丹参多酚酸盐对胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究丹参多酚酸盐对胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其发生机制。方法 应用CCK-8试剂盒检测丹参多酚酸盐对U251细胞增殖的影响,流式细胞仪观察丹参多酚酸盐对U251细胞周期及细胞凋亡的影响,qRT-PCR检测自噬基因Beclin-1的表达。结果 丹参多酚酸盐可明显抑制胶质瘤U251细胞增殖,使细胞阻滞在G₀/G₁期,促进细胞凋亡,上调自噬基因Beclin-1 mRNA的表达。结论 丹参多酚酸盐可抑制胶质瘤U251细胞生长,诱导细胞发生凋亡,促凋亡效应可能与自噬基因Beclin-1 mRNA表达增多有关。     

7-羟乙基白杨素对高原脑水肿的作用机制初探

目的 研究7-羟乙基白杨素（7-HEC）对高原脑水肿（HACE）的可能作用机制。方法 建立大鼠高原脑水肿模型,测定大鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）的活性及丙二醛（MDA）的含量,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡、周期及自噬相关蛋白的表达水平,探究7-HEC对高原脑水肿的保护作用及其机制。结果 与对照组相比,缺氧模型组大鼠脑组织中MDA含量显著上调,SOD活力显著下调,周期蛋白CyclinD1、CyclinE1、CDK6、CDK2,凋亡蛋白Bcl-2、PARP,自噬蛋白LC3-B相对表达下调,凋亡蛋白Bax,自噬蛋白P62的相对表达上调,差异均具有统计学意义（P<0.05）;与缺氧模型组相比,7-HEC给药组MDA含量下调,SOD活力显著上调,周期蛋白CyclinD1、CyclinE1、CDK6、CDK2,凋亡蛋白Bcl-2、PARP,自噬蛋白LC3-B的相对表达上调,凋亡蛋白Bax,自噬蛋白P62的相对表达下调,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 7-HEC对高原脑水肿具有一定的保护作用,其机制可能与调控细胞周期、自噬、凋亡以及氧化应激等通路有关。     

基于网络药理学和实验验证探究红景天调控颗粒细胞自噬的作用机制

目的 基于网络药理学和实验验证探究红景天调控颗粒细胞自噬的潜在作用靶点和作用机制。方法 借助数据库获取红景天的活性成分、作用靶点以及自噬相关靶点,建立成分-靶点网络图,蛋白质互作网络图,对关键靶点进行基因和信号通路的富集分析并且对活性成分和核心靶点进行分析对接,探究红景天调控颗粒细胞自噬的可能作用机制;使用Western blotting、RT-PCR、透射电镜以及双标腺病毒检测红景天重要活性成分对颗粒细胞自噬的作用。结果 获取红景天有效成分7个,作用靶点441个,细胞自噬相关靶点796个,富集分析得到生物过程834个,细胞成分60个,分子功能69个,以及信号通路150条;分子对接结果表明红景天活性成分与核心作用靶点AKT1、ERBB2、PIK3CA、PIK3R1均能形成稳定靶向结合作用。实验结果表明红景天重要活性成分红景天苷具有促进自噬小体和自噬溶酶体形成的作用,并且抑制了Pl3K/AKT信号通路的活动。结论 红景天调控颗粒细胞自噬具有多成分-多靶点-多通路的作用特点,其机制与红景天苷调控PI3K/AKT信号通路有关。     

