ICOS/ICOSL、OX40/OX40L及CD40/CD40L在系统性红斑狼疮患者外周血表达水平及其临床意义

本研究旨在检测SLE患者外周CD4+T细胞表面ICOS、OX40、CD40L及B细胞表面ICOSL、OX40L、CD40分子的表达情况,并探索其临床意义。采用流式细胞术,我们检测SLE患者及健康对照外周CD4+T细胞表面ICOS、OX40、CD40L及B细胞表面ICOSL、OX40L、CD40分子的表达,并分析其与SLE临床指标的相关性。结果显示,SLE患者外周CD4+T细胞上ICOS、OX40、CD40L及B细胞上ICOSL、OX40L、CD40分子的表达均明显高于健康对照组(均P0.05),且SLE患者CD4+T细胞表面ICOS的表达与患者血清IgG水平呈现正相关,B细胞表面ICOSL的表达与患者血清抗dsDNA抗体水平正相关,B细胞表面OX40L的表达与患者血清抗核抗体水平正相关(均P0.05)。上述结果表明SLE患者外周CD4+T细胞上ICOS、OX40、CD40L及B细胞上ICOSL、OX40L、CD40分子均发生上调,并与SLE自身抗体水平呈现正相关,提示分别表达于T细胞和B细胞表面的ICOS/ICOSL、OX40/OX40L及CD40/CD40L分子,通过相互作用参与SLE的致病过程。     

感染伯氏疟原虫小鼠外周血淋巴细胞及其表面分子的检测

为探讨C57BL/6小鼠在感染伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)后外周血中的免疫细胞及其表面分子变化情况,将C57BL/6小鼠分为感染组和对照组(n=5),分别尾静脉注射伯氏疟原虫混悬液和生理盐水;感染第6天(Day 6, D6)处死小鼠,取外周全血并制备免疫细胞悬液;FACS检测小鼠B细胞、T细胞、CD8~+T细胞和NK细胞百分比及其表面分子CXCR3、CD69、CD62L表达水平变化情况。结果显示,疟原虫感染后,小鼠外周血B细胞百分比与对照组相比显著降低[(7.28±0.57)%vs(44.49±4.31)%,P0.01],而T细胞、CD8~+T细胞和NK细胞百分比与对照组相比变化不显著[(33.26±6.65)%vs(35.99±3.45)%、(17.86±5.34)%vs(14.61±3.86)%、(13.32±1.92)%vs(11.75±1.64)%,均P0.05];感染组B细胞和T细胞中CXCR3表达水平显著高于对照组[(10.52±0.65)%vs(5.46±1.59)%、(25.44±5.67)%vs(12.45±0.23)%,均P0.05],而NK细胞中CXCR3表达相比对照组显著降低[(2.33±0.23)%vs(5.42±1.37)%,P0.05],CD8~+T细胞中CXCR3表达水平高于对照组,但差异无统计学意义[(30.13±6.40)%vs(21.29±0.60)%,P0.05];在感染组T细胞、CD8~+T细胞和NK细胞中CD69的表达水平显著高于对照组[(25.89±1.89)%vs(1.68±0.56)%、(20.43±3.91)%vs(2.34±1.05)%、(34.58±1.67)%vs(5.28±1.04)%,均P0.001],而在B细胞中该指标高于对照组,但差异无统计学意义[(38.83±2.24)%vs(15.29±15.12)%,P0.05];在感染组B细胞、T细胞、CD8~+T细胞和NK细胞中CD62L的表达水平相比对照组显著降低[(32.62±5.73)%vs(92.32±0.49)%、(2.60±0.50)%vs(76.33±8.34)%、(1.80±0.51)%vs(88.07±2.63)%、(0.25±0.06)%vs(14.69±2.37)%,均P0.001]。综上,感染组小鼠外周血B细胞减少,B细胞和T细胞CXCR3表达水平升高,而NK细胞表达水平减少,T细胞、CD8~+T细胞和NK细胞高表达CD69,而感染组B细胞、T细胞、CD8~+T细胞和NK细胞低表达CD62L。这提示感染伯氏疟原虫后,小鼠的免疫应答处于低水平,可能机制是下调免疫细胞的CD62L表达水平。     

