灵芝三萜抑制口腔黏膜癌发展过程的实验研究

目的:探讨灵芝三萜在口腔癌变发生发展过程中的抑制作用和机制。方法:建立金黄地鼠颊囊动态癌变的动物模型60只,分2组:A组(灵芝三萜组),B组(对照组),每组30只。采用免疫组化技术检测VEGF在2组动物模型中的表达变化,并进行统计学处理。结果:6周时A组正常黏膜上皮例数多于B组,上皮异常增生率A组明显低于B组(P<0.01),9周时中、重度上皮异常增生和癌变率A组低于B组(P<0.05),12周时A组癌变率低于B组(P<0.01)。在整个癌变动态观察期内,2组颊囊癌变过程中不同组织学发生情况有显著差异(P<0.01),A组病变严重程度始终低于B组。VEGF表达强度随着正常黏膜至鳞癌的发展逐渐增强。在上皮单纯增生、上皮异常增生、鳞癌中A组与B组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论:灵芝三萜对口腔黏膜癌发展过程中具有抑制作用并显示出明显的血管抑制作用。     

灵芝三萜防治口腔黏膜癌及其对细胞的作用

目的:探讨灵芝三萜在口腔癌变发生发展过程中的抑制作用和机制.方法:建立金黄地鼠颊囊动态癌变的动物模型,采用免疫组化技术检测caspase-3在两组动物模型中的表达变化,并进行统计学处理.结果:在整个癌变动态观察期内,两组颊囊癌变过程中不同组织学发生情况有显著差异(P<0.01),A组病变严重程度始终低于B组.随着上皮病变程度的加剧,caspase-3 的表达呈现逐步增强趋势.A组与B组相比,在正常组、上皮单纯增生组、上皮异常增生组、鳞癌的不同病损中,A组阳性率低于B组.A组与B组正常组和上皮单纯增生组相比差异均无显著性.但在上皮异常增生和鳞癌组织中A组与B组差异均有显著性(P<0.05).结论:灵芝三萜对口腔黏膜癌发展过程中具有抑制作用并可能不是通过细胞凋亡途径发挥作用,而可能发挥直接细胞毒作用.     

Survivin基因和EphB4基因在金黄地鼠颊囊癌变过程中的mRNA表达及意义

目的：探讨survivin基因和EphB4基因表达在金黄地鼠颊囊癌变过程中的作用。方法：采用DMBA诱导金黄地鼠颊囊动态癌变的动物模型,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测survivin和EphB4在各组组织中的表达。结果：Survivin mRNA在正常组、上皮单纯增生组、上皮异常增生组和鳞癌组的阳性表达率依次增加,除正常组与上皮单纯增生组无显著性差异外（P〉0．05）,其余任两组均有显著性差异（P〈0．05）。EphB4 mRNA在以上任两组中的阳性表达率无显著性差异（P〉0．05）。结论：在转录水平,survivin的表达与口腔黏膜从正常到癌变的发生发展过程有关,而EphB4则与之无关。     

CDK2、CDK4在金黄地鼠颊囊癌变过程中表达的研究

目的 探讨CDK2、CDK4在金黄地鼠颊囊黏膜从正常黏膜到单纯增生、异常增生及鳞状细胞癌的表达变化及相关性。方法采用DMBA诱导48只金黄地鼠颊囊癌变动物模型，SABC免疫组化法检测CDK2、CDK4蛋白的表达。结果CDK2、CDK4均在异常增生上皮及鳞状细胞癌的表达与正常和单纯增生组相比明显提高（P〈0．05），阳性染色等级随病理等级改变提高（P〈0．05）。CDK2与CDK4呈高度正相关。结论CDK2、CDK4参与了口腔黏膜癌前病变和鳞状细胞癌的发生与发展。     

