的活化及下游促炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)的表达是否与活性氧簇(ROS)有关。方法: 预先用5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理RAW264.7细胞30 min,用10 MOI Mp分别感染RAW264.7细胞4、8、16和24 h。流式细胞术检测细胞内ROS水平;real-time PCR法检测细胞NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达;Western blot 法检测NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平;ELISA法检测细胞上清液IL-1β的分泌水平。结果: 与正常组比较,感染后4、8、16和24 h模型组ROS生成显著增加(P< 0.01);感染后8、16和24 h模型组NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达显著增加 (P<0.01),感染后16和24 h NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平上调(P<0.01),感染后24 h 细胞上清液IL-1β含量显著增加(P< 0.01);与模型组比较,NAC组在上述相应时点ROS生成降低,NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达下调,蛋白水平下降,细胞上清液IL-1β的含量减少。结论: Mp可能通过刺激RAW264.7细胞生成ROS而激活NLRP3炎性体。     

幽门螺杆菌空泡毒素VacA促进胃上皮细胞NLRP3炎性小体激活

目的探究H. pylori空泡毒素VacA对胃上皮细胞NLRP3炎性小体激活的影响。方法采用WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695感染AGS细胞,Western blotting、q RT-PCR、ELISA检测NLRP3、Pro-Caspase-1、Caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β的表达。siRNA-NC、siRNA-NLRP3转染AGS后,分别用PBS、WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695刺激,qRT-PCR和细胞因子ELISA检测试剂盒分别检测pro-IL-1β的mRNA表达水平和IL-1β的蛋白表达水平。收集慢性胃炎患者标本,鉴别出H. pylori阳性患者的VacA基因型(s1m1型和s1m2型),通过q RT-PCR检测NLRP3、caspase-1、pro-IL-1β的mRNA表达水平及采用细胞因子ELISA试剂盒检测IL-1β蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射DMSO或者DMSO+Mcc950,H. pylori菌液灌胃,qRT-PCR和ELISA检测胃组织IL-1β的表达。结果 H.pylori感染AGS细胞,与对照组相比,WT H. pylori26695组IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P0.01);△VacA H. pylori26695组与WT H. pylori26695组相比,IL-1β的m RNA和蛋白表达水平均明显下降(P0.01)。与siRNA-NC组相比,采用WT H. pylori26695和△VacA H. pylori 26695刺激转染siRNA-NLRP3的AGS细胞pro-IL-1β的m RNA水平和IL-1β蛋白表达水平均明显下调(P0.01)。H. pylori阳性患者较阴性患者NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平明显升高(P0.01);与VacA s1m2型患者相比,VacA s1m1型患者NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平显著升高(P0.01),同时IL-1β成熟分泌增加。H. pylori慢性胃炎小鼠动物模型中,与对照组相比,Mcc950组中在WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695灌胃后,pro-IL-1β的mRNA水平和IL-1β蛋白水平表达均明显下调(P0.01)。结论H. pylori空泡毒素VacA能够激活胃上皮细胞NLRP3炎性小体,促进IL-1β的成熟分泌。     

小檗碱通过mtROS-NLRP3通路抑制H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞焦亡北大核心CSCD

目的:探究小檗碱(BBR)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的巨噬细胞焦亡的影响及mtROS-NLRP3通路在其中的调控作用。方法:以巨噬细胞J774A.1为研究对象,设置正常对照组(control组)、模型组(H_(2)O_(2)作用24 h)、BBR干预组(H_(2)O_(2)+BBR作用24 h)和ROS清除剂NAC干预组(H_(2)O_(2)+NAC作用24 h)。流式细胞术检测各组细胞活性氧簇(ROS)的生成,免疫荧光检测ROS与线粒体的共定位情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞NLRP3、IL-1β的基因转录水平,Western blot检测NLRP3蛋白表达量,流式细胞术检测caspase-1的活化及其介导的细胞焦亡率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH的释放量,ELISA检测IL-1β分泌水平。结果:与模型组相比,BBR干预后显著减少了H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞线粒体ROS(mtROS)的生成,下调了NLRP3和IL-1β的基因表达水平,减少了NLRP3蛋白的表达,降低了caspase-1活化水平及其介导的细胞焦亡率,同时减少了细胞上清液中LDH和IL-1β的释放。结论:小檗碱可能通过下调mtROS水平进而抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡以减轻炎症反应。     