OX40和OX40L在原发性干燥综合征患者外周血中的表达及临床意义

目的 检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血单个核细胞表面共刺激分子OX40和OX40L的表达,并探讨其临床意义.方法 采用免疫荧光标记流式细胞技术检测51例pSS患者及36例健康志愿者外周血T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L分子表达,比较11例初诊pSS患者治疗前后OX40和OX40L表达水平变化,分析其临床意义.结果 与健康志愿者相比,pSS患者外周血CD4+T细胞表面OX40表达显著增高(8.65％ ±3.51％ vs 5.68％ ±1.68％,P＜0.01),而CD8+T细胞表面OX40的表达无统计学差异.pSS患者表面OX40L的表达,在外周血中CD14+单核细胞(6.76％±3.60％ vs 3.15％±1.89％,P＜0.01)和CD19+B细胞(4.69％ ±2.40％ vs 2.76％ ±1.33％,P＜0.01)中均高于健康志愿者.活动期的pSS患者外周血OX40和OX40L的表达高于非活动期患者,伴发多系统损伤pSS患者外周血OX40和OX40L分子的表达显著高于单纯外分泌腺损伤患者.治疗后CD4+T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L的表达显著下降.结论 pSS患者外周血单个核细胞表面OX40和OX40L异常高表达,且与疾病活动度、组织损伤及治疗密切相关.     

结直肠癌患者与健康受试者外周血CD45RA+/CD45RO+淋巴细胞表型分析

目的 分析结直肠癌患者与健康受试者外周血CD45RA+/CD45RO+系列T淋巴细胞表达的差异.方法 运用流式细胞术(FCM)检测2010年1月至2013年12月解放军总医院收治的109例结直肠癌患者(试验组)与64例健康受试者(对照组)外周血CD45RA+、CD45RO+、CD4+ CD45RA+、CD4+ CD45RO+T淋巴细胞亚群表达情况,统计分析试验组和对照组性别和年龄的分布是否存在差异,然后进一步分析CD45 RA等T淋巴细胞亚群与结直肠癌临床分期的关系.结果Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期结直肠癌患者外周血CD45 RA+细胞百分率[三者分别为(56.23±7.75)％、(58.86±7.66)％和(59.02±9.71)％]明显高于对照组[(48.94±12.66)％],差异具有统计学意义(F=11.128,P＜0.001);Ⅲ期和Ⅳ期患者的CD45RO+细胞百分率[分别为(47.19±8.30)％和(45.41±10.45)％]则明显低于对照组[(53.43±11.75)％],差异具有统计学意义(F=5.817,P=0.00083);Ⅲ期和Ⅳ期患者CD45RA+/CD45RO+的比值(分别为1.32 ±0.46和1.43±0.63)明显高于对照组(1.00±0.47),差异具有统计学意义(F=6.986,P=0.000185);Ⅰ+Ⅱ期患者CD4+ CD45 RO+细胞百分率[(31.37±6.39)％]明显高于对照组[(27.49±7.19)％],差异具有统计学意义(F=2.368,P=0.009);Ⅳ期患者CD4+ CD45RA+/CD4+ CD45RO+的比值(0.66±0.39)明显高于Ⅰ+Ⅱ期的患者(0.49±0.23),差异具有统计学意义(F=1.812,P=0.029);各组之间CD4+ CD45RA+细胞百分率无明显统计学差异(F=0.637,P=0.592).结论 随着临床分期的增加,结直肠癌患者外周血CD45RA+细胞逐渐增加而CD45RO+细胞逐渐减少,反映出结直肠癌患者随着肿瘤的进展其免疫功能逐渐抑制、逐渐降低的动态过程;CD4+ CD45RA+细胞和CD4+ CD45RO+细胞在反映结直肠癌患者机体免疫功能方面不如CD45RA+细胞和CD45RO+细胞敏感.     