二甲双胍通过改善自噬功能障碍保护多柔比星诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨二甲双胍(metformin，Met)保护DOX诱导的心肌损伤的作用机制。方法 ①H9C2细胞经0.1~10 mmol·L^-1Met预处理后加入1 μmol·L^-1 DOX处理24 h，MTT法检测细胞存活率，Annexin V-PI染色后流式细胞技术检测细胞凋亡率，使用ROS试剂盒检测细胞内ROS蓄积情况；②使用Western blotting检测0.1，0.3，3 mmol·L^-1 Met对DOX激活自噬水平的调节作用，并使用25 μmol·L^-1 AG-126考察ERK信号通路调节DOX诱导心肌细胞损伤中的作用；③10 nmol·L^-1 BafA1用于探索Met恢复DOX阻断心肌细胞自噬流的研究，流式细胞技术检测吖啶橙细胞内溶酶体pH的变化。结果 DOX(1 μmol·L^-1)的接触会使H9C2细胞的存活率显著下降(P<0.05)，同时心肌细胞内ROS累积增加(P<0.05)，凋亡细胞比例升高(P<0.05)，不同浓度的Met可以有效缓解DOX升高的H9C2细胞内ROS和凋亡细胞比率(P<0.05)，从而增加心肌细胞存活率(P<0.05)。DOX(1 μmol·L^-1)处理H9C2细胞6 h能够有效激活细胞自噬，损伤心肌细胞。通过AG-126干预可知，DOX诱导的心肌细胞自噬与ERK分子的激活相关，3 mmol·L^-1 Met可以下调ERK的磷酸化水平(P<0.05)，从而降低DOX诱导的心肌细胞自噬。吖啶橙染色和Western blotting结果显示，与自噬流阻断剂BafA1处理的H9C2细胞比较，DOX同样增加H9C2细胞内溶酶体pH(P<0.05)，使心肌细胞自噬功能异常，增加细胞凋亡程度。结论 DOX损伤心肌细胞是通过上调自噬水平并诱发自噬功能障碍引起心肌细胞凋亡，Met下调ERK磷酸化水平，缓解DOX破坏的心肌细胞自噬障碍，保护心肌细胞免受DOX诱导的伤害。     

黄芩素对人胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响

摘 要 目的：探讨黄芩素对人胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法: 人胰腺癌细胞株BxPC 3和PANC 1经不同浓度（0,50,75,100 μmol·L-1）的黄芩素处理后,通过CCK 8检测、划痕愈合实验、细胞迁移、侵袭实验、显微镜观察、Real time qPCR 检测增殖和凋亡相关基因的影响等方法,观察黄芩素在胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡、基因表达的影响。结果: 与空白对照组比较,黄芩素能够显著抑制胰腺癌细胞BxPC 3和PANC 1的增殖,并且随着浓度的加大,对BxPC 3和PANC 1增殖的抑制作用在加强（P＜0.01）;且黄芩素对两种胰腺癌细胞系的作用效果与临床常用抗癌药吉西他滨（2 μmol·L-1）的作用效果相似。黄芩素能显著抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭,诱导癌细胞的凋亡,诱导胰腺癌细胞自噬;经过黄芩素处理的癌细胞,细胞周期相关基因和抗凋亡基因（cyclinD1、cyclinE、cyclinA和Bcl 2）表达水平下降,而细胞凋亡相关基因（caspase 3和Bax）的表达水平上调明显。结论: 黄芩素能有效抑制胰腺癌细胞BxPC 3和PANC 1的增殖、迁移和侵袭,并且可以通过凋亡和自噬诱导细胞死亡。     

小檗碱抑制缺氧诱导的人乳腺癌HCC1937细胞自噬

目的 研究小檗碱(berberine,BBR)对缺氧条件下人乳腺癌HCC1937细胞自噬的影响。方法 培养人乳腺癌HCC1937细胞,以CCK-8法分别测定常氧及缺氧条件下不同浓度BBR(0,5,10,20,40,80,160 μmol·L^-1)对细胞活力的影响,选择用于进一步实验的药物浓度;将培养的HCC1937细胞随机分为4组：对照组,20 μmol·L^-1 BBR组,缺氧组,缺氧+20 μmol·L^-1 BBR组。LIVE/DEAD细胞活力/细胞毒性试剂盒测定细胞死亡率。Western blotting测定自噬相关蛋白Beclin1、LC3及P62的表达。以mCherry-GFP-LC3腺病毒感染细胞,激光共聚焦显微镜成像并计数各组单个细胞内自噬体及自噬溶酶体的数目,判定BBR对HCC1937细胞自噬流的影响。结果 BBR呈浓度依赖性地降低人乳腺癌HCC1937细胞的细胞活力;缺氧处理后HCC1937细胞的死亡率无显著改变,细胞内Beclin1、LC3-II及LC3-II/LC3-I的比值显著增加,P62无显著改变,自噬流增强;常氧及缺氧条件下BBR都能显著增加细胞的死亡率,降低Beclin1及LC3II/LC3-I的比值,增加细胞内P62,显著减少自噬体及自噬溶酶体的数量,抑制自噬体的形成及清除。结论 BBR增加缺氧条件下人乳腺癌HCC1937细胞的死亡率,其作用与BBR抑制缺氧条件下细胞自噬的作用相关。     