鲍曼不动杆菌外膜囊泡诱发人单-核巨噬细胞THP-1的炎性反应

目的 建立超速离心法纯化鲍曼不动杆菌外膜囊泡(OMVs),并探讨OMVs诱发人单核-巨噬细胞THP-1炎性反应能力。方法 大量培养鲍曼不动杆菌标准菌株,从培养液上清中以超速离心法提纯OMVs并以透射电镜观察形态。分别以5和50μg/mL的OMVs与THP-1细胞共培养,RT-qPCR检测NOD样受体家族蛋白(NLRP3)和caspase-1表达量;ELISA检测培养液上清中IL-1β含量;蛋白质印迹法检测细胞自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1表达量;酶促动力学法检测细胞caspase-3酶活性;流式细胞测量术检测细胞活性氧表达量。结果 成功提纯鲍曼不动杆菌OMVs。OMVs可以诱导THP-1细胞NLRP3炎性复合体活化,并增加自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1表达量(P<0.05),以及上调凋亡关键因子caspase-3酶活性(P<0.05)。共培养1 h时,OMVs可以显著上调THP-1细胞活性氧表达(P<0.05)。结论 鲍曼不动杆菌OMVs可以显著活化巨噬细胞NLRP3炎性复合体。     

对甲苯磺酰维达列汀抑制巨噬细胞焦亡和促进其凋亡的研究

目的:探讨对甲苯磺酰维达列汀(PV)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞焦亡和凋亡的影响,及其可能的抗炎机制。方法:MTT法检测RAW264.7的细胞活力;细胞流式术检测RAW264.7细胞的凋亡;Western blot检测caspase-3和caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6浓度;RT-qPCR法检测NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18、caspase-11、caspase-3和Bax mRNA的表达。结果:PV显著抑制LPS刺激的巨噬细胞的活力,且呈剂量依赖性,同时促进RAW264.7巨噬细胞的凋亡(P0.01);显著减少巨噬细胞上清液释放TNF-α、IL-1β和IL-6(P0.01);减少caspase-1并增加caspase-3蛋白的表达(P0.01);下调细胞中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18和caspase-11并上调caspase-3和Bax mRNA的表达(P0.01)。结论:PV可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞发生细胞焦亡并促进其凋亡,使炎症因子释放减少。     

肝细胞内NLRP3炎症体的表达与炎症应答初步研究

目的探讨炎症体(inflammasome)在肝细胞内的表达,明确肝细胞内炎症体是否具有正常的炎症应答功能。方法以肝细胞株L02、HepG2为研究模型,RT-PCR、Real-time PCR检测LPS刺激及未刺激组caspase-1、IL-1β的mRNA的表达水平;Western blot检测NLRP3的表达和各刺激组胞内caspase-1活化;ELISA检测各刺激组上清中IL-1β和IL-18的分泌。结果 L02、HepG2细胞均表达NLRP3炎症体,LPS刺激促进肝细胞内caspase-1、IL-1β表达上调;内源性危险信号ATP能有效活化肝细胞内caspase-1酶原,促进IL-1β和IL-18分泌增加,caspase-1特异性抑制剂能特异性的抑制IL-1β、IL-18的分泌。结论肝实质细胞的NLRP3炎症体对内源性危险信号具有炎症应答功能,在肝内无菌性炎症的启动和维持中可能具有重要促进作用。     

阿托伐他汀通过下调NLRP1炎性体表达抑制IL-1β和IL-18的释放

 目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎性体在阿托伐他汀抑制THP-1巨噬细胞白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)分泌中的作用。方法:用10 μg/L脂多糖诱导THP-1巨噬细胞分泌IL-1β和IL-18,以不同浓度阿托伐他汀(1、10和20 μmol/L)孵育细胞24 h,或以10 μmol/L阿托伐他汀处理细胞不同时间(12、24和48 h),或转染NLRP1 siRNA以沉默细胞内NLRP1的表达。采用RT-PCR检测细胞内NLRP1炎性体mRNA的表达,Western blot检测细胞内NLRP1炎性体蛋白的表达,ELISA检测细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量。结果:阿托伐他汀可抑制THP-1巨噬细胞NLRP1炎性体mRNA和蛋白的表达,且这种效应呈浓度和时间依赖性。转染NLRP1 siRNA后,THP-1巨噬细胞NLRP1的蛋白表达明显下降,且阿托伐他汀对IL-1β和IL-18分泌的抑制作用明显增强。结论:阿托伐他汀通过抑制NLRP1炎性体表达减少巨噬细胞IL-1β和IL-18的释放,发挥抗炎作用,进而延缓动脉粥样硬化进展。     