PD-L1 在胃癌患者手术前后外周血T 细胞和单核细胞上的表达及意义

目的:检测胃癌患者术前术后外周血细胞表面PD-L1的表达,探讨其表达改变及临床意义。方法:收集44例胃癌患者术前术后和18名健康志愿者外周血标本,流式细胞术检测CD3⁺ CD4⁺ T、CD3⁺ CD8⁺ T 细胞表面PD-1 和PD-L1 以及CD14⁺单核细胞表面PD-L1 的表达。结果:与健康志愿者相比,胃癌患者外周血CD4⁺ T 和CD8⁺ T 细胞表面PD-L1 表达无显著差异[(11.1±6.4)% vs (9.8±5.6)%,P =0.453 2;(13.9±12.0)% vs (12.0±7.1)%,P =0.558 9],而CD14⁺ 单核细胞表面PD-L1 表达水平显著增加[(29.2±16.7)% vs (17.5±9.7)%,P=0.007 3]。但胃癌患者术后CD4+ T 细胞和CD8⁺ T 细胞表面PD-L1 的表达均显著高于术前水平[(15.8±8.2)% vs (11.1±6.4)%,P= 0.001 5;(22.5±13.3)% vs (13.9±12.0)%,P =0.000 2],而术后外周血CD14+单核细胞PD-L1 表达水平并无显著变化[(33.8±17.3)% vs (29.2±16.7)%,P=0.082 8]。同时,胃癌患者手术前后外周血CD4⁺T 和CD8⁺T 细胞表面PD-1的表达无统计学差异[(25.6±9.9)% vs (26.9±8.9)%,P=0.505 5;(26.5±14.6)% vs (29.9±10.4)%,P=0.118 7]。结论:PD-L1 可作为监测原发性胃癌患者的免疫功能和预后评估的有效指标。     

HMGB1在类风湿关节炎疾病活动中的作用及其与EMMPRIN/CD147表达的相关性研究

目的:探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1在类风湿关节炎(RA)病情活动中的作用机制.方法:选取RA患者74例(活动期38例、非活动期36例)及健康对照者26例.采用RT-PCR方法检测外周血单个核细胞(PBMC)中HMGB1 mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测血清中HMGB1蛋白的表达.采用流式细胞术分析CD14+单核细胞表面Toll样受体(TLR)4和EMMPRIN/CD147的表达.结果:活动期RA组HMGB1 mRNA相对表达量和蛋白水平均高于健康对照者和非活动期RA患者[分别为2.63 vs 0.71,0.93和 (10.20±1.24 vs 7.48±1.75,8.31±1.85)ng/ml)](P＜0.01).活动期RA患者CD14+单核细胞上TLR4和CD147的表达量均显著高于非活动期和健康对照组(P＜0.01),非活动期患者显著高于健康对照组(P＜0.01).TLR4和CD147双阳性细胞数量和蛋白的相对表达量在活动期RA患者中均最高.血清中HMGB1蛋白水平与ESR、CRP、RF、及关节X线分期均呈正相关,亦与TLR4和CD147的表达呈正相关(P＜0.05或P＜0.01).结论:RA患者PBMC具有合成和分泌HMGB1蛋白的功能.HMGB1可能通过与TLR4结合激活CD14+单核细胞并表达CD147,促进其向滑膜组织迁移而加速骨质破坏.     

慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Tim-3表达的检测及意义

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单核细胞中T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)的表达及对其炎症因子生成的影响.方法 利用多色流式技术和荧光实时定量PCR(qRT-PCR),分别检测不同状态的CHB患者外周血单核细胞亚群表面Tim-3分子和Tim-3 mRNA表达水平.给予重组人galectin-9和脂多糖(LPS)共刺激CHB活动期患者外周血单核细胞,用ELISA检测培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平.结果 慢乙肝免疫耐受期患者(IT)外周血单核细胞表面Tim-3表达水平显著高于健康对照组(HC)和免疫活动期患者(IA)(P＜0.01),其中IT患者CD14+ CD16-和CD14+ CD16+单核细胞亚群中Tim-3的表达均高于IA患者,差异均有统计学意义.qRT-PCR结果进一步证实IA患者外周血单核细胞中Tim-3 mRNA的表达高于HC (P =0.040).IA患者CD14+单核细胞上Tim-3的表达与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈正相关(r=0.362,P=0.028).重组人galectin-9和LPS共刺激IA患者外周血单核细胞比单独使用LPS刺激分泌更高水平的TNF-α,IL-1,IL-6.结论 CHB患者外周血单核细胞Tim-3表达上调,与血清ALT水平呈正相关,Tim-3/galeetin-9通路能够促进LPS诱导的单核细胞的炎症因子的分泌.     