芦荟大黄素对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53/AMPK/mTOR信号通路的影响

摘 要 目的：探讨芦荟大黄素（AE）对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53蛋白（p53）/磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。 方法: 实验分为对照组（AE 0 μmol·L-1）、AE低（10 μmol·L-1）、中（30 μmol·L-1）、高（50 μmol·L-1）剂量组和自噬阻断剂3 甲基腺嘌呤（3 MA）+ AE组（20 μmol·L-1+50 μmol·L-1）。CCK 8法检测各组细胞增殖抑制率,采用透射电镜及单丹磺酰尸胺（MDC）染色观察各组细胞自噬体及自噬溶酶体的变化,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定（TUNEL）法观察各组细胞凋亡率变化,Western blot法检测各组细胞p53、AMPK、mTOR信号通路蛋白及自噬标致蛋白Beclin 1蛋白（Beclin 1）、微管相关轻链蛋白Ⅰ（LC3Ⅰ）及微管相关轻链蛋白Ⅱ（LC3Ⅱ）表达情况。 结果: 与对照组相比,AE各剂量组及3 MA+AE组细胞的增殖抑制率、凋亡指数（AI）显著升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性;AE中、高剂量组的增殖抑制率和AI与3 MA+AE组相比差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,AE各剂量组细胞自噬体、自噬空泡增多,溶酶体积分光密度（IOD）/所选区域面积（Area）值及p53、AMPK、Beclin 1表达显著升高,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性;3 MA+AE组细胞自噬体、自噬空包等超微结构减少,IOD/Area值及p53、AMPK及Beclin 1表达显著降低,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著升高（P<0.05）。 结论: AE可通过提高胃癌SGC-7901细胞自噬水平,诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与促进p53/AMPK/mTOR信号通路表达有关。     

二氢杨梅素对胶质瘤细胞株U87增值凋亡及PI3K/Akt通路的影响

摘 要 目的：探讨二氢杨梅素（DMY）对胶质瘤细胞株U87增殖、凋亡、自噬及磷脂酰肌醇 3激酶/丝 苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）信号通路的影响。 方法: 体外培养胶质瘤U87细胞,U87细胞分为4组：空白对照组、DMY低（25 μmol·L-1）、中（50 μmol·L-1）、高（100 μmol·L-1）剂量组。采用MTT法检测U87细胞增殖情况,Hoechst染色法检测U87细胞凋亡,透射电镜下观察自噬体形成,蛋白印迹（WB）法检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤 2（Bcl 2）及其相关蛋白（Bax）、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3（cleaved caspase 3）、自噬相关蛋白Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、P62及PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K及其磷酸化激酶（p PI3K）、Akt及其磷酸化蛋白（p Akt）表达。 结果: 与空白对照组相比,DMY处理后U87细胞存活率、P62、Bcl 2、p PI3K及p Akt蛋白表达量均显著降低（P＜0.05）,且高剂量组显著低于低、中剂量组（P＜0.05）;与空白对照组相比,DMY处理后U87细胞凋亡率、自噬体数量、自噬泡/胞质总面积、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值、LC3 Ⅱ、Beclin 1、Bax及cleaved caspase 3蛋白表达量均显著升高（P＜0.05）,且高剂量组显著高于低、中剂量组（P＜0.05）。 结论: 二氢杨梅素可有效抑制胶质瘤U87细胞增殖,并可诱导自噬发生促使细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

细胞自噬在心血管疾病发病过程中的作用

心血管疾病是一类危害心脏和血管功能的疾病,其发病是一个复杂的病理生理过程。细胞自噬（ autophagy）是一种广泛存在于真核细胞、进化上高度保守的细胞降解过程。饥饿、缺血、氧化应激等均可诱导其发生。自噬在细胞的生长、代谢、死亡等过程中起至关重要的作用,也参与了多种疾病的发生。近期发现,自噬与心血管疾病的发生、发展密切相关。正常的细胞自噬对心肌细胞有保护作用,自噬不足或自噬过度则可促发疾病或加重病变,本文对细胞自噬在心血管疾病发病中的作用做一综述。     

