内源性大麻素联用顺铂对人肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用

目的观察内源性大麻素（AEA）、顺铂（DDP）单用或联用对人肺癌A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测AEA和DDP对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪（FCM）PI单染检测AEA联用DDP对细胞周期的影响,以Annexinv／PI双染法检测AEA联用DDP对细胞凋亡的影响。结果AEA对肺癌细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量、时间依赖性。10,20μmol／L的AEA和1,2mg／L的DDP联合作用24,48,72h后,细胞增殖抑制率显著高于单用组;两药联用后诱导细胞凋亡的作用显著增强,AEA可使A549细胞阻滞于G2／M期。结论AEA及DDP对肺癌A549细胞的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡,在一定范围内呈量效关系,且两者联合应用具有相加或协同作用。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的 探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法 通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果 注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞脱落凋亡作用的研究

目的检测姜黄素诱导人肺腺癌细胞(A549)脱落凋亡的作用。方法采用DNA ladder法,流式细胞仪(FCM)技术结合PI及AnnexinV-FITC双标记染色试验方法及W estern-b lot法观察姜黄素是否能诱导A549脱落凋亡。结果A549细胞具有抗脱落凋亡的特性,而10μmol.L-1的姜黄素即可引起悬浮培养的A549细胞发生脱落凋亡。结论姜黄素可诱导人肺腺癌细胞(A549)脱落凋亡。     

芍药苷对肺腺癌细胞A549凋亡的诱导作用

目的:研究芍药苷对肺腺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法:以0(阴性对照)、5、10、20、40μmol/L芍药苷培养A549细胞48 h后,以MTT法检测A549细胞活力。上述浓度芍药苷培养A549细胞24 h后,酶标法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western blot法检测Bcl-xl、Bax、核因子κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核因子κB p65(NF-κB pp65)蛋白表达。结果:与阴性对照比较,5~40μmol/L芍药苷培养A549细胞48 h后,细胞活力减弱;5~40μmol/L芍药苷培养细胞24 h后,细胞Caspase-3活性、Bax蛋白表达增强;10~40μmol/L芍药苷培养细胞24 h后,细胞Bcl-xl蛋白表达减弱,NF-κB pp65蛋白表达减弱;以上差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:芍药苷可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与激活NF-κB信号通路、调节相关基因表达有关。     

双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用研究

目的 观察双氢青蒿素对肺腺癌A549细胞的体外抑瘤效应，并对其抗癌机理作出初步探索。方法 双氢青蒿素对体外培养肺腺癌A549细胞的生长抑制作用采用MTT检测法，细胞凋亡率检测用流式细胞术，并用荧光显微镜及透射电镜观察凋亡细胞的形态学特征。结果 双氢青蒿素半数抑瘤浓度为230nM，双氢青蒿素作用后细胞出现凋亡形态改变，流式细胞术结果出现凋亡峰。结论 双氢青蒿素有较明显抑瘤效应，其抗癌机理可能与诱导细胞凋亡有关。     

丹参酮ⅡA诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的探讨丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人肺腺癌A549作用及其可能作用机制。方法通过细胞形态学和MTT法观察TanⅡA对A549细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察细胞凋亡;采用荧光分光光度计检测细胞内钙及线粒体膜电位;RT-PCR检测Bad和MT-1A mRNA的表达。结果 TanⅡA能抑制A549细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用A549细胞24、48和72h的IC50分别为117.85、14.87和6.89μmol·L-1。TanⅡA作用A549细胞24h后,A549细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,A549细胞凋亡百分率逐渐增大。TanⅡA作用后,A549细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达下调。结论 TanⅡA具有抗A549作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达下调有关。     

穿心莲内酯对人肺腺癌A549细胞NF-κB通路的调控作用

目的探讨穿心莲内酯对肿瘤细胞生长的作用及机制。方法人肺腺癌A549细胞分别与穿心莲内酯1.5～30μmol·L-1作用24h,以及穿心莲内酯30μmol·L-1作用4～24h。用MTT法检测A549细胞存活率;Western印迹法检测在肿瘤坏死因子α(TNF-α)10μg·L-1刺激下,穿心莲内酯30μmol·L-1对NF-κB信号通路中的相关蛋白NF-κB抑制因子α(IκBα)、磷酸化IκBα、IκB激酶β(IKKβ)和磷酸化IKKβ表达的影响;ELISA法检测穿心莲内酯对A549细胞核内NF-κBDNA结合活性的影响。结果穿心莲内酯的浓度和作用时间与A549细胞的存活率密切相关,穿心莲内酯30μmo·lL-1作用24h,A549细胞的存活率下降到(22.0±1.2)%,而穿心莲内酯1.5μmol·L-1作用24h或者穿心莲内酯30μmol·L-1作用4h对A549细胞的存活率几乎无影响。Western印迹法显示,穿心莲内酯能够抑制TNF-α诱导的NF-κB信号通路中IKKβ的磷酸化,抑制IκBα的磷酸化,推迟IκBα的降解,对IKKβ的表达无影响。穿心莲内酯还能够抑制TNF-α诱导的A549细胞核内NF-κBp65蛋白的DNA结合活性,抑制率达32%。结论穿心莲内酯通过影响NF-κB信号通路抑制A549细胞的生长。     