慢性乙型肝炎患者iNKT细胞PD-1表达的变化

目的检测慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中iNKT细胞比例、细胞因子分泌能力以及其表面程序性死亡因子1(programmed death 1,PD-1)的表达情况。方法采集慢性乙型肝炎患者外周血,利用CD3、TCR Vα24、TCR Vβ11、CD279单克隆抗体标记后经流式细胞术直接检测iNKT细胞比例及其PD-1表达比例;采用PMA+Ionomycin体外活化iNKT细胞后流式细胞术检测其胞内IFN-γ分泌情况。结果慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞比例[(0.09±0.04)%]与健康对照者[(0.11±0.07)%]相比无明显差异,但体外活化后胞内IFN-γ分泌量减少[(24.64±7.71)%vs(42.35±11.60)%],且iNKT细胞PD-1表达升高[(36.7±9.7)%vs(16.2±5.4)%]。结论慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞功能的下降可能与其表面负性刺激分子PD-1表达上调密切相关。     

类风湿性关节炎患者外周血CD3~+CD8~+效应记忆T细胞和滤泡辅助性T细胞ICOS、 PD-1表达上调且与病情相关

目的研究类风湿性关节炎(RA)患者外周血T淋巴细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)和可诱导共刺激分子(ICOS)的表达,并确定其与疾病活动度之间的关系。方法募集RA患者30例、健康对照26例。流式细胞术检测外周血CD3~+CD8~+的效应记忆T细胞(Tem)和滤泡辅助性T(Tfh)细胞比例,而后检测淋巴细胞亚群中PD-1和ICOS阳性的细胞比例;通过Spearman相关性分析评估其与28个关节疾病活动度评分(DAS28)之间的相关性。结果与健康对照组相比, RA组患者外周血Tem和Tfh细胞绝对数增高, Tem和Tfh细胞的ICOS与PD-1表达增加; RA组患者外周血CD3~+CD8~+ Tem和Tfh细胞ICOS和PD-1表达水平与DAS28之间呈正相关。结论外周血CD3~+CD8~+ Tem和Tfh细胞PD-1和ICOS可能参与RA的发生发展,并可能作为RA活动度的评价指标。     

过敏性哮喘患者外周血CXCR5~+CD4~+T细胞的变化及其细胞因子表达研究

本研究旨在探讨过敏性哮喘患者外周血CXCR5~+CD4~+T细胞数量、表型变化及其细胞因子的分布特征。选取25例过敏性哮喘患者、25例非过敏性哮喘患者及27例性别和年龄相匹配的健康对照作为研究对象,流式细胞术检测外周血中CXCR5~+CD4~+T细胞数量及表型,胞内细胞因子染色方法检测细胞因子分布情况。结果显示过敏性哮喘和非过敏性哮喘组外周血CXCR5~+CD4~+T细胞比例均高于健康组[(19.24±5.39)vs(8.24±1.68),P0.01;(17.79±4.01)vs(8.24±1.68),P0.01],而患病两组间无明显差异(P0.05)。患病两组患者外周血CXCR5~+CD4~+T细胞表面PD-1[(15.82±2.71)vs(7.64±1.87),P0.01;(14.28±3.68)vs(7.64±1.87),P0.01]、ICOS[(9.82±2.27)vs(4.98±1.76),P0.01;(10.53±2.08)vs(4.98±1.76),P0.01]表达均高于健康组,而患病两组间差异无统计学意义(P0.05)。患病两组CXCR5~+CD4~+T细胞胞内IL-21的表达均显著高于正常对照组(P0.01)。而CXCR5~+CD4~+T细胞胞内IL-4仅在过敏性哮喘患者中高表达(P0.01)。CXCR5~+CD4~+T细胞胞内IL-17、IFN-γ的表达在三组之间无差异(P0.05)。过敏性哮喘组患者IL-4+CXCR5~+CD4~+T细胞、IL-21+CXCR5~+CD4~+T细胞比例与血清总IgE水平呈正相关(r=0.652,P=0.003;r=0.523,P=0.021)。研究结果表明过敏性哮喘和非过敏性哮喘两种表型哮喘在外周血CXCR5~+CD4~+T细胞数量、表型上未见差异,一群高表达IL-4的CXCR5~+CD4~+T细胞可能在过敏性哮喘疾病机制中具有重要意义。     