芪血通络片联合依达拉奉治疗急性脑梗死的临床研究

目的 研究山楂酸对鼻咽癌CNE2细胞增殖和自噬的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR通路在该过程中的调控作用。方法 采用CCK-8法检测不同浓度的山楂酸作用不同时间对CNE2细胞增殖的影响;MDC染色法检测不同浓度山楂酸处理CNE2细胞24 h后自噬小体的形成情况;Western blotting法检测山楂酸对CNE2细胞自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达的影响。结果 与溶剂对照组相比,山楂酸可以抑制CNE2细胞的增殖,而且随药物处理时间和浓度的增加,抑制效果增强（P<0.05）;山楂酸能够诱导细胞自噬小体的形成,且可显著提高Atg5和LC3-II/LC3-I的表达,降低p62的表达;此外,山楂酸可抑制PI3K-p110α、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达。结论 山楂酸可抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导鼻咽癌细胞发生自噬,其机制与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关,可作为治疗鼻咽癌的潜在药物研究。     

Approaches for discovering novel bioactive small molecules targeting autophagy

Introduction: In recent years, development of novel bioactive small molecules targeting autophagy has been implicated for autophagy-related disease treatment. Screening new small molecules regulating autophagy allows for the discovery of novel autophagy machinery and therapeutic agents.

Areas covered: Two major screening methods for novel autophagy modulators are introduced in this review, namely target based screening and phenotype based screening. With increasing attention focused on chemical compound libraries, coupled with the development of new assay systems, this review attempts to provide an efficient strategy to explore autophagy biology and discover small molecules for the treatment of autophagy-related diseases.

Expert opinion: Adopting an appropriate autophagy screening strategy is important for developing small molecules capable of treating neurodegenerative diseases and cancers. Phenotype based screening and target based screening were both used for developing effective small molecules. However, each of these methods has many pros and cons. An efficient approach is suggested to screen for novel lead compounds targeting autophagy, which could provide new hits with better efficiency and rapidity.     

Novel pharmacological modulators of autophagy: an updated patent review (2012-2015)

Introduction: Autophagy is a lysosome-dependent degradation pathway that maintains cellular homeostasis in response to a variety of cellular stresses. Accumulating reports based on animal models have indicated the importance of this catabolic program in many human pathophysiological conditions, including diabetes, neurodegenerative diseases, aging, and cancers. Therefore, autophagy has been highlighted as a novel therapeutic target with a wide range of beneficial effects on human diseases. Here, we review the recent advances of our knowledge toward autophagy, as well as the efforts for developing autophagy modulators.

Areas covered: The relevant patents (published at 2012–2015) and the research literature claiming the pharmacological modulation of autophagy are reviewed. Also, their molecular mechanisms and potential therapeutic utilities are discussed.

Expert opinion: Considering the molecular machinery involved in autophagy induction, the targeting of autophagy-specific protein is very important to design the therapeutic interventions for specifically treating a variety of autophagy-associated disorders. Many patents and the research literature described in this review have shown promising applications of the relevant autophagy modulators for cancer or neurodegeneration treatments, a few of which are already being considered for clinical evaluation. However, most patents have claimed the modulators of autophagy with little information regarding their mechanisms of action. To design highly potent therapeutics, further work, such as developing compounds that specifically target the autophagy-specific machinery, are required.     

Application and interpretation of current autophagy inhibitors and activators

Autophagy is the major intracellular degradation system, by which cytoplasmic materials are delivered to and degraded in the lysosome. As a quality control mechanism for cytoplasmic proteins and organelles, autophagy plays important roles in a variety of human diseases, including neurodegenerative diseases, cancer, cardiovascular disease, diabetes and infectious and inflammatory diseases. The discovery of ATG genes and the dissection of the signaling pathways involved in regulating autophagy have greatly enriched our knowledge on the occurrence and development of this lysosomal degradation pathway. In addition to its role in degradation, autophagy may also promote a type of programmed cell death that is different from apoptosis, termed type II programmed cell death. Owing to the dual roles of autophagy in cell death and the specificity of diseases, the exact mechanisms of autophagy in various diseases require more investigation. The application of autophagy inhibitors and activators will help us understand the regulation of autophagy in human diseases, and provide insight into the use of autophagy-targeted drugs. In this review, we summarize the latest research on autophagy inhibitors and activators and discuss the possibility of their application in human disease therapy.     