金黄地鼠颊囊黏膜癌变过程中iNOS的表达与Bcl-2的关系

目的：观察金黄地鼠颊囊黏膜癌变过程中诱导性一氧化氮（inducible nitric oxide synthase，iNOS）的表达与凋亡相关蛋白Bcl-2的关系。方法：6—8周龄金黄地鼠72只，随机分为实验组（60只）和空白对照组（12只），空白对照组地鼠不做任何处理．实验组地鼠用0．5％的二甲基苯丙蒽（dimethyl-benzanthrance，DMBA）丙酮溶液诱导生成颊囊黏膜癌．并在黏膜癌变的不同阶段检测组织中iNOS和Bcl-2的表达。结果：正常地鼠颊囊黏膜组织中未见iNOS阳性表达．组织中iNOS、Bcl-2的表达强度在颊囊黏膜癌变过程中均呈上升趋势。鳞癌组织中iNOS的表达较单纯增生组织显著增强（P〈0．011；鳞癌组织中Bcl-2的表达强度明显高于轻度上皮异常增生组（P〈0．05），但与重度和中度上皮异常增生组之间无显著性差异（P〉0．05）；Bcl-2的表达强度随iNOS表达强度的增强呈现先升后降的复杂变化。结论：一氧化氮参与了颊囊黏膜鳞癌的发生、发展，并可能通过Bcl-2途径调节肿瘤细胞的凋亡。     

地鼠颊囊癌变过程中HIF-1α、iNOS的表达及意义

目的：研究口腔黏膜癌变过程中HIF-1α、iNOS的表达及意义。方法：建立金黄地鼠颊囊癌变模型，应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定地鼠颊囊癌变过程中HIF-1α、iNOS；mRNA的表达。结果：HIF-1α mRNA在重度异常增生组和鳞癌组出现表达，二者间表达阳性率（44％，68％）无显著性差异（P〉0．05）；其他各组均未检测到HIF-1α mRNA的表达。iNOS在异常增生组和鳞癌组异常高表达，其中轻度、中度异常增生组与鳞癌组间有显著性差异（P〈0．05），重度异常增生组与鳞癌组间无显著性差异（P〉0．05）。结论：HIF-1α的过度表达是黏膜癌变过程中的早期行为，早于组织学上的血管形成和浸润。HIF-1α、iNOS相互协同促进口腔黏膜癌的发生与发展，检测组织中二者的表达将成为临床监测口腔黏膜癌变进展及判断预后的重要指标。     

金地鼠颊囊癌变过程中IκBα蛋白表达的研究

目的 :探讨核转录因子的抑制蛋白IκBα在金地鼠颊囊鳞癌发生过程中的表达及意义。方法 :建立金地鼠颊囊癌变的动物模型。采用SABC免疫组织化学方法 ,检测在地鼠颊囊黏膜正常上皮 (n =2 2 ) ,上皮单纯增生 (n =2 0 ) ,上皮异常增生 (n =35 ) ,鳞状细胞癌 (n =2 3)中IκBα的表达变化。结果 :各阶段均有IκBα的表达 ,但表达强度不同 ,呈现一种动态变化过程。在正常颊囊黏膜组织和上皮单纯增生组织中IκBα局限表达于基底层和棘层底部细胞的胞浆中。随着上皮异常增生的出现及异常增生程度的加重 ,IκBα表达显著下降 ,较正常组和单纯增生组有显著性差异 (P <0 .0 5 )。一旦鳞癌生成后 ,IκBα表达上调 ,明显高于上皮异常增生组 (P <0 .0 1) ,甚至超过癌变前正常水平 (P <0 .0 1)。结论 :IκBα在金地鼠颊囊癌变过程中的表达异常 ,尤其是在上皮异常增生阶段的表达水平下调 ,可能是口腔黏膜上皮癌变过程中的一个早期事件 ,且可将其作为口腔癌变监测的生物学指标之一     

Fas、bcl-2在金黄地鼠颊囊癌变过程中的表达

目的:研究凋亡相关蛋白Fas、bcl-2在口腔黏膜癌变过程中的表达规律。方法:建立金黄地鼠颊囊癌变模型,采用免疫组化法检测地鼠颊囊癌变过程中凋亡相关蛋白Fas、bcl-2的表达。采用非参数检验进行统计学分析。结果:在阴性对照组黏膜,除基底细胞外,Fas多呈极强阳性表达;随上皮异常增生程度加重,Fas表达下调,主要定位于细胞的胞膜和胞质。癌变后Fas表达更低,且表达部位主要位于癌细胞胞质内,与阴性对照组黏膜相比,差异有显著性(χ2=45.576,P<0.05)。bcl-2在阴性对照组黏膜多不表达,随上皮异常增生程度加重表达上调,重度异常增生时达最高峰,鳞癌组表达降低,与异常增生组显著差异,而与阴性对照组相比,差异有显著性(χ2=19.433,P<0.05)。结论:Fas通过表达的下调及表达部位的改变,参与口腔黏膜异常增殖细胞逃逸机体的免疫监视功能及细胞毒性淋巴细胞的攻击;bcl-2通过表达上调,发挥其抑制凋亡的功能,使细胞凋亡减少,细胞的存活期延长;两者可能具有协同作用,导致增殖细胞凋亡减少,细胞增殖与凋亡失衡,导致地鼠颊囊癌的形成。     