HMGB1及TLR2、TLR4在类风湿关节炎中的表达及意义

 目的 探讨HMGB1及TLR2、TLR4在类风湿关节炎患者中的表达。方法 选取活动期类风湿关节炎患者29例,非活动期20例及对照者18例。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清HMGB1表达,用多色免疫荧光流式细胞术（FCM）检测外周血单核细胞表面TLR2和TLR4的表达率和蛋白相对含量。结果 活动期RA患者血清HMGB1含量和外周血CD14+单核细胞表面TLR2、TLR4的表达率及蛋白相对含量明显高于非活动期和对照者;非活动期RA患者TLR4显著高于对照组。活动期RA患者血清HMGB1与外周血CD14+单核细胞表面TLR2、TLR4相对蛋白含量表达呈显著正相关。结论 RA患者血清HMGB1及外周血单核细胞表面TLR2、TLR4的表达可能与RA病情发生发展有关,且具协同作用。     

非结核分枝杆菌感染患者外周血免疫细胞改变及其临床意义

目的分析非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacterium,NTM)感染患者外周血免疫细胞表达率的改变以及临床意义.方法选择2016年4月至2017年4月期间苏州市第五人民医院住院的69例NTM感染患者作为病例组,选取同期本院健康体检者66例作为对照组.采用流式细胞术对健康对照组和NTM感染患者(NTM组)外周血免疫细胞表达率进行检测,并比较各组之间的差异.进一步根据感染部位的差异将NTM组分为单侧感染组(29例)和双侧感染组(40例),比较两组之间免疫细胞表达水平的差异.结果与对照组相比较,NTM组的总的T淋巴细胞表达率没有显著改变,而B淋巴细胞与单核细胞表达率出现显著上调[(10.50±0.56)%比(12.26±0.57)%,(5.61±0.24)%比(6.72±0.32)%,t值分别为2.209和2.774,P值均<0.05],自然杀伤(natural killer,NK)细胞表达率出现显著下调(21.87±0.98)%比(18.63±0.98)%,t=2.341,P<0.05).对T细胞亚群的分析发现,NTM组的CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD8+CD28-T细胞的表达率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),而CD4+CD25HT细胞的表达率较对照组显著上调[(8.05±0.35)%比(3.69±0.19)%,t=11.000,P<0.05],CD8+CD28+T细胞表达率较对照组显著下调[(23.76±0.90)%比(27.07±0.74)%,t=3.039,P<0.05].进一步依据患者感染部位比较分析发现,单侧感染组与双侧感染组的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞在外周血中表达率的差异均无统计学意义(P>0.05).T细胞亚群的结果分析显示,CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25HT细胞在单侧感染组与双侧感染组之间的表达率差异无统计学意义(P>0.05),而双侧感染组的CD8+CD28+T细胞表达比例较单侧感染组显著下降[(21.99±1.02)%比(26.21±1.52)%,t=2.397,P<0.05]、CD8+CD28-T细胞表达比率较单侧感染组显著上调[(24.48±1.90)%比(18.19±1.60)%,t=2.404,P<0.05].结论NTM感染患者外周血中一些免疫细胞的表达率出现了显著改变,可能对疾病的发生与发展产生了重要影响.     

GD患者外周血CD4~+CD28-T细胞亚群的表型特征及临床意义

检测Graves病(GD)患者外周血CD4~+CD28-T细胞水平及其表面CD45RO/CD45RA及ICOS的表达,探讨CD4~+ CD28-T细胞亚群在GD免疫致病机制中的作用。采用三色荧光抗体染色及流式细胞术检测了42例初发GD患者和30例健康者外周血中CD4~+CD28-T细胞的百分率及其表面CD45RO/CD45RA和ICOS表达水平,同时检测其甲状腺功能并进行相关性分析。结果GD患者外周血中CD4~+CD28-T细胞百分率明显高于健康对照组,并高表达ICOS分子,与FT3水平显著正相关;与健康对照组相比,GD患者CD4~+CD28~-CD45RO~+T细胞百分率也显著增高,而CD4~+CD28~-CD45RA~+T细胞呈下降趋势,FT3、FT4水平与CD4~+CD28-T细胞表面CD45RO的表达率呈正相关,而FT3水平与CD45RA表达呈负相关。结论GD患者外周血CD4~+CD28~-T细胞异常增高,表面高表达ICOS分子,具有记忆性细胞的表型特征,与甲状腺功能异常有一定的相关性,CD4~+CD28-T细胞可能是参与GD免疫病理反应的自身反应性T细胞。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Notch及其配体表达