RIPK2介导自噬对高糖诱导的小鼠肾系膜细胞ROS、caspase-1及IL-1β表达的激活作用

目的观察受体结合丝氨酸/苏氨酸激酶2(RIPK2)介导自噬对高糖诱导的肾系膜细胞(GMCs)ROS、caspase-1及IL-1β表达的调控。方法体外培养正常小鼠GMCs,高糖作为刺激因子,设计siRNA靶向沉默RIPK2表达并构建自噬双荧光(mRFP-GFP-LC3)标记体系,激光共聚焦显微镜观察自噬流变化;DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平;Western blot及RT-PCR检测RIPK2、LC3Ⅱ/Ⅰ、caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达;ELISA检测IL-1β的分泌。结果 1)高糖呈时间-浓度依赖性增加细胞内ROS水平,诱导caspase-1和IL-1β表达(P0.05)。2)短期(0~12 h)高糖刺激可诱导RIPK2和LC3Ⅱ/Ⅰ表达(P0.05),超过12 h后RIPK2和LC3Ⅱ/Ⅰ表达下调(P0.05)。3)siRNA靶向沉默RIPK2下调LC3Ⅱ/Ⅰ表达和细胞自噬流形成,上调细胞内ROS、caspase-1及IL-1β表达(P0.05)。结论 RIPK2介导自噬负性调控高糖诱导的ROS、caspase-1及IL-1β表达,可能是防治糖尿病肾脏疾病(DKD)的新思路。     

丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的小鼠巨噬细胞Dectin-1 / NLRP3 信号通路抑制作用研究

目的:研究丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的巨噬细胞上Dectin-1/NLRP3信号通路的影响。方法:培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并分成空白对照组、β-1,3-葡聚糖诱导模型组、昆布多糖组和丹皮酚组,β-1,3-葡聚糖诱导巨噬细胞24 h建立ALD炎症模型。通过MTT法检测细胞活性,通过倒置显微镜观察各组形态学变化,通过Western blot检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,通过RT-qPCR检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA的表达,通过ELISA检测各组培养液中IL-1β、IL-18的分泌水平。结果:MTT结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖诱导模型组抑制细胞增殖活性减弱。与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,丹皮酚干预后细胞增殖活性增强。形态学观察发现,空白对照组细胞体积小,形态圆润。β-1,3-葡聚糖诱导后细胞体积变大,分化严重,形态狭长。丹皮酚干预后细胞分化减轻,细胞形态近似圆形。Western blot、RT-qPCR和ELISA结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖能显著升高巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。而与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,经丹皮酚干预后可明显降低巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。结论:本研究结果表明丹皮酚可能通过抑制β-1,3-葡聚糖诱导的Dectin-1/NLRP3信号通路上Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的过表达从而有效降低终末炎症因子IL-1β及IL-18的释放,进而有效抑制β-1,3-葡聚糖诱导的ALD炎症反应。     

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-细胞产生IL-1β和IL-18

目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法:用0、3、6、12、24、36μg/ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞,并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞,ELISA检测IL-1β和IL-18的含量;Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平,Western blot鉴定Caspase-1活化状态;分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂(Z-YVADFMK)预处理THP-1细胞30 min后,再用24μg/ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h,ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果:pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg/ml时,IL-1β和IL-18的表达水平最高,分别为491 pg/ml、186 pg/ml;同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18,两者分别在24 h和16 h达到峰值。pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC和Caspase-1 mRNA的表达,促进Caspase-1的活化;NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显著低于对照组(P0.05)。结论:pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。     