低分子量肝素对人肺腺癌A549细胞作用的影响研究

目的观察低分子肝癌(LMWH)对人肺腺素A549细胞体外作用的影响,阐明LMWH抑制肿瘤血管生成的可能机制。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测LMWH处理细胞后血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达变化。结果 VEGF mRNA水平的表达分别是随药物浓度增加和时间的延长而逐渐减弱,差异具有显著性(P<0.05)。结论 LMWH可以下调细胞VEGF mRNA的表达水平,可作为血管生成抑制剂有望成为解决肿瘤细胞耐药和肿瘤靶向治疗的新途径。     

白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的 探讨白藜芦醇（Res）对肺腺癌A549细胞凋亡的作用及其机制。方法 常规培养肺腺癌A549细胞（购于中国科学院细胞生物学研究所）至对数生长期,加入不同浓度的Res （终浓度分别为3、10、30、60、100、200、300 mg/L）,以Res 0 mg/L为对照组,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的Res对A549细胞的吸光度值,计算细胞的生长抑制率;采用Annexin-Ⅴ/PI双染法检测Res对肺腺癌A549细胞凋亡的影响;采用逆转录酶-聚合酶联反应（RT-PCR）检测端粒酶mRNA和β-actin mRNA的相对活性。结果 MTT检测显示Res呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖。与对照组比较,不同浓度（10、30、100 mg/L） Res可抑制A549细胞增殖;Annexin-Ⅴ/PI检测结果显示,与对照组比较,随着Res剂量（10、30、100 mg/L）的增加,A549细胞的凋亡数升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,不同剂量Res （10、30、100 mg/L）诱导端粒酶mRNA相对含量明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 Res可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

柚皮素诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的：研究柚皮素对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察柚皮素对A549细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33342染色后于倒置荧光显微镜下观察柚皮素对A549细胞形态的影响;通过Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测柚皮素对A549细胞诱导凋亡的作用。结果柚皮素可抑制A549细胞的增殖,且呈现时效、量效依赖关系;Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜下发现不同浓度柚皮素作用细胞48h后出现细胞核破裂、浓染,呈现明显的凋亡形态学特征;200μM、400μM 柚皮素作用细胞48h 后 A549细胞凋亡率分别为（12.15±2.14）%和（25.26±3.37）%。结论柚皮素可能通过诱导细胞凋亡从而发挥其抑制A549细胞增殖的作用。     

白藜芦醇对肺腺癌细胞增殖和CXCR4表达的影响

<正>肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,临床以早期转移和预后极差为特点。由于CXCR4表达于多种肿瘤细胞中[1],并且与肿瘤细胞远处转移密切相关[2],因此,CXCR4的作用越来越受到人们的重视。白藜芦醇(reveratrol,Res)可以抑制多种癌细胞的生长[3],本实验拟通过研究白藜芦醇     

顺铂与氯霉素联用增强对人肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的体外观察顺铂和氯霉素对人肺腺癌A549细胞的相互作用。方法采用MTT法,利用中效原理判定联合应用顺铂及氯霉素对人肺腺癌A549细胞的效应。结果顺铂与氯霉素联用可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,两药单用和联用时随着药物浓度增加,其效应也增加;两药联用时的中效浓度明显小于两药单独使用时的中效浓度（顺铂减少43.8%,氯霉素减少79.1%）;两药大剂量合用时为拮抗效应（CI〉1）,小剂量合用时为协同效应（CI〈1）;并且两药合用时的效应与给药的时间先后次序无关（P〉0.05）。结论顺铂与氯霉素的联用可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,两药联用时的中效浓度较单用时明显减小;上述两种药合用时大剂量为拮抗,小剂量为协同;两药合用时的效应与给药的时间先后次序无关。     

两面针碱、花椒棚碱对肺腺癌A549细胞的抑制作用研究

目的观察两面针碱以及花椒棚碱对抗肺腺癌A549细胞的抑制作用。方法采用MTT比色法观察检测,两面针碱及花椒棚碱对A549细胞抑制效应,并计算Ic50。结果两面针碱、花椒棚碱对A549细胞的Ic50分别为0．68μg．mL-1、173．4lμg．mL-1。两面针碱在1．015μg．mL-1。浓度下能够诱导66．O％的A549细胞凋亡,在显微镜下显示为细胞的皱缩、核裂解、核固缩等现象。结论两面针碱体外对A549细胞有杀伤作用,能显著抑制A549细胞的生长,而花椒棚碱高浓度溶液虽然能显示出抑制A549细胞的生长,但体外对A549细胞无杀伤作用。     