CDK2在金黄地鼠颊囊癌变过程中的表达的研究

目的探讨CDK2在金黄地鼠颊囊黏膜从正常黏膜到单纯增生、异常增生及鳞癌的表达变化.方法采用DMBA诱导48只金黄地鼠颊囊癌变动物模型,SABC免疫组化法检测CDK2蛋白的表达.结果CDK2在异常增生上皮及鳞癌的表达与正常和单纯增生组相比明显提高(P<0.05),阳性染色等级随病理等级改变提高(P<0.05).结论CDK2参与了口腔黏膜癌前病变和鳞癌的发生与发展.     

共济失调毛细血管扩张综合征突变基因与口腔黏膜癌变的相关研究

目的研究共济失调毛细血管扩张综合征突变基因（ATM）在口腔黏膜癌变过程中的作用。方法选取上皮单纯增生,轻、中、重度上皮异常增生,口腔黏膜鳞状细胞癌及正常口腔黏膜标本共61例,采用免疫组织化学SP法和聚合酶链反应方法,观察口腔黏膜癌变过程中ATM蛋白表达与基因杂合性缺失情况以及其与临床病理特征的关系。结果上皮异常增生组平均染色强度高于正常对照组,差别有统计学意义（P<0.05）。在口腔鳞癌中,22例（68.8%）ATM蛋白表达正常或升高,10例（31.3%）ATM蛋白表达降低或缺失;经统计学分析,ATM蛋白表达正常或升高组与ATM蛋白表达降低或缺失组两组分别在病理分级与淋巴结转移两方面的差异有统计学意义（P<0.05）;PCR结果表明,上皮异常增生中未发现异常改变,而口腔鳞状细胞癌中,3例（9.38%）发生杂合性缺失,2例（6.25%）发生微卫星不稳定,发生杂合性缺失的3例病例ATM蛋白表达均缺失。结论ATM在上皮异常增生中表达升高可能有利于消除基因组不稳定,阻止癌变发生;而ATM基因失活可能是促使口腔鳞癌恶性演进的基因改变之一。     

4-硝基喹啉-1-氧化物诱导大鼠舌癌过程中Notch1的表达特点

目的：研究 Notch1在大鼠舌癌模型发生发展过程中的表达变化。方法：将40只 SD 大鼠随机分为对照组（A 组10只）和实验组（B、C、D组各10只）,使用质量百分比浓度为0．004％的4-硝基喹啉-1-氧化物（4-nitroquinoline-1-oxide,4NQO）饮用水喂养实验组 SD大鼠,用蒸馏水喂养对照组 SD大鼠。B、C、D组分别于8、16、24周取大鼠舌体组织;A 组在8、16、24周同时各取3只、3只、4只作为正常对照。行常规组织学观察,并使用免疫组织化学法检测 Notch1在病变不同阶段的舌粘膜内的表达。结果：4NQO可以有效诱导大鼠舌黏膜鳞状细胞癌的发生。在不同的给药时间点,可以诱导大鼠舌黏膜产生不同程度的癌前病变。Notch1在正常舌黏膜、癌前病变、舌鳞癌中的表达逐渐增高（P＜0．01）。随着异常增生程度的增加,阳性表达部位逐渐由基底层向表层扩展,且 Notch1的膜型表达逐渐增多。结论：Notch1的高表达及其在细胞膜上的集中表达可能与舌癌的发生、发展过程相关。     

大鼠舌癌变过程中生存素、Bcl-2和p53蛋白的表达

目的 探讨生存素(survivin)蛋白在大鼠舌癌变过程中的表达及其与Bcl-2、p53蛋白表达的相关性.方法 0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物(4一nitro-quinoline 1-oxide,4NQO)饮水喂养SD大鼠9～36周建立大鼠舌癌变模型,用免疫组化二步法检测60例大鼠舌癌变过程中生存素、Bcl-2及p53蛋白的表达.结果 36例止常组织中生存素蛋白表达仅1例,而11例异常增生组织中其表达为6例,11例口腔癌组织中其表达为10例.生存素蛋白在正常舌黏膜、异常增生黏膜及舌癌中的阳性表达差异有统计学意义(P<0.001),异常增生及口腔癌组织中生存素蛋白表达显著高于正常黏膜中的表达(P<0.01).在17例生存素蛋白表达阳性的大鼠舌组织中,Bcl-2蛋白阳性表达12例,p53蛋白阳性表达8例;生存素蛋白表达与Bcl-2、053蛋白表达呈正相关(P<0.01).结论 生存素蛋白的表达增高和口腔鳞状上皮的异常增生、癌变有关,提示生存素可能参与了口腔癌的发生、发展;生存素、Bcl-2及p53蛋白的表达可能在口腔癌的发生、发展中起协调作用.     