虾青素通过抑制活性氧簇/NLRP3炎症小体减轻对比剂引起的大鼠急性肾损伤

目的:研究虾青素(AST)减轻大鼠对比剂急性肾损伤(CI-AKI)的作用并探讨其潜在机制。方法:SD雄性大鼠随机分为5组:空白对照(control)组、虾青素对照(AST)组、模型(CM)组、虾青素治疗(AST+CM)组和N-乙酰半胱氨酸治疗(NAC+CM)组,每组8只。建立大鼠CI-AKI模型72 h后收集血清和肾脏组织,检测大鼠血清肌酐(SCr)水平和血尿素氮(BUN)水平;HE染色观察肾组织病理改变;TUNEL染色检测肾小管上皮细胞凋亡水平;冰冻切片活性氧簇(ROS)染色观察肾组织ROS的生成;免疫组化和Western blot观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、含胱天蛋白酶募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的表达。结果:与control组相比,AST组大鼠的SCr和BUN水平、肾小管上皮细胞凋亡水平、ROS生成及NLRP3、ASC、caspsae-1、IL-1β和IL-18表达水平的差异无统计学显著性(P0.05),而CM组大鼠的SCr和BUN水平、肾小管上皮细胞凋亡水平、ROS生成及NLRP3、ASC、caspsae-1、IL-1β和IL-18表达均显著升高(P0.05)。与CM组相比,AST+CM组和NAC+CM组大鼠的SCr和BUN水平、肾小管上皮细胞凋亡水平、ROS生成及NLRP3、ASC、caspsae-1、IL-1β和IL-18表达均显著降低(P0.05)。结论:虾青素通过抑制肾脏组织ROS的产生,抑制NLRP3炎症小体-IL-1β/IL-18的激活,从而减轻CI-AKI。     

类风湿性关节炎滑膜组织中NLRP3炎性小体及下游因子IL-1β/IL-18的表达及意义

目的检测NLRP3炎性小体及其下游炎性因子IL-1β/IL-18在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者滑膜被覆细胞及滑膜间质中的表达及分布情况,探讨NLRP3炎症复合体在RA免疫调节中的作用机制。方法采用免疫组化EnVision法检测30例RA、10例骨性关节炎(osteoarthritis, OA)患者滑膜被覆细胞及滑膜间质中NLRP3、Caspase-1及其下游炎性因子IL-1β及IL-18的表达。采用Spearman秩相关分析RA患者滑膜组织中NLRP3炎性小体及其下游炎性因子IL-1β/IL-18的表达水平与RA临床和实验室参数的相关性。结果 NLRP3在RA、OA组中的阳性率分别为100.00%和70.00%,Caspase-1在RA、OA组中的阳性率分别为100.00%和50.00%,IL-1β在RA、OA组中的阳性率分别为100.00%和60.00%,IL-18在RA、OA组中的阳性率分别为86.67%和0,NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18在RA和OA组间差异均有统计学意义(P0.05)。IL-1β与RF表达呈显著正相关(P0.05);NLRP3与CRP、RF、Caspase-1及IL-1β表达均呈显著正相关(P0.05),而与IL-18表达无相关性(P0.05)。结论 NLRP3/Caspase-1信号通路因子在RA的发病过程中起重要作用,且与疾病的活动性密切相关。IL-1β的分泌主要是由Caspase-1介导产生,提示抑制NLRP3或Caspase-1可有效下调IL-1β的表达,可能是RA潜在的治疗靶点,具有重要的临床指导意义。     

柯里拉京抑制LPS和ATP激活的NLRP3炎症小体和巨噬细胞焦亡

目的 探讨柯里拉京对细菌脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的巨噬细胞内NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的调控作用和机制。方法 采用CCK8试剂检测不同浓度柯里拉京对J774A.1细胞活力的影响;碘化丙啶(PI)染色和乳酸脱氢酶(LDH)释放检测柯里拉京对LPS+ATP诱导的细胞死亡的影响。Western blot法检测细胞上清液中炎症小体活化标志物caspase-1 p20(M_r20 000)和成熟IL-1β(M_r17 000)的表达水平,以及检测细胞内NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β前体(pro-IL-1β)和焦亡执行蛋白GSDMD的表达。ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平。活性氧(ROS)荧光探针H2DCFDA染色观察柯里拉京对ROS产生的影响。结果 柯里拉京浓度小于40μmol·L^-1时对细胞活性影响较小。柯里拉京减少LPS+ATP刺激的细胞内PI阳性细胞的比例和LDH的释放。柯里拉京抑制LPS+ATP刺激的巨噬细胞内GSDMD蛋白N末端(GSDMD-NT)的表达,以及...     