为研究Notch信号途径在类风湿关节炎(RA)发病机制中的作用,选取活动期RA患者,采用流式细胞术结合细胞表面及细胞内染色技术检测外周血单个核细胞Notch受体及配体表达情况,并与正常对照进行比较。结果发现,活动期RA患者外周血T细胞Notch2、Notch3及Notch4表达较正常人明显增加,Notch1分子表达均较少,二者未见差异。其中表达Notch分子的细胞以CD4+T细胞为主。二者B细胞Notch1、Notch2、Notch3及Notch4的表达均较低,之间未见明显差异。RA患者单核细胞Jagged1分子表达明显增加,而Delta1表达降低。结果提示活动期RA患者外周血单个核细胞中不同群体细胞存在Notch及其配体表达水平的改变。     

类风湿性关节炎患者外周血芳香烃受体表达与Th17细胞相关性研究

目的 检测类风湿性关节炎患者(RA)外周血单个核细胞芳香烃受体(AhR)的表达情况,分析其表达与Th17细胞相关性并初步探讨AhR在RA发病中的作用机制.方法 Ficoll密度梯度法分离75例RA患者(其中活动期RA患者40例,缓解期RA患者35例)及70例健康对照者外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附实验(EUSA)检测细胞裂解上清中AhR蛋白表达.流式细胞术检测75例RA患者Th17细胞表达比例.分析RA患者AhR蛋白表达与Th17细胞比例及其他临床指标的相关性.结果 RA患者PBMC内AhR表达[(91.25±15.27) ng/L]高于健康对照组[(41.81 ±9.72) ng/L],差异有统计学意义(t=3.191,P＜0.01).活动期RA患者AhR表达与缓解期RA患者表达差异无统计学意义(P＞0.05).RA患者PBMC中AhR水平与Th17细胞表达呈正相关(r=0.361,P=0.0015).RA患者PBMC中AhR表达与血清IL-17水平呈正相关,与其他临床指标无相关性(r=0.324,P=0.006).结论 RA患者PBMC中AhR表达升高,且与Th17细胞和血清中IL-17水平呈正相关,推测RA中AhR可能正向调控Th17细胞分化,促进IL-17表达.     

白细胞介素-35在Vogt-小柳原田综合征患者中的表达及其对CD4+CD25+CD127dim/-调节性T细胞的调控作用

目的观察白细胞介素(IL)-35在Vogt-小柳原田(VKH)综合征患者外周血中的表达及其对CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)调节性T细胞(Treg)功能的影响。方法收集37例VKH综合征患者(活动期16例,静止期21例)和11例健康对照者(healthy control, HC),分离血浆和外周血单个核细胞,酶联免疫吸附试验检测血浆IL-35水平,流式细胞术检测CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg比例。分选CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg,检测Treg分泌IL-35的水平和Treg中p35、EBI3 mRNA的相对表达量。使用重组人IL-35刺激分选的Treg后与自体CD4+CD25-T细胞共培养,检测细胞增殖和分泌细胞因子的水平。结果活动期VKH综合征患者血浆IL-35水平低于静止期患者和HC(P0.000 1);活动期VKH综合征患者外周血CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg的比例(5.34±0.96%)也低于静止期患者和HC(P0.01)。活动期VKH综合征患者分选的CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg分泌IL-35的水平(P=0.003 6)以及Treg中p35和EBI3 mRNA的相对表达量(P0.000 1)均显著低于HC。重组人IL-35刺激不影响活动期VKH综合征患者CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg的增殖(P=0.323),但可增强Treg的免疫抑制功能,主要表现为共培养系统细胞增殖的下降(P=0.000 5),抑制性细胞因子IL-10和IL-35的分泌增加(P0.001),而促炎因子IFN-γ和TNF-α的水平降低(P0.05)。活动期VKH综合征患者接受糖皮质激素治疗后,血浆IL-35水平和外周血CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg比例均显著升高(P0.05)。结论 IL-35和Treg在VKH综合征患者中水平降低,IL-35可调控Treg的免疫抑制功能,参与VKH综合征的发病。     