HERG1在口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌中的表达

目的：研究钾离子通道蛋白HERG1在正常口腔黏膜（normal oral mucosa,NOM）、口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）、口腔鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma,OSCC）中的表达及意义。方法：免疫组织化学技术检测16例NOM、20例OLP、30例OSCC组织中HERG1的表达。采用χ2检验,P〈0.05为差异具有统计学意义。结果：HERG1在OSCC中的表达强度高于OLP（P〈0.05）,HERG1在OLP组织的表达高于正常组织（P〈0.05）,且糜烂型OLP中的表达高于非糜烂型OLP（P〈0.05）,差异均具有统计学意义。结论：HERG1可能与OLP及OSCC的发生发展有一定的关系。     

KGF对口腔黏膜上皮细胞中增殖相关基因PCNAmRNA的作用

目的：检测不同浓度角质细胞生长因子（KGF）对体外培养的口腔黏膜上皮细胞形态学及对上皮细胞增殖相关基因PCNAmRNA表达的影响。方法：体外培养的口腔黏膜上皮细胞加入含不同浓度KGF（0ng／mL,5ng／rnL,25ng／mL,50ng／mL）的D—KFSM,分别培养12h、24h、48h后观察细胞形态改变并用荧光实时定量检测各组细胞内增殖相关基因PCNAmRNA的表达。结果：①相同时间段实验组较对照组上皮细胞贴壁明显,培养48h实验3组（50ng／mL）较其他组细胞核仁明显;②12h时,实验组较对照组上皮细胞内PCNAmRNA表达增加,但各实验组间PCNAmRNA表达逐渐降低（P〈0．05）;③24h时实验组较对照组PCNAmRNA表达增加,但各实验组间无统计学差异护〉0．05）：④48h时,实验组较对照组PCNAmRNA表达增加,且呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论：外源性KGF可上调口腔黏膜上皮细胞增殖相关基因PCNAmRNA的表达,且在不同时间段、不同浓度调控作用存在差异。     

口疮1号方治疗大鼠口腔溃疡的实验研究

目的：通过观察实验大鼠口腔溃疡愈合情况及检测血清中EGF、及口腔黏膜EGFR水平,来评价口疮1号方对实验性大鼠口腔溃疡的治疗效果,并探讨其作用机制,从而为临床应用提供理论依据。方法：利用化学药物灼烧法复制口腔溃疡模型。利用酶联免疫吸附法（ELISA）检测正常大鼠及模型大鼠血清中EGF水平。并取正常及有损伤的口腔黏膜组织,做病理检查。及利用免疫组化方法检测EGFR水平。再将剩余模型大鼠随机分为口疮1号方实验组和生理盐水对照组,5d后,观察每组大鼠一般症状体征及口腔溃疡变化情况,检测血清中EGF水平、及口腔黏膜组织EGFR水平。结果：模型组大鼠血清中EGF、及大鼠黏膜EGFR含量水平较正常大鼠显著降低（P〈0.01）。口疮1号方实验组与生理盐水对照组相比,体重增加,口腔溃疡面积缩小。两组大鼠血清中EGF及口腔黏膜中EGFR水平均有所升高,实验组EGF,EGFR水平较对照组升高快,两组之间有显著差异（P〈0.01）。结论：口疮1号方可以显著改善口腔溃疡症状,促进溃疡愈合。口疮1号方可以调节口腔溃疡时EGF、EGFR水平,增强口腔黏膜修复能力。     