小白菊内酯通过抑制NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路减轻哮喘幼年大鼠气道炎症

目的 探讨小白菊内酯（PTL）减轻哮喘幼年大鼠气道炎症的作用机制是否与Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)/白介素（IL）-1β信号通路有关。方法 SD幼年大鼠随机分为对照组、卵清蛋白（OVA）组、PTL（低、中、高）剂量组（1、2、4 mg/kg PTL）和PTL+NLRP3激动剂组（4 mg/kg PTL和100 mg/kg尼日利亚菌素钠盐）。OVA致敏与激发构建哮喘模型。测定幼年大鼠气道反应性，分类计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞，检测血清、BALF中IL-1β、IL-18水平，观察肺组织病理学改变，检测肺组织中NLRP3、caspase-1、IL-1βmRNA或蛋白表达。结果 与对照组比较，OVA组幼年大鼠气道阻力，BALF中白细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数量，血清、BALF中IL-1β、IL-18水平，肺组织炎症评分及肺组织中NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）;PTL（低、中、高）剂量组可呈剂量依赖性缓解上述改变；而NLRP3激动剂可减弱PT...     

IL-1β和IL-18在鼠巨细胞病毒播散性感染中的表达及意义

目的:在整体水平观察鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus,MCMV)播散性感染时脏器病毒载量、caspase-1的活化及其下游因子IL-1β和IL-18的表达状况。方法:建立MCMV播散性感染模型,MCMV Smith株接种后第0、3、7和14天各处死4只小鼠;同时设模拟感染小鼠作为对照。标准空斑试验检测唾液腺、肺和肝组织病毒滴度;Western blot法检测脾细胞中procaspase-1及其活化形式caspase-1的表达强度;双抗体夹心ELISA法检测血清IL-1β和IL-18水平;免疫组化法检测唾液腺、肺和肝组织中IL-1β和IL-18表达状况。结果:肝组织病毒滴度于MCMV感染后3天升高,其后迅速减低,感染2周内肺组织中未检测到病毒,而唾液腺组织病毒滴度呈逐渐增高趋势;与模拟感染对照组比较,播散性感染组感染后3天脾细胞中procaspase-1和caspase-1的表达明显升高(相对吸光值均P<0.01);同时,血清IL-1β和IL-18水平升高达峰值(均P<0.01)。结论:MCMV感染后炎性体活化,caspase-1表达升高;其下游信号IL-1β和IL-18成熟释放增加,并呈组织差异性表达。     

X线辐照激活NLRP3炎性体引起损伤肺组织细胞焦亡(pyroptosis)北大核心CSCD

目的建立放射性肺损伤模型,研究胱天蛋白酶1(caspase-1)依赖的程序性细胞死亡即细胞焦亡(pyroptosis)在放射性肺炎发病机制中的作用。方法 BALB/c小鼠胸腔15 Gy X线辐照5 d,处死小鼠。HE染色观察肺组织形态变化,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测辐照后肺组织细胞凋亡情况,Western blot法检测肺组织γ组蛋白2AX(γ-H2AX)、抗原KI-67(ki67)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1和含CARD结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC/TMS-1)的表达情况,实时荧光定量PCR检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的m RNA水平,采用免疫组织化学染色检测肺组织NLRP3、caspase-1和TMS1的表达情况,使用caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1活性;ELISA检测血清IL-1β和IL-18水平。结果辐照后小鼠肺泡壁毛细血管扩张充血,炎性细胞浸润,肺泡壁增厚;肺组织细胞TUNEL染色阳性指数升高,γ-H2AX和ki67的表达增强,提示细胞DNA遭到破坏且细胞增殖活性降低;肺组织细胞中IL-6、IL-8、TNF-α和MCP-1 m RNA水平增加;血清IL-1β和IL-18水平增加,肺组织NLRP3、caspase-1、ASC/TMS-1表达水平增加,caspase-1活性增强。结论辐照后,激活小鼠肺组织NLRP3炎性体诱导肺组织的细胞发生pyroptosis。     

罂粟碱通过HMGB1/NLRP3炎症小体影响非小细胞肺癌A549和H460细胞生物学行为的作用机制

目的 探讨罂粟碱对非小细胞肺癌A549和H460细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,并初步探讨其分子机制.方法 利用罂粟碱处理非小细胞肺癌A549和H460细胞,CCK-8细胞增殖检测试剂盒和平板克隆实验分析罂粟碱对A549和H460细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测罂粟碱对A549和H460细胞凋亡的影响,Transwell小室实验检测罂粟碱对A549和H460细胞迁移能力的影响;Western blot分析罂粟碱对A549和H460细胞HMGB1、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达的影响.结果 与对照组相比,经罂粟碱处理后,A549和H460细胞增殖和迁移能力显著下降,凋亡率明显上升,HMGB1、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平均显著降低.结论 罂粟碱下调HMGB1蛋白表达,影响炎症小体活性,抑制A549和H460细胞增殖和迁移,并诱导凋亡.