Sirt1在心血管衰老中的作用机制研究进展

Sirt1是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD⁺）的一类高度保守的去乙酰化酶,可将多种组蛋白和非组蛋白去乙酰化参与胰岛素分泌、血管生成、神经保护及细胞衰老等生理过程。Sirt1与心血管疾病、神经退行性疾病等衰老相关疾病的发病机理密切关系。在心血管系统中,大量研究证实,Sirt1可延缓内皮细胞衰老,改善内皮细胞功能,维持血管内稳定,从而对动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤、心血管衰老具有重要调节作用。目前,Sirt1作为一个长寿因子受到普遍关注。本文主要从氧化应激、炎症、自噬三个方面阐述Sirt1对心血管衰老的作用机制,为寻求和研发延缓心血管衰老药物提供实验依据。     

自噬信号通路与心血管疾病的研究进展

自噬是指自噬溶酶体将自身的细胞器分解并回收利用的一种细胞降解过程,广泛存在于机体组织中。在正常情况下,自噬活动水平在维持细胞的稳态和功能中发挥着重要作用;过量或不足的自噬通量水平都可能导致疾病的发生。在本文中,我们讨论了自噬的概念分类以及自噬信号通路的研究进展,并阐述了自噬对心血管疾病的影响。     

Targeting autophagy and mitophagy for mitochondrial diseases treatment

Introduction: Mitochondrial diseases are a group of rare genetic diseases with complex and heterogeneous origins which manifest a great variety of phenotypes. Disruption of the oxidative phosphorylation system is the main cause of pathogenicity in mitochondrial diseases since it causes accumulation of reactive oxygen species (ROS) and ATP depletion.

Areas covered: Current evidences support the main protective role of autophagy and mitophagy in mitochondrial diseases and other diseases associated with mitochondrial dysfunction.

Expert Opinion: The use of autophagy and/or mitophagy inducers may allow a novel strategy for improving mitochondrial function for both mitochondrial diseases and other diseases with altered mitochondrial metabolism. However, a deeper investigation of the molecular mechanisms behind mitophagy and mitochondrial biogenesis is needed in order to safely modulate these processes. In the coming years, we will also see an increase in awareness of mitochondrial dynamics modulation that will allow the therapeutic use of new drugs for improving mitochondrial function in a great variety of mitochondrial disorders.     

The use of terpenes and derivatives as a new perspective for cardiovascular disease treatment: a patent review (2008–2018)

Introduction: Terpenes are a class of secondary metabolites that can be found in a variety of animal and plants species. They are considered the most structurally diversified and abundant of all natural compounds. Several studies have shown the application of terpenes, such as carvacrol, linalool, and limonene in many pharmaceutical and medicinal fields, including cardiovascular disorders, the leading cause of death worldwide. Areas covered: In this review, the authors outlined patents from the last 10 years relating to the therapeutic application of terpenes for the treatment and/or prevention of cardiovascular diseases found in different databases, emphasizing the possibility of these compounds becoming new drugs that may help to decrease the burden of these disorders. Expert opinion: There has been a growing awareness over recent years of the therapeutic use of terpenes and their derivatives as new pharmaceutical products. Patents involving the use of terpenes have been especially important in the technological development of new strategies for the treatment of cardiovascular diseases by bringing new scientific knowledge into the pharmaceutical industry. Therefore, the development of biotechnologies using natural products should be encouraged in order to increase the variety of drugs available for the treatment of cardiovascular diseases.     

黄酮类化合物抗心脑血管缺血性疾病作用的研究进展

黄酮类化合物是一种广泛存在于传统中药中的次生代谢产物,拥有许多生物活性和药理作用.近年来,研究发现黄酮类化合物可以通过多种途径在缺血性脑卒中和缺血性心脏病的治疗中发挥有效的保护作用,同时对于其保护作用的机制也有了较为详细系统的阐释.比如黄酮类化合物可以在抗氧化、抑制炎症反应、细胞凋亡和自噬等病理生理机制中发挥有效作用....     

Lox-1—心血管疾病防治的新靶标

目的 Lox-1（血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1）,是ox-LDL的主要受体之一,在血管内皮功能障碍、泡沫细胞形成及动脉粥样硬化斑块的稳定性中具有重要作用。方法为了探讨Lox-1在心血管疾病中的作用,笔者对有关Lox-1在心血管疾病中的研究进展进行回顾性分析。结果 Lox-1作为ox-LDL新型清道夫受体,在心血管疾病的发生发展中具有重要的作用。结论 Lox-1可能为防治心血管疾病的药物研究提供新的思路。