RUNX3和RASSF1A在口腔黏膜下纤维性变及其癌变组织中的表达

目的：研究Runt相关转录因子3（RUNX3）、RAS相关区域家族1A（RASSF1）在口腔黏膜下纤维性变（OSF）及其癌变组织中的表达与分布,初步探讨二者在OSF癌变过程中的作用。方法：采用免疫组织化学SP法检测10例正常口腔黏膜组织、35例OSF组织、10例OSF癌变组织中RUNX3、RASSF1A蛋白的表达及分布。结果：RUNX3在正常口腔黏膜组阳性表达率为90.00%（9/10）,OSF组为85.71%（30/35）,OSF癌变组为30.00%（3/10）,正常对照组与OSF组无统计学差异,OSF癌变组显著低于正常对照组（P〈0.05）及OSF组（P〈0.05）。RASSF1A在正常口腔黏膜组阳性表达率为80.00%（8/10）,OSF组为62.86%（22/35）,OSF癌变组为20.00%（2/10）,正常对照组与OSF组无统计学差异,OSF癌变组织组显著低于正常对照组（P〈0.05）及OSF组（P〈0.05）。结论：RUNX3和RASSF1A表达下调或缺失与OSF癌变有关。     

生存素、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在口腔癌前病变及口腔癌中的表达

目的 探讨生存素(survivin)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)在口腔癌发生中的作用,以期为口腔癌的监测和治疗提供参考.方法 选取首都医科大学口腔医学院病理科存档石蜡标本45例,其中口腔白斑伴上皮轻-中度异常增生16例,口腔白斑伴上皮重度异常增生12例,口腔高-中分化鳞状细胞癌17例;正常口腔黏膜组织10例.采用免疫组化SP法对生存素、caspase-3的表达进行检测;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法对细胞凋亡指数进行检测.结果 生存素表达在正常黏膜、白斑伴上皮轻-中度异常增生、白斑伴上皮重度异常增生及口腔癌中逐渐增加,阳性细胞率分别为(1.05±1.21)%、(6.06 ±4.87)%、(12.49 ±8.41)%和(21.89±10.45)%;caspase-3的表达在3个病例组中逐渐下降,正常对照、白斑伴上皮轻-中度异常增生、白斑伴上皮重度异常增生及口腔鳞状细胞癌组阳性细胞率分别为(12.37 ±5.48)%、(19.51 ±13.15)%、(9.76±7.83)%和(6.08 ±6.91)%;正常对照、白斑伴轻-中度异常增生、白斑伴重度异常增生及口腔鳞状细胞癌组凋亡指数分别为(0.89 ±0.46)%、(1.29 ±0.63)%、(0.65 ±0.40)%和(0.21 ±0.12)%,前3组与口腔鳞状细胞癌组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 生存素在口腔癌的发生过程中起重要作用,随着生存素表达的增加,caspase-3和凋亡指数呈下降趋势;生存索可能通过抑制caspase-3的表达,从而抑制细胞的凋亡,促进口腔癌的发生.     

口腔扁平苔藓中RANTES的表达及其与肥大细胞的关系

目的:探讨RANTES及肥大细胞(MC)在口腔扁平苔藓(OLP)发生发展过程中的作用及意义。方法:采用SABC免疫组化法检测30例OLP黏膜组织及10例正常口腔黏膜组织中RANTES的表达及MC的数量,根据Bresalier半定量公式计算RANTES的平均染色强度。结果:RANTES的平均染色强度在正常对照组低于OLP非糜烂型组低于OLP糜烂型组,三组之间两两差异均有统计学意义(P<0.05)。MC密度正常对照组低于OLP非糜烂型组低于OLP糜烂型组,三组之间的两两差异均有统计学意义(P<0.05)。MC密度与RANTES表达呈正相关(r=0.850,P<0.01)。结论:MC及RANTES可能参与了OLP的致病机制,且两者间有相关性。     

缺氧诱导因子-1α在口腔扁平苔藓组织及鳞状细胞癌组织中的表达研究

目的：通过免疫组化方法观察缺氧诱导因子-1a（hypoxia induced factor-1α,HIF-1α）在正常口腔黏膜、口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）、OLP伴不典型增生及口腔鳞状细胞癌中的表达,探讨HIF-1α在OLP发生发展以及癌变过程中的作用。方法：收集OLP25例,OLP伴不典型增生11例,口腔鳞状细胞癌14例,正常口腔黏膜10例组织标本,采用免疫组化方法对各组织中HIF-1α表达进行分析。结果：HIF-1α在正常口腔黏膜组织中不表达,在OLP组织、OLP伴不典型组织及口腔鳞状细胞癌组织中均有阳性表达。表达强度由低到高依次为：OLP伴不典型增生组、OLP组、鳞状细胞癌组,各组间均有显著性差异（P〈0.005）。结论：正常口腔黏膜组织,OLP,OLP伴不典型增生以及鳞状细胞癌组织中HIF-1α的表达具有显著性差异,提示HIF-1α参与了口腔扁平苔藓的发生发展以及癌变的过程。