PM2.5-induced oxidative stress triggers autophagy in human lung epithelial A549 cells

Exposure to higher levels of air pollution particulate matter (PM) with an aerodynamic diameter of less than 2.5 μm (PM_2.5) links with an increased risk of cardiovascular and respiratory deaths and hospital admission as well as lung cancer. Although the mechanism underlying the correlation between PM_2.5 exposure and adverse effects has not fully elucidated, PM_2.5-induced oxidative stress has been considered as an important molecular mechanism of PM_2.5-mediated toxicity. In this work, human lung epithelial A549 cells were used to further investigate the biological effects of PM_2.5 on autophagy. The cell viability showed both time- and concentration-dependent decrease when exposure to PM_2.5, which can be attributed to increase of the levels of extracellular lactate dehydrogenase (LDH) release and intracellular reactive oxygen species (ROS) generation in A549 cells. Moreover, PM_2.5-induced oxidative damage in A549 cells was observed through the alteration of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activities compared to the unexposed control cells. PM_2.5-induced autophagy was indicated by an increase in microtubule-associated protein light chain-3 (LC3) puncta, and accumulation of LC3 in both time- and concentration-dependent manner. PM_2.5-induced mRNA expression of autophagy-related protein Atg5 and Beclin1 was also observed compared with those of the unexposed control cells. These results suggest the possibility that PM_2.5-induced oxidative stress probably plays a key role in autophagy in A549 cells, which may contribute to PM_2.5-induced impairment of pulmonary function.     

Ceramide induces apoptosis in human lung adenocarcinoma A549 cells through mitogen-activated protein kinases

AIM: To provide experimental data for further research on the signal transduction of apoptosis in lung adenocarcinoma cells, we examined the effects of exogenous C2-ceramide administration on several members of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) superfamily and caspase-3 in A549 cells. METHODS: Cell viability and apoptosis were analyzed by cell counting kit-8 assay and flow cytometry. Various MAPK and caspase-3 proteins were detected by Western blotting. RESULTS: C2-ceramide selectively altered the phosphorylation state of members of the MAPK superfamily, causing hyperphosphorylation of mitogen-activated protein kinase kinase (MEK)1/2 and the p38 MAPK, but not affecting the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 and the c-Jun N-terminal kinase. SB-203580 (a p38 MAPK inhibitor) and p38 siRNA, but not U0126 (a MEK inhibitor), partially rescued cell death induced by C2-ceramide. C2-ceramide promoted the activation of caspase-3. CONCLUSION: Exogenous C2-ceramide induced apoptosis in human lung adenocarcinoma A549 cells. The activation of MAPK and caspase-3 were involved in the mechanisms of C2-ceramide-induced apoptosis in A549 cells.     

低剂量卡铂诱导人肺癌细胞A549过早性衰老的作用研究

目的考察低剂量卡铂诱导人肺癌细胞A549过早性衰老的作用。方法 A549细胞经不同浓度卡铂处理,采用MTT法和克隆形成率试验检测卡铂对细胞增生的抑制作用;β-半乳糖苷酶染色试验检测卡铂诱导细胞衰老情况;FCM法检测卡铂对细胞凋亡和细胞周期分布的影响;全波长荧光酶标仪检测细胞内活性氧自由基(ROS)水平变化。结果低剂量卡铂能诱导细胞衰老;不同浓度卡铂作用细胞48 h后,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞显著增多;细胞周期多停滞于G0/G1期,S期显著减少,且细胞内ROS水平明显升高(P<0.05)。结论低剂量卡铂能诱导人肺癌细胞A549过早性衰老。     

塞来昔布对人肺癌A549细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用观察

目的 体外研究选择性环氧化酶2 (COX-2)抑制剂塞来昔布对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT比色法)观察不同浓度的塞来昔布对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用,TUNEL染色检测细胞凋亡,并用含半胱氨酸的门冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)活性检测试剂盒检测其活性变化.结果 塞来昔布能够以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖,药物的Ic50为33.98 μmol·L-1;TUNEL染色分析显示给予不同浓度塞来昔布的细胞与未给予塞来昔布的细胞相比凋亡率有差异(P＜0.05),经塞来昔布处理的A549细胞内caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(P＜0.05).结论 塞来昔布能够抑制A549细胞增殖,并呈药物浓度依赖性;塞来昔布能以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,其机制涉及caspase-3活化的信号转导途径.