CD39分子在子痫前期患者外周血CD4+T细胞及脐静脉内皮细胞的表达及临床意义北大核心CSCD

目的：探讨CD39分子在子痫前期患者外周血CD4+T细胞、Treg、Foxp3-CD4+T细胞及脐静脉内皮细胞的表达及临床意义。方法：采集59例正常妊娠者、23例妊娠期高血压患者及65例子痫前患者(包括28例轻度子痫前期患者和37例重度子痫前期患者)外周血，流式细胞技术检测各组妊娠妇女外周血CD4+T细胞、Treg(Foxp3+CD4+T细胞)、Foxp3-CD4+T细胞比例及CD39分子表达率。随机获取胎儿分娩后的脐带(正常妊娠组18例、重度子痫前期组20例)，检测脐静脉血管内壁细胞CD31+CD39+内皮细胞群比例。结果：正常妊娠组、妊娠期高血压组、子痫前期组3组母体外周血CD4+T细胞比例[(33.71±9.80)%vs (29.59±14.22)%vs (29.63±11.11)%]及CD39表达率[2.84(0.89～5.51) vs 2.50(0.89～4.19) vs 1.39(0.79～3.51)]差异无统计学意义(P>0.05)。正常妊娠组Treg比例及CD39表达率明显高于子痫前期组[3.25(1.39～4.53) vs 1.63(1.01～2.58);33.90(22.80～59.40) vs 21.20(16.70～32.55),P<0.001]；正常妊娠组Foxp3-CD4+T细胞比例明显低于子痫前期组[94.40(93.00～96.10) vs 95.60(94.10～97.40),P=0.016]，但3组CD39表达率差异无统计学意义[1.80(0.55～4.49) vs 1.92(0.54～3.60) vs 0.92(0.49～3.24),P=0.340]。轻度子痫前期组与重度子痫前期组外周血CD4+T细胞[(32.35±10.51)%vs (27.56±11.24)%]、Treg[1.80(0.93～2.58) vs 1.44(1.03～2.58)]、Foxp3-CD4+T细胞[95.6(94.5～97.1) vs 95.6(94.0～97.6]比例差异无统计学意义(P>0.05)；轻度子痫前期组CD4+T细胞、Treg、Foxp3-CD4+T细胞CD39表达率均明显高于重度子痫前期组[2.08(1.20～5.05) vs 0.95(0.68～1.78);26.20(19.55～58.55) vs 17.60(13.90～23.15);2.14(0.78～3.69) vs 0.62(0.40～1.73),P<0.05]。重度子痫前期患者脐静脉血管内壁细胞CD31+CD39+内皮细胞群比例明显低于正常妊娠组[6.32(3.27～10.55) vs 18.95(9.90～27.48),P=0.020]。结论：母体外周血发挥免疫抑制功能的Treg数量及CD39分子表达减少可能参与子痫前期发生发展；重度子痫前期患者脐静脉血管内壁细胞CD31+CD39+内皮细胞群较正常妊娠者明显减少，可能与血管内皮损伤机制有关。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞表面HLA-Ⅱ分子表达模式研究

目的观察经典HLA-Ⅱ分子(HLA-DR/DQ/DP)在慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞表面的表达组合模式并探讨其临床意义。方法分离来自健康对照(HC)、慢性乙型肝炎轻中度(MCHB)、慢性乙型肝炎重度(SCHB)以及慢加急性肝衰竭(ACLF)患者的外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞技术观察髓样树突状细胞(myeloid DC,mDCs)、浆样树突状细胞(plasmacytoid DC,pDCs)及表面HLA-DR/DQ/DP单阳、双阳及三阳性细胞比例,分析其与疾病严重程度之间的相关性。结果 mDC和pDC比例在HC组和MCHB组无明显差别(mDC:0.185%±0.191%vs 0.162%±0.175%,P=0.599;pDC:0.218%±0.246%vs 0.158%±0.154%,P=0.247),但SCHB组(mDC:0.079%±0.049%vs 0.185%±0.191%,P=0.023;pDC:0.095%±0.103%vs 0.218%±0.246%,P=0.027)及ACLF组(mDC:0.076%±0.052%vs 0.185%±0.191%,P=0.022;pDC:0.109%±0.082%vs 0.218%±0.246%,P=0.049)均明显低于HC组。健康对照和CHB患者mDC表面均呈现HLA-DR/DQ共同高表达、HLA-DP低表达的模式;pDC表面HLA-Ⅱ分子在HC组呈现HLA-DR/DQ共同高表达同时HLA-DP低表达模式及HLA-DR/DQ/DP共同低表达的模式,除此之外CHB患者还存在HLA-DR/DQ/DP共同低表达及HLA-DP高表达同时HLA-DR/DQ共同低表达的模式。结论与HC组相比,SCHB组及ACLF组患者的mDC与pDC的比例均明显下降。CHB患者mDC表面的HLA-Ⅱ分子表达模式与健康对照一致,而pDC表面的HLA-Ⅱ分子则呈现出多样化表达模式。差异的HLA-Ⅱ分子表达模式可能对HBV持续感染产生重要作用。     

芳香烃受体在类风湿关节炎患者外周血CCR6~+CD4~+T细胞的表达及意义

目的检测类风湿关节炎(RA)患者外周血CCR6+CD4+T细胞芳香烃受体(AhR)水平,探讨AhR在RA发病机制中的意义。方法采用流式细胞术测定33例RA患者及14例健康对照者外周血CCR6+CD4+T细胞中AhR阳性细胞比例,分析其与RA患者临床指标的关系。结果 1)RA患者组外周血单个核细胞(PBMCs)中CCR6+CD4+T细胞占(10.75±2.92)%,高于健康对照组(4.96±2.28)%,差异有统计学意义(t=6.581,P0.01)。2)RA患者组内外周血CCR6+CD4+T细胞中AhR阳性细胞所占比例(46.02±14.68)%,高于CCR6-CD4+T细胞(21.62±6.94)%和PBMCs(34.22±10.33)%中AhR阳性细胞占比,差异均有统计学意义(z=-6.432,P0.01;t=-3.776,P0.01)。3)RA患者组外周血CCR6+CD4+T细胞中AhR阳性细胞所占比例(46.02±14.68)%,高于健康对照组(23.18±5.62)%,差异有统计学意义(z=-4.909,P0.01)。4)相关性分析:RA患者组外周血CCR6+CD4+T细胞中AhR阳性细胞所占比例与血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、抗环瓜氨酸肽(抗-CCP)抗体、DAS28评分、疾病病程均无相关性(P均0.05)。结论 AhR阳性细胞在RA患者外周血CCR6+CD4+T细胞中比例高,可能参与了RA发病,但其水平高低不能反映RA疾病活动程度。     

类风湿关节炎外周血单核细胞亚群CD64表达及意义

目的：探讨CD64在类风湿关节炎（RA）患者外周血单核细胞亚群上的表达及临床意义,以阐明其在RA发生和发展中的作用。方法：应用流式细胞仪检测44例RA患者和22例正常对照者外周血单核细胞亚群的比例及其CD64的表达,比较RA组和正常对照组之间各单核细胞亚群的比例及其表面CD64表达水平,并分析各单核细胞亚群表面CD64表达与实验室检查数据的相关性。两组间比较采用t检验或者非参数检验,两变量之间相关性采用Pearson或Spearman相关分析。结果：(1)RA组中间型单核细胞比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);RA组经典型单核细胞比例和非经典型单核细胞比例低于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。(2)RA组各单核细胞亚群CD64表达(MFI)显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)RA患者外周血经典型单核细胞和中间型单核细胞CD64表达(MFI)与DAS28呈正相关(r_s=0.308,P=0.044;r_s=0.302,P=0.049)。(4)RA患者各单核细胞亚群CD64表达(MFI)与ESR,CRP呈正相关(r_s=0.410,P=0.008;r_s=0.475,P=0.003;r_s=0.448,P=0.003;r_s=0.473,P=0.004;r_s=0.348,P=0.026;r_s=0.340,P=0.042)。(5)RA患者RF阳性组、ACPA阳性组外周血经典型单核细胞、中间型单核细胞上CD64表达(MFI)明显高于对应的阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。(6)中间型单核细胞CD64高表达组血清细胞因子IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：RA患者外周血单核细胞亚群CD64表达异常,经典型单核细胞和中间型单核细胞CD64表达与炎症水平、自身抗体产生和疾病活动性有明确的相关性。以外,中间型单核细胞CD64的表达与细胞因